The aim of this thesis is to verify the possibility of simultaneous determination of three structurally related biologically active substances (cholesterol, 7-dehydrocholesterol and cholecalciferol) after previous separation by high-performance liquid chromatography followed by electrochemical (on a boron-doped diamond electrode) and spectrophotometric detection, which were compared in this work. The influence of the water content in the mobile phase (in the range of 0-10 %) on the retention factor of the analytes and their response for both types of detectors was investigated. Using all mentioted water contents, the analytes baseline-separated. As the water content increased, the retention factor of the analytes increased as well as the background current for higher positive detection potentials. Based on the recorded hydrodynamic voltammograms, the optimum detection potential + 1.8 V was chosen. The optimum wavelength for spectrophotometric detection was 200 nm. The concentration dependence was measured in an of 50 mmol l−1 sodium perchlorate in acetonitrile mixed with water (95:5, v/v). The spectrophotometric detector provided lower detection limits compared with the electrochemical detector, which had detection limits of 2.3 μmol l−1 for cholesterol, 1.4 μmol l−1 for 7-dehydrocholesterol and...Obsahem této práce je ověření možnosti současného stanovení tří strukturně příbuzných biologicky aktivních látek (cholesterol, 7-dehydrocholesterol a cholekalciferol) po předchozí separaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií a následné elektrochemické (na borem dopované diamantové elektrodě) a spektrofotometrické detekci, které byly v práci porovnávány. Byl zkoumán vliv obsahu vody v mobilní fázi (v rozsahu 0-10 %) na retenční faktor analytů a jejich odezvu pro oba typy detektorů. Při všech zkoumaných obsazích vody byly analyty separovány až na základní linii. Při zvyšujícím se obsahu vody se zvyšoval retenční faktor analytů a také proud pozadí pro vyšší kladné detekční potenciály. Na základě zaznamenaných hydrodynamických voltamogramů byl určen optimální detekční potenciál + 1,8 V. Optimální vlnová délka pro spektrofotometrickou detekci byla 200 nm. Koncentrační závislost byla naměřena v prostředí 50 mmol l−1 chloristanu sodného v acetonitrilu ve směsi s vodou (95:5, v/v). Nižší hodnoty limitů detekce poskytoval spektrofotometrický detektor oproti elektrochemickému, který měl limit detekce cholesterolu 2,3 μmol l−1 , 7-dehydrocholesterolu 1,4 μmol l−1 a cholekalciferolu 0,6 μmol l−1 . Po extrakci analytů z modelového roztoku umělého séra a vzorku plodové vody bylo zjištěno, že při...Katedra analytické chemieDepartment of Analytical ChemistryFaculty of SciencePřírodovědecká fakult
