ΕΠΙΚΥΡΩΣΗ ΜΕΘΟΔΟΥ GC/HRMS ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΟΣΟΤΙΚΟ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΓΛΥΚΟΥΡΟΝΙΔΙΩΝ ΤΗΣ 19-ΝΟΡΑΝΔΡΟΣΤΕΡΟΝΗΣ ΚΑΙ ΤΗΣ 19-ΝΟΡΕΤΙΟΧΟΛΑΝΟΛΟΝΗΣ ΚΑΙ ΤΟΥ ΛΟΓΟΥ ΤΟΥΣ ΣΕ ΟΥΡΑ ΑΘΛΗΤΩΝ
Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η επικύρωση μεθόδου με την τεχνική GC/HRMS για την ανίχνευσηκαι την ποσοτικοποίηση δύο μεταβολιτών του συνθετικού αναβολικού ναδρολόνης, των γλυκουρονιδίων της 19-νορανδροστερόνης και της 19-νορετιοχολανολόνης, αλλα και του λόγου αυτών.
Με βάση τις οδηγίες του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντιντόπινγκ, κάθε διαπιστευμένο εργαστήριο πρέπει να διαθέτει επικυρωμένη μέθοδο για την ποσοτικοποίηση του λόγου των δύο μεταβολιτών για τις περιπτώσεις όπου δεν μπορεί να διευκρινιστεί αν επρόκειτο για ενδογενή ή εξωγενή προέλευση του γλυκουρονιδίου της 19-νορανδροστερόνης. Αν ο λόγος των δύο μεταβολιτών (19-ΝΑ/19-ΝΕ), είναι μικρότερος του 3 τότε οφείλεται σε ενδογενή παραγωγή.
Για την επεξεργασία των δειγμάτων, πραγματοποιήθηκε υγρό-υγρό εκχύλιση. Η ανάλυση των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε με αεριοχρωματογραφικό σύστημα σε συνδυασμό με το φασματόμετρο μαζών μαγνητικού τομέα διπλής εστίασης, υψηλης διαχωριστικής ικανότητας (GC/HRMS). Για τον ιοντισμό των ουσιών, έγινε χρήση ιοντισμούμε πρόσκρουση ηλεκρονίων (electron impact, (+) EI).
Για την αξιολόγηση και επικύρωση της μεθόδου, ελέγχθηκαν και υπολογίστηκαν ο σχετικός χρόνος ανάσχεσης, η γραμμικότητα, η ειδικότητα της αναλυτικής μεθόδου, η διακύμανση της ευαισθησίας, το όριο ανίχνευσης και ποσοτικοποίησης για κάθε μία από τις δύο ουσίες, η ενδιάμεση πιστότητα της μεθόδου, η επαναληψιμότητα, ο έλεγχος επιμόλυνσης και η αβεβαιότητα της μεθόδου.
Συμπερασματικά η μέθοδος αξιολογήθηκε ως επαρκής και κατάλληλη για το σκοπό για τον οποίο αναπτύχθηκε.The purpose of this Master Thesis was the validation of a GC/HRMS method for the detection and quantification of two metabolites of synthetic anabolic Nadrolone, glucuronides of 19-norandrosterone and 19-norcholanolone, but also their ratio.
Based on the World Anti-Doping Agency guidelines, each accredited laboratory must have a validated method for quantifying the ratio of the two metabolites in cases where it can not be determined whether it was an endogenous or exogenous origin of 19-norandrosterone glucuronide. If the ratio of the two metabolites (19-NA / 19-NE) is less than 3 then it is due to endogenous production.
For the sample processing liquid-liquid extraction was performed. The analysis of the samples was performed by with a gas chromatographic system combined with the mass spectrometer detector (GC / HRMS). Analytes were ionized with an electron ionization (electron impact, (+) EI).
For the evaluation and validation of the method, the relative retention time, linearity, specificity, sensitivity variance, limit of detection and quantification for each of the two substances, the intermediate precision of the method, the repeatability, the carry over, and method uncertainty.
In conclusion, the method was assessed as adequate and appropriate for the purpose for which it was developed
