En este trabajo se describen las ectomicorrizas presentes en 16 plantas de Quercus ilex L. subsp. ballota (Desf.) Samp. de 22 años, de la finca de 600 ha que gestiona AROTZ-CATESA en el término municipal de Villaciervos (Soria). Además se presentan los porcentajes de micorrización de
las ectomicorrizas más interesantes. Este estudio se incluye dentro del proyecto LIFE 99
ENV/E/000356 “Revalorización de bosques productores de trufa: un ejemplo de gestión sostenible”. SUMMARY:
This study describes the ectomycorrhiza occurring in 16 twenty-two years old seedlings of
Quercus ilex L. subsp. ballota (Desf.) Samp., in the plot of 600 ha that AROTZ-CATESA manages in
of Villaciervos (Soria). Mycorrhization percentages of the most interesting ectomycorrhiza are also
reported. This study is included in the project LIFE 99 ENV/E/000356 "Truffled Mediterranean forest
improvement: an example of sustanaible management”

Agueda, B. (Beatriz)

Fernandez-Toiran, L.M. (Luz Marina)

Miguel-Velasco, A.M. (Ana Maria) de

Universidad de Navarra

Ectomicorrizas presentes en la plantación trufera “Los Quejigares” (Soria)

Dadun, University of Navarra

ECTOMICORRIZAS PRESENTES EN LA PLANTACION TRUFERA “LOS QUEJIGARES” (SORIA)   ÁGUEDA HERNÁNDEZ, B.1; FERNÁNDEZ TOIRÁN, M.1; DE MIGUEL VELASCO, A.M.2 1Dpto. de Investigación Forestal de Valonsadero. Consejería de Medio Ambiente. Junta de Castilla yLeón. Apdo. de correos 175. 42080 Soria. E-mail: valonsad@ctv.es 2Universidad de Navarra. Facultad de Ciencias. Departamento de Botánica. 31008 Pamplona. E-mail: amiguel@unav.es   RESUMEN:             En este trabajo se describen las ectomicorrizas presentes en 16 plantas de Quercus ilex L. subsp. ballota (Desf.) Samp. de 22 años, de la finca de 600 ha quegestiona AROTZ-CATESA en el término municipal de Villaciervos (Soria). Además se presentan los porcentajes de micorrización delas ectomicorrizas más interesantes. Este estudio se incluye dentro del proyecto LIFE 99ENV/E/000356 “Revalorización de bosques productores de trufa: un ejemplo de gestión sostenible”. P. C.: ectomicorrizas, truficultura, Tuber melanosporum Vitt.   SUMMARY:             This study describes the ectomycorrhiza occurring in 16 twenty-two years old seedlings of Quercus ilex L. subsp. ballota (Desf.) Samp., in the plot of 600 ha that AROTZ-CATESA manages in of Villaciervos (Soria). Mycorrhization percentages of the most interesting ectomycorrhiza are alsoreported. This study is included in the project LIFE 99 ENV/E/000356 "Truffled Mediterranean forestimprovement: an example of sustanaible management”. K.W.: ectomycorrhiza, truffle-growing, Tuber melanosporum Vitt.   INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS             En 1979, AROTZ-CATESA estableció una plantación de encina (Quercus ilex L. subsp. ballota (Desf.) Samp.) micorrizada con Tuber melanosporum Vitt., en una finca situada en una zona productora de trufa negra del término municipal de Villaciervos (Soria). En el otoño de 1999, secomenzaron a estudiar las ectomicorrizas presentes en este lugar con el objeto de obtener porcentajesde micorrización de Tuber melanosporum que indiquen el grado de permanencia de este hongo en lasraíces de sus plantas y las especies ectomicorrícicas competidoras. Además, se han muestreadoplantas no productoras de trufa con el objeto de conocer su composición micorrícica y contrastarlacon la de las productoras.   MATERIAL Y MÉTODOS Esta finca se encuentra situada a una altitud media de 1250 m y sus terrenos son calizos y bienaireados, el marco de plantación de las encinas es de 6 x 6 m en 400 ha y de 2,5 x 7 m en las 200 harestantes. Es una de las plantaciones más antiguas de España y la más grande del mundo y seencuentra en plena fase de producción.             Para el presente estudio se eligieron cuatro zonas contiguas en la parte de la finca plantada amarco de 6 x 6. De estas cuatro zonas, tres (2-1, 2-2 y 2-3) sufren un laboreo cada primavera y una (2-4) permanece como testigo. En cada zona se escogieron cuatro árboles, tres productores de trufa negray uno no productor. En total se estudian dieciséis encinas: cuatro no productoras de trufa (A-12, A-8, A-5 y A-1) y doce productoras.             Para el estudio de las ectomicorrizas de estos árboles se realizan dos muestreos anuales, unoen primavera y otro en otoño, tratando de tomar muestras de las raíces de encina en la zona superficial(10-20 cm) cercana al árbol, sin dañarlo. En la recolección de muestras se sigue el método globalpropuesto por VERLHAC et al. (1990).             Tras su extracción las muestras se conservan en cámara de frío a 4 ºC hasta su estudio en laboratorio, para ello, se lavan ligeramente y se introducen en el baño de ultrasonidos durante quinceminutos. Si es necesario se completa la limpieza utilizando pinceles y agujas.             Bajo la lupa binocular se procede al conteo de los ápices, diferenciando entre los nomicorrizados y los micorrizados, y de entre estos, los micorrizados con T. melanosporum y con otros hongos. Las micorrizas no identificadas se conservan con lactoglicerol para su posterior caracterización.   RESULTADOS   TABLA 1. Porcentajes de micorrización en los árboles (productivos (P) y no productivos (NP)) y en las zonas estudiadas en los muestreos de otoño de 1999 (I99) y primavera de 2000 (P00).               Tras dos muestreos, realizados en el otoño de 1999 y la primavera del 2000, los resultadosobtenidos en cuanto a porcentajes de micorrización se resumen en la Tabla 1, hay que señalar que losárboles A-15 y A-14 no se pudieron muestrear en el otoño de 1999.              Asimismo, en la siguiente figura, se observa la diferencia en los porcentajes de Tuber melanosporum en los árboles y en las zonas de la finca estudiadas.Zona Árbol P / N P   % Micorrizas % Micorrizas T. melanosporum% Otras Micorrizas 2-1 A-11 P I99 0     P00 37,31 46,35 53,65 2-1 A-12 N P I99 0,44 100 0 P00 79,47 48,09 51,91 2-1 A-13 P I99 12,16 0 100 P00 82,75 100 0 2-1 A-14 P P00 54,83 91,43 8,57 2-1 TOTAL I99 1,11 30,77 69,23 P00 64,76 61,85 38,15 2-2 A-8 N P I99 30,60 0 100 P00 51,38 50,77 49,23 2-2 A-9 P I99 99,55 100 0 P00 95,63 100 0 2-2 A-10 P I99 0     P00 26,19 81,82 18,18 2-2 A-15 P P00 57,52 81,22 18,78 2-2 TOTAL I99 95,51 98,69 1,31 P00 68,50 88,25 11,75 2-3 A-5 N P I99 21,85 0 100 P00 39,35 0 100 2-3 A-6 P I99 93,60 100 0 P00 67,61 90,11 9,89 2-3 A-7 P I99 96,94 100 0 P00 60,40 99,30 0,70 2-3 A-16 P I99 0     P00 0     2-3 TOTAL I99 84,99 96,85 3,15 P00 53,38 72,80 27,20 2-4 A-1 N P I99 2,37 100 0 P00 5,58 0 100 2-4 A-2 P I99 93,26 98,75 1,25 P00 41,33 0 100 2-4 A-3 P I99 0     P00 9,89 30,30 69,70 2-4 A-4 P I99 23,60 96,19 3,81 P00 61,77 100 0 2-4 TOTAL I99 51,18 98,52 1,48 P00 21,90 58,26 41,74 TOTAL I99 76,20 97,97 2,03 P00 51,12 70,20 29,80   FIGURA 1. Porcentaje de micorrización por Tuber melanosporum en cada árbol de las distintas zonas y en el total de cada área estudiada.               A continuación se indican las ectomicorrizas identificadas en cada árbol en el muestreo deprimavera de 2000 y su abundancia. Señalar la gran abundancia de Tuber melanosporum Vitt. y también de Cenoccocum geophylum Fr.   TABLA 2. Ectomicorrizas identificadas en el muestreo de primavera de 2000 y grado de presencia.                   Las características de los morfotipos de las ectomicorrizas identificadas y no identificadas másinteresantes se describen a continuación, siguiendo las directrices marcadas por AGERER (1987-1998), BENCIVENGA et al. (1995), SÁEZ & DE MIGUEL (1995), DONNINI & BENCIVENGA(1995), INGLEBY et al. (1990) y VOIRY (1981).       TABLA 3. Características de los morfotipos más interesantes.   Árbol Tuber melanosporum Cenoccocum geophylum Tipo HebelomaTipo AD Tipo PisolithusTipo CortinariusTipo Dark Otras micorrizasA-11          A-12          A-13          A-14          A-8          A-9          A-10          A-15          A-5          A-6          A-7          A-16          A-1          A-2          A-3          A-4            >80%   60-80% 40-60% 20-40%   <20%Morfotipo Descripción macroscópica Manto Hifas emergentes Rizomorfos CistidiosCaracterísticas FíbulasTuber Color dorado, Pseudoparenquimatoso, Escasas, ramificadas en No Ausentes Ausentes              CONCLUSIONES Y DISCUSIÓN Se ha observado un elevado porcentaje de micorrizas de Tuber melanosporum en los dos muestreos de cada una de las áreas estudiadas, así se obtiene un porcentaje medio para la zonaestudiada del 97,97 % en el otoño de 1999 y del 70,20 % en la primavera de 2000. Hay que señalar lapresencia de carpóforos de trufa negra en alguno de los muestreos. Destaca también la presencia de micorrizas de T. melanosporum en tres de los cuatro árboles considerados no productores de trufa (A-12, A-8 y A-1). Se desconoce cual es el factor que causa la esterilidad de estos árboles a pesar de estar micorrizados. Sólamente en uno de los árboles, A-5, no se han encontrado estas ectomicorrizas. Por otra parte, no se han observado diferencias en los porcentajes de micorrización con T. melanosporum entre las tres zonas labradas y la zona sin labrar, se tiene una media del 75,44 % en elotoño de 1999 y del 74,30 % en la primavera de 2000 para la zona labrada y de 98,52% en el otoño de1999 y 58,26% en la primavera de 2000, para la zona sin labrar. En los dos muestreos realizados se han encontrado 32 morfotipos de ectomicorrizas, de losque 7 han sido identificados, el resto permanece todavía sin identificar, y las características de las másinteresantes aparecen resumidas en la Tabla 3. Cenococcum geophylum es la micorriza competidora más abundante en el muestreo deprimavera de 2000, aparece conviviendo con elevados porcentajes de Tuber melanosporum en 6 de los 16 árboles estudiados, por lo que parece indicar que no desplazaría a esta especie. Señalar laimportancia forestal de esta micorriza que se considera una de las más eficaces contra la sequía, y quees uno de los pocos morfotipos que siempre forma parte de las comunidades ectomicorrícicas de laencina (DE ROMÁN et al., 1999). Otro hecho a destacar es la presencia de micorrizas de Tipo Hebeloma en tres de los cuatro árboles no productores. La presencia de Hebeloma es considerada perjudicial, pudiendo provocar la falta de producción en los árboles. Señalar que se han encontrado carpóforos de dos de los morfotipos descritos. Las especiesmelanosporum lisa con células en forma de puzzle ángulo rectoCenoccocum geophylum Negra, corta, raramente ramificada Plectenquimatoso, con las hifas dispuestas en forma de estrella Negras, rectas y septadas No Ausentes AusentesTipo Hebeloma Monopódicas, peludas, blanquecinas Plectenquimatoso, con las hifas hialinas Abundantes, densas e hialinas Sí Gruesos, blanquecinos y abundantes AusentesTipo AD Lanoso Pseudoparenquimatoso poligonal Ramificadas en ángulo recto abundantementeNo Ausentes AusentesTipo Pisolithus Blanquecina, algodonosa Pseudoparenqimatoso, con células poligonales Lisas, muy abundantes, ramificadas en ángulo recto Sí Lisos, gruesos, con fíbulas, ramificados en ángulo recto, con agrupaciones de células globosas AusentesTipo Cortinarius Blanquecinas, algodonosas Pseudoparenquimatoso, con células formando estructuras de rosetasMuy abundantes, con numerosas anastomosis, hialinasSí Gruesos, ramificados en Y AusentesTipo Dark Negras, lisas Muy oscuro, no se puede clasificar Ausentes   Ausentes AusentesA3/P00/M21 Color marrón claro recubierto por micelio algodonoso blanquecino Pseudoparenquimatoso, con células en forma de puzzle, color dorado Color ocre amarillento, rizadas, ramificadas casi en ángulo recto, con protuberancias en forma de codoNo Ausentes AusentesA11/P00/M09 Color marrón oscuro, poco ramificada Plectenquimatoso, de color dorado Dorado, grueso, con la superficie lisa, apenas ramificadoNo Muy gruesos y abundantes, de color dorado, se ramifican en V AusentesA12/P00/M04 Color marrón oscuro, muy lanosa Pseudoparenquimatoso, muy oscuro Tortuosas, enrolladas, muy abundantes, con la superficie punteada, acodadas, hialinas, algunas con terminaciones en forma de llamaNo Ausentes AusentesA5/P00/M08 Blanquecina, con la superficie algodonosa Pseudoparenquimatoso Hialinas, muy rizadas Sí Gruesos, con aglomeraciones de células globosas AusentesA8/P00/M01 Ocre, lanosa, de ramificación pinnada Pseudoparenquimatoso, poligonal pardo-rojizo, recubierto de una capa de hifas laxa Amarillentas, finas, de paredes gruesas, muy enredadas, ramificadas en Y, bastante curvadasSí Ausentes Ausentesrecolectadas han sido Hebeloma sinapizans (Paulet: Fr.) Gillet, Hebeloma crustuliniforme(Bull.: Fr.) Quél. y Cortinarius spp., también se han encontrado ejemplares de los génerosScleroderma  e Inocybe. Una vez instaladas en campo, no se puede preservar a las plántulas de la entrada en su sistemaradical de distintas especies fúngicas micorrícicas, que a lo largo de los años se suceden en lacolonización, como un mecanismo natural de competencia. El hecho de que en encinas productoras de trufa negra convivan otras especies de hongosdistintas, pone de manifiesto que en la naturaleza, el equilibrio entre las mismas se da sin necesidadde la intervención humana. Por otra parte, el disponer de árboles no productores que presentan otrasmicorrizas competidoras, hace pensar en la posibilidad de que sea alguna de ellas la causante de estehecho.             Finalmente, hay que señalar que al tratarse solamente de dos muestreos, los resultados sonpreliminares, a la espera de encontrar nuevos datos en futuras recolecciones.               AGRADECIMIENTOS             Agradecemos a la empresa AROTZ-CATESA las facilidades ofrecidas en la realización deeste trabajo.   BIBLIOGRAFÍA AGERER, R. (1987-1998). Colour atlas of ectomycorrhizae. Eirhorn-Verlag, Berlín. BENCIVENGA, M.; DI MASSIMO, G.; TANFULLI, M. (1995). Micorrize inquinanti frequenti nelle piante tartufigene. Nota 1-Inquinanti in vivaio. Micol. Ital. (1995) 2: 167-178. DE ROMÁN, M.; DE MIGUEL, A.M.; ETAYO, M.L. (1999). Ectomycorrhizal morphotypes identified in two sites (burned and non-disturbed) in a Quercus ilex L. subsp. ballota (Desf.) Samp. forest in Navarra (Spain). Pub. Bio. Univ. Navarra, Ser. Bot., 12: 45-57. DONNINI, D.; BENCIVENGA, M. (1995). Micorrize inquinanti frequenti nelle piante tartufigene.Nota 2-Inquinanti in campo. Micol. Ital. (1995) 2: 185-207. INGLEBY, K.; MASON, P.A.; LAST, F.T.; FLEMING, L.V. (1990). Identification of ectomycorrhizas. I.T.E. research publication nº 5. Edinburgh Research Station, Scotland. 112 pp. SÁEZ GARCÍA FALCES, R.; DE MIGUEL VELASCO, A.M. (1995). Guía práctica de truficultura.I.T.G. Agrícola & Universidad de Navarra, Pamplona. 94 pp. VOIRY, H. (1981). Classification morphologique des ectomycorrhizes du chêne et du hêtre dans lenord-est de la France. Eur. J. For. Path. 11: 2284-2299. VERLHAC, A.; GIRAUD, M.; LETEINTURIER, J. (1990). La truffe guide pratique. CTIFL, París. 108 pp.          FIGURA 2. Morfotipos de ectomocorrizas. a) Tuber melanosporum Vitt., micorrizas pinnadas (2X); b) Cenococcum geophylum Fr., micorriza con hifas emergentes (4X); c) Tipo Hebeloma, hifas con fíbulas (100X); d) Cenoccocum geophylum Fr., manto estrellado (100X); e) Morfotipo A5/P00/M08, rizomorfo con aglomeraciones de células globosas (100X); f) Morfotipo A12/P00/M04, terminación de hifa en forma de llama (100X). 

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