山岡 愛主

志摩 亜季保

松岡 浩史

道原 明宏

志摩, 亜季保

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松岡, 浩史

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山岡, 愛主

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道原, 明宏

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Fukuyama University Repository / 福山大学学術情報リポジトリ

－ 37 －ヒト脳血管内皮細胞におけるCLDND1転写はミエロイドジンクフィンガー1により調節される志摩亜季保、松岡浩史、山岡愛主、道原明宏Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology, 48(2), 260-269 (2021).Transcription of CLDND1 in human brain endothelial cells is regulated by the myeloid zinc fi nger 1Akiho Shima, Hiroshi Matsuoka, Alice Yamaoka, and Akihiro MichiharaABSTRACT  Increased permeability of endothelial cells lining the blood vessels in the brain leads to vascular oedema and, potentially, to stroke. The tight junctions (TJs), primarily responsible for the regulation of vascular permeability, are multi-protein complexes comprising the claudin family of proteins and occludin. Several studies have reported that downregulation of the claudin domain containing 1 (CLDND1) gene enhances vascular permeability, which consequently increases the risk of stroke. However, the transcriptional regulation of CLDND1 has not been studied extensively. Therefore, this study aimed to identify the transcription factors (TFs) regulating CLDND1 expression. A luciferase reporter assay identified a silencer within the first intron of CLDND1, which was identified as a potential binding site of the myeloid zinc fi nger 1 (MZF1) through in silico and TFBIND software analyses, and confi rmed through a reporter assay using the MZF1 expression vector and chromatin immunoprecipitation (ChIP) assays. Moreover, the transient overexpression of MZF1 significantly increased the mRNA and protein expression levels of CLDND1, conversely, which were suppressed through the siRNA-mediated MZF1 knockdown. Furthermore, the permeability of FITC-dextran was observed to be increased on MZF1 knockdown as compared to that of the siGFP control. Our data revealed the underlying mechanism of the transcriptional regulation of CLDND1 by the MZF1. The fi ndings suggest a potential role of MZF1 in TJ formation, which could be studied further and applied to prevent cerebral haemorrhage. 抄録　脳血管内皮細胞における物質透過性の亢進は、血管浮腫を引き起こし、脳卒中を惹起する。血管における物質透過性は、クローディンやオクルディンにより形成される密着結合により調節される。これまで我々は、脳出血誘発マウスにおいてクローディンファミリーに属する CLDND1の発現低下により物質透過性が亢進することを報告している。これらのことから、脳卒中発症の原因である物質透過性の亢進は、CLDND1の発現低下によっても誘発されると考えられる。しかし、CLDND1の転写調節はあまり研究されていない。そこで、本研究では、CLDND1発現に影響を及ぼす転写因子の同定を試みた。レポーター解析の結果、CLDND1の第１イントロン内にサイレンサーが示された。サイレンサーに結合する転写因子を TFBIND解－ 38 －析で検索したところ、Myeloid Zinc Finger 1（MZF1）が見出された。MZF1発現ベクターを用いたレポーター解析およびクロマチン免疫沈降法によりMZF1がサイレンサーに結合し、アクチベーターとして作用することが示唆された。また、MZF1一過性発現系においてMZF1発現増加に伴う CLDND1の有意な発現増加が示された。siRNAを用いたMZF1ノックダウンにおいて CLDND1の有意な発現低下が示された。さらに、MZF1ノックダウン細胞における FITC-デキストランの透過性は、コントロール群と比較して有意な増加が示された。これらの結果は、タイトジャンクション形成におけるMZF1の潜在的な役割を示唆し、脳出血の予防に応用できる可能性がある。

Transcription of CLDND1 in human brain endothelial cells is regulated by the myeloid zinc fi nger 1

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ヒト脳血管内皮細胞におけるCLDND1 転写はミエロイドジンクフィンガー1 により調節される

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