امین مرعشی, سید محمود

شهبازی, غلامحسن

Qazvin University of Medical Sciences Repository

درماني -دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي   قزوین دانشكده پزشكي  (PhD)تخصصي  دکتریپایان نامه جهت اخذ مدرك   عنوان :  in vitro         در (MDR)مقاوم به چند دارو سودوموناس آئروژینوزایاثر کوکتل فاژی تهیه شده بر  و اثر درماني آن در عفونت زخم سوختگي ناشي از این باکتری در مدل حیواني  استاد راهنما :  دکتر سید محمود امین مرعشی  اساتید مشاور:  یكخواهیدکتر فرهاد ن یجواد ریام دکتر  یعباس عالم دکتر  نگارنده : غالمحسن شهبازی شناسی پزشكیگروه میكروب 25نامه:شماره پایان                                     1401-1402سال تحصیلی: چكیده فارسي in vitro ( درMDRمقاوم به چند دارو) سودوموناس آئروژینوزایاثر کوکتل فاژی تهیه شده بر نامه:  عنوان پایان و اثر درمانی آن در عفونت زخم سوختگی ناشی از این باکتری در مدل حیوانیافزایش روز افزون مقاومت های دارویی و سویه های مقاوم به درمان بخصوص در افراد با سیستم  و هدف: سابقهایمنی ضعیف و در بخش های مراقبت ویژه چالش نگران کننده ای برای سیستم بهداشتی و درمانی جهان ایجاد ایمنی، بیماران  های سوختگی حاد بعلت ایجاد شكاف در سد حفاظتی پوست و تضعیف سیستم زخمکرده است. درصد مرگ و میرهای بعد از  ۷0را بسیار حساس به عفونتهای باکتریایی می کند، بطوریكه در مطالعات مختلف شیوع  .سوختگی در خالل پنج روز اول را مستقیم و یا غیرمستقیم ناشی از عفونت های سپتیک اعالم کرده اندختگی و خطر سپسیس و مرگ ناشی از آن نیز نگرانی عمده در عفونت های زخم سو سودوموناس آئروژینوزاباالی کموتراپی ضروری بنظر می جایگزین و یا مكمل بخش های سوختگی می باشد. بر این اساس ارائه درمان های باکتریوفاژها ویروس  این اساس باکتریوفاژها بعنوان یكی از درمان های جایگزین مورد توجه بوده است. بر رسد.ردن سلول بعلت اینكه فاژها قادر به عفونی ک می کنند. و لیز را عفونی ی میزبان خودکه باکتریهاهایی هستند ، فاژدرمانی مناسب استفاده در انسان نبوده و بر روی سایر باکتری های فلور نرمال تاثیری ندارندهای یوکاریوتی سودوموناس آئروژینوزا ویه مقاوم به درمان سعلیه . این مطالعه با هدف جداسازی باکتریوفاژهای موثر بر می باشد   طراحی شد. و بررسی اثر درمانی آنها در ترمیم عفونت زخم سوختگی ناشی از این سویه در مدل حیوانیاز زخم عفونی بیمار ) فقط حساس به کلیسیتین(،  سودوموناس آئروژینوزاسویه مقاوم به درمان  :روش بررسيسوختگی جداسازی و بعد از تعیین هویت فنوتیپی و ژنوتیپی بعنوان میزبان جهت  سوختگی بستری در بخشاستخراج باکتریوفاژ اختصاصی استفاده شد. فاضالب های بیمارستانی بعنوان منابع فاژ جهت استخراج باکتریوفاژ داسازی و فاژهای جاختصاصی استفاده شدند. استخراج فاژهای اختصاصی با استفاده از روش های استاندارد انجام  شده از نظر خصوصیات آزمایشگاهی تعیین هویت شدند. مرفولوژی تعیین سكانس PaBa1 ، تعیین و فاژ (TEM)فاژهای استخراج شده با استفاده از میكروسكوپ الكترونی گذاره (WGS) حیوانی عفونی شده در مدل تهیه شده در درمان زخم سوختگی  فاژی شد. در نهایت اثر درمانی کوکتل بررسی شد.سه فاژ اختصاصی متعلق به خانواده های میوویریده و پودوویریده جداسازی شدند. فاژهای استخراج  :یافته هااختصاصی باکتری میزبان خود بوده و اثر لیز کنندگی بر روی سایر گونه های مورد بررسی نداشتند. فاژهای  ،شدهه و در بود سودوموناس آئروزینوزایر سویه های مقاوم به درمان استخراج شده دارای طیف اثر وسیع بر روی ساپایدار بودند. فاژهای استخراج شده درجه(  ۷0، و نیز شرایط دمایی باال )(pH:3-9)شرایط اسیدی و قلیایی قوی. بودندLatent time: 35-40 min و  Adsorption time: 8-10 min Burst size: 200-250 pfu/cell,دارای هیچ ژن توکسین و یا مقاومت آنتی بیوتیكی شناخته شده ای را نشان نداد. در  PaBa1سكانس کامل ژنوم فاژ ، و تسریع روند بهبودی زخم سودوموناس آئروژینوزادر درمان عفونت زخم ناشی از کوکتل فاژی  ،مدل حیوانی       موثرتر از آنتی بیوتیک عمل کرد.سودوموناس ظهور روز افزون سویه های مقاوم به درمان  در زمینه موجود نگرانی هایبا توجه به  نتیجه گیری :ویژگی های مناسب باکتریوفاژهای استخراج شده در این مطالعه و نتایج مطلوب آنها در درمان زخم  و آئروژینوزاایی های بالینی در کارآزمپیشنهاد می شود عفونی شده در مدل حیوانی و عدم مشاهده عوارض جانبی و مضر، از آنها بعنوان مكمل های درمانی و حتی جایگزین مناسب در شرایط نبود آنتی  و زمینه جهت استفادهاستفاده  .             ایجاد گرددبیوتیک مؤثر  یسوختگزخم  ، مقاومت دارویی چند گانه، باکتریوفاژ،    سودوموناس آئروژینوزاواژگان کلیدی:     Abstract: Background and Aim: Increasing drug resistance and treatment-resistant strains, especially in people with deficient immune system and in intensive care units, has created a worrying challenge for the world's healthcare system. Acute burn wounds, due to disruption of the protective skin barrier and weakening of the immune system, make patients very sensitive to bacterial infections, so that in various studies, 70% of deaths after burns in the first five days are directly or indirectly caused by septic infections. The high prevalence of Pseudomonas aeruginosa in burn wound infections and the risk of sepsis and death due to it is also a major concern of burn wards. Based on this, providing complementary or alternative treatments to chemotherapy seems necessary. Accordingly, bacteriophages have been considered as one of the alternative treatments. Bacteriophages are viruses that infect and lyse their host bacteria. Because phages are not capable of infecting eukaryotic cells and do not affect other bacteria of normal flora, phage therapy is suitable for use in humans. This study was designed with the aim of isolating effective bacteriophages against the treatment-resistant strain of Pseudomonas aeruginosa and investigating their therapeutic effect in healing burn wound infection caused by this strain in an animal model. Methods: Resistant strain of Pseudomonas aeruginosa (colsitin sensitive only ) was isolated from the infected wound of a burn patient hospitalized in the burn ward and after determining the phenotypic and genotypic identity,  was used as  host to extract  specific bacteriophages. Hospital wastewaters were used as sources of phage for the extraction of specific bacteriophage. The extraction of specific phages was done using standard methods and the isolated phages were identified in terms of laboratory characteristics. The morphology of the extracted phages was determined using transmission electron microscopy (TEM) and the PaBa1(one of the extracted phages) was sequenced (WGS). Finally, the therapeutic effect of the prepared phage cocktail in the treatment of infected burn wound was evaluated in an animal model.                         Results: Three specific phages belonging to myoviride and podoviride families were isolated. The extracted phages were specific to their host bacteria and had no lysing effect on other examined species. The extracted phages were broad-spectrum and were effective on other resistant strains of Pseudomonas aeruginosa and were stable in strong acid and alkaline conditions (pH: 3-9), as well as high temperature conditions (70 degrees).   Adsorption time, Burst size and Latent time of  extracted phages were: 8-10 min, 200-250 pfu/cell and 35-40 min respectively. Whole genome sequencing of phage PaBa1, did not reveal any known toxin or antibiotic resistance genes. In animal model, phage cocktail was more effective than antibiotics in treating wound infection caused by Pseudomonas aeruginosa and accelerating the healing process of the wound. Conclusion: According to the existing concerns regarding the increasing emergence of resistant strains of Pseudomonas aeruginosa and the appropriate characteristics of extracted bacteriophages in this study and their favorable results in the treatment of infected wounds in an animal model and the absence of adverse and harmful effects, it is suggested to be used in clinical trials and as therapeutic supplements and even suitable substitutes in the absence of effective antibiotics. Keywords: Pseudomonas aeruginosa, bacteriophage, multidrug-resistance, burn wound  

اثر کوکتل فاژی تهیه شده بر سودوموناس آئروژینوزای مقاوم به چند دارو(MDR) در         in vitro و اثر درمانی آن در عفونت زخم سوختگی ناشی از این باکتری در مدل حیوانی

http://eprints.qums.ac.ir/12353/1/%D8%B4%D9%87%D8%A8%D8%A7%D8%B2%DB%8C.pdf

اثر کوکتل فاژی تهیه شده بر سودوموناس آئروژینوزای مقاوم به چند دارو(MDR) در in vitro و اثر درمانی آن در عفونت زخم سوختگی ناشی از این باکتری در مدل حیوانی

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Qazvin University of Medical Sciences Repository