L'auteur expose le principe et la réalisation technique d'une méthode originale, utilisant T. evansi comme réactif, et permettant la recherche de certaines hydrolases sanguines. Par cette méthode, ont été mises en évidence une maltase dans le sang du cheval, du bouf, du lapin et du rat, et une glycogénase dans le sang du bouf, du lapin et du ra

J. Balis

Revue d’élevage et de médecine vétérinaire des pays tropicaux

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Utilisation de T. evansi : pour la recherche des hydrolases sanguines responsables de la foquation de glucose à partir de différents diholosides et du glycogène par 1. BALIS - avec la collaboraiion teyhnique de Madame CHATELAIN. Par cette méthode, oni été mises en évidence une maltore dons le soog du cheval, du boeuf, du lopin et du rat, et une glycog&ose dans le sang du boeuf. du lapin et du ra+. Lors d’un précédent travail ,(l) consacré au ,métabolisme glucidique de T. evans~ nous avions t,rouvéque ceflagellé étaitapparemment capable d’utiliser outre 3 hexoses (glucose, fructose. mannose). le moltose et le glycogène. En réalité ces deux derniers corps, pour être métobolisés dolvent au préalable subir I’actlon d’une hydrolase sanguine, les transformant en gkcose directement assimilable par T. evans~ (3). L’objet du présent travail est de décrire une technique originale utilisant J. evonsr comme rbatiif et permettant de mettre en évidence ces hydrofoses dans le sang de différentes espèces animales. Matériel et méthodes J. evons~ ne métabolise que 3 glucides (glu- cose, fructose et mannose) et consomme de l’oxygène en présence de ces sucres. Cehit peut-être mis en évidence à l’aide d’une suspension d’hématies dont la couleur passe très nettement du rouge clair au rouge vineux dès que I’hétiogloblne est réduite. Le virage se produit en 30 à 60 minutes si le n’o,mbra de trypanosomes est important. Lors- qu’on introduit dans le milieu u’n diholoside susceptible d’être hydrolysé par une diastase sanguine, le changement de teinte apparaît beaucoup plus t&rdivement en raison du temps nécessaire à /a formation de glucose en quantité suffisante. II est donc possible de déceler une hydrolase sanguine en comparant les résu(tats obtenus dans les tubés suivants : No 1. Dilution de sang à analyser +I solution de diholoside. + 24 heures après, dilution de sang de rat for- tement parasité. No 2. -(effectué en même temps, que In 2e partie du no 1). Dilution de sang à analyser + solution de diholoside + dilution de sang de rat fortement parasité. SI le diholoside est hydrolysé par uné diastase sanguine, on constate un wroge dans le’tube na 1 alors que la teinte du tube no 2 ne varie pas. La réalisation pratique de la méthode est conforme au tableau no 1. Retour au menuOn utilise 6 séries de 6 tubes stérilisés au four Pasteur et numérotés de 1 à 36. Le milieu de dilution a la composition suivante : - Phosphate bipotassique 1 g - Chlorure de sodium ,..,. 0.25 g - Eau distillée.. _. _. 100 ml - Phoiphate monopotassique ‘. Q S pbur obtenir pH 7,4 - Sté?ilisation par chauffage ou f~ltkation sur Seitr. Les sucres sont utilisés sous forme de solutions à 1 p. 1.000 stérilises par filtration. Ce procédé convient mal ou glycogène qui est partiellement reienu sur le disque d’amiante. De ce fait on n’obtient plus exactement une solution à 1 p. 1.000 et pour ce corps les résultats ne peuvent être que qualitatifs. Le sang de rat parasité ainsI que le sang à analyser sont dilués stérilement au 1/30 dans le milieu précédemment décrit. Les séries 1, 2, 3 et 5 sont préparées aseptiquement. Après 24 heures on’ réalise les séries 4 et 6 puis on répartit rapidement la dilution de sang de rat parasité dans les tubes 13 à 36. Le nombre de trypanosomes dans le sang de rat doit ou moins atteindre 500.000 par milli- mètre cube si on veut avoir un virage très net. En examinant le tableau no 1 on voit que la réactton est effectuée sur des concentrations croissanies de wcre, car les vitesses d’hydrolyse et d’utihsation du glucose formé sont propor- tionnelles à ICI concentration du substrat. Après quelques essais nous avons adopté les dilutions suivantes : 1/45.000 - 1;22.500 - 1/15.000 - 1;11.250 - 1/9.000 auxquellès on aJoute un tube témoin, ne contenant pas de sucre (tubes nos 1, 7, 13, 19, 25. 31). Les séries 1 et 2 permettent ‘de vérifier qu’il n’y a pas de virage en l’absence de J. evansi. La comparaison des séries 5 et 6 décèle la présence de I’hydrolase recherchée et par rap- port à la série no 3 (contenant du glucose), on peut évaluer son activité. Enfin l’examen comparatif des séries 3 et 4 permet d’apprécier l’importance de la glyco- lyse sanguine en 24 heures.’ Pour fixer les idées nous donnerons un exemple concret : La recherche,de la moltase dons-k sang de rat fournit les r&ultats suivants : Série no 1, 0 0 0 0 0 0 2. 0 0 0 0 0 0 3* O’ O.‘l,’ 4’ 4 4 4, 0 1 4 4 “,i O ‘O 3 4 4 6. 0 0 0 0 0 Le chiffre 4 représente le virage maximum. Ce dernier est obligatoirement obtenu dans le tube no 24 de la série 4. Avantages de la méthode Elle ne nécessite qu’un matériel réduit et per- met de déceler qualitativement une hydrolase et doser son activité. Il est également possible d’évoluer I’impor- tance de la glycolyse sanguine. Inconvénients Cette méthode nécessite un sang de ,rot très fortement parasité. Elle est valable choque fois que le résultat est positif. Si I’hydrolase recherchée est douée d’une très fable activité, il est alors impossible d’obtenir un virage. Dans ce cas, et si on tient compte des hydroloses. susceptibles d’exister dans le sang de rat, on augmente considérablement la sensi- bilité en comparant la mobilité des trypano- somes (1) dans le premier et le dernier tube des séries 5 et 6. En effet une très faible quantité de glucose ou de fructose est capable de provo- quer une mobilisation et, en l’absence de cette dernière, on peut affirmer que si I’hydrolase existe, son activité est négligeable dons les con- ditions de l’expérience, c’est-à-dire diluée au 1/30 et à la température de 25”. Résultats et discussion A l’aide de cette technique nous avons recher- ché la présence de 5 diastases (lactose, maltase, saccharase, tréhalase. glycogénase), dans le sang des 6 espèces suivantes : Homme, cheval, bœuf, lapin, rat. cobaye. Les résultats consignés dans le tableau no 2 doivent être considérés comme une illustration de la méthode car la plupart d’+re eux sont le Retour au menu5 Retour au menufruit d’unes expérience unique et ne peuvent donc être généralisés. La diastase la plus fréquente est la maltase qu’on retrouve chez 4 espèces animales. La glycogènase est plus rare et surtout moins active. Nous n’avons pu mettre en évidence la trého- lase signalée par BOWMAN, VON BRAND et TOBIE (2) dans le sang de l’homme et de lapin. Cette dipstase avait été invoquée par ces auteurs $ourexpliquer les résultats obtenus parweinman avec le tréhalose sur T. rhodesiense et T. pm- bmse (4). L’examen des séries 3 et 4 a permis de noter régulièrement une glycolyse appréciable en 24 heures. ceci se manifestant toujours par un “(rage moins importpnt dans la série 3.. Par contre il est nettement plus précoce dans cette même série, comme 51 le glucose avait subi une sorte de préparation, le rendant plus apte à être utilisé par T. evonsi. Nous avons exposé dans ce travail, le pr~n- cipe et la réalisation technique d’une méthode originale permetiant la recherche de certaines hydrolases dans les liquides biologiques. Elleest baséesur le fait queT. evansiconsomme de l’oxygène et se mobilise, uniquement en pré- sence de glucose. fructose et mannose. Lin diholoside ne peut donc provoquer ces phénomènes que ~‘11 est préalablement hydro- lysé et transforme en l’un de ces 3 hexoses. Cette méthode nok a peimis de mettre en évidence, dans le sang de différentes espèces animales, une maltase’(cheval, boeuf, Idpin. rat) et une glycogènase @caf, lopin, rat). Use of Y. e&ri for ;hc detecfion of hydrolaser of bload which are rerponsible of dextrose formation from voriovs di-rocchorldas mnd glycogsn The author bas report& the principle ond the practicol application ofon inven- live method using T. evwsi OP a reogeni which.ollowr ihedetectian,ofvarious hydrdorer of blood. With ibis method O. maltose has been show” in herse, OX, rtibbit and rat blood, a glycogenase in OX, rabbif and rat blood. 236 Retour au menuRESUME N El aufor expone el principio y Ia reolizocibn temica de un m&odo original, utilizando T. evonri como reactivo, y permitiendo 10 busquedo de cierios hidro- losis sanguineor. Mediante este método. fueron dercubierfas una ma1fo.m en la sangre de un cobollo. de un buey, de un conejo y de uno rato.y unaglicogenorisen losangre de un buey. de un conejo y de una rata. BIBLIOGRAPHIE 1. J. BALIS. - Utilisation des glucides et de with observ$ions on,. trehaiase in blood leurs produits de métabolisme par T. evansi serum. Exp. Par&t. 1960. /Cl 274-283. et T:brucei. Sous-presse. 1 3. P. B. M/$SHALL. - The glucose metabolirm ; of T: ,evonsiand the ?ction of trypanocides., 2. 1. 8. R. BOWMAN, T. VON BRAND et E. J. Brit. i. ,Ph&macol. 1948. 3.‘(a), 8-14. TOBIE. - The cultivation and metobolism 4. D. WEINMAN.‘- Trkhalose metabolism of of trypanosomes in the prerence of trehalose I Trypanosomes. Nature. 1960, 186.166. .” 237 Retour au menu

Utilisation de T. evansi pour la recherche des hydrolases sanguines responsables de la formation de glucose à partir de différents diholosides et du glycogène

L'auteur expose le principe et la réalisation technique d'une méthode originale, utilisant T. evansi comme réactif, et permettant la recherche de certaines hydrolases sanguines. Par cette méthode, ont été mises en évidence une maltase dans le sang du cheval, du bouf, du lapin et du rat, et une glycogénase dans le sang du bouf, du lapin et du rat</jats:p

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