O uso de dupla marcação imunocitoquímica para p16/Ki67 em amostras de citologia esfoliativa em base líquida no rastreio de lesões precursoras de câncer do canal anal em pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana

Abstract

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019.INTRODUÇÃO: Nos últimos anos, pesquisas de biomarcadores do Papilomavírus humano (HPV) têm sido desenvolvidas, a fim de incrementar a acuidade dos programas de triagem de cânceres relacionados à infecção pelo vírus. Considerando o papel da coexpressão de p16 e Ki67 na detecção de neoplasia intraepitelial cervical de alto grau e carcinoma, hipotetizamos que o CINtec PLUS®, teste que evidencia a dupla marcação simultânea para p16/Ki67 teria mesmo desempenho na detecção de neoplasia intraepitelial escamosa de alto grau e carcinoma anais. Desta forma, este biomarcador também poderia ajudar a melhorar o rastreamento do câncer do canal anal. Objetivo: Avaliar a aplicabilidade do CINtec PLUS® na identificação de lesões precursoras de câncer do canal anal comparando-o à detecção de ácido desoxirribonucleico (DNA) de HPV de alto risco (HR-HPV) por reação em cadeia da polimerase (PCR), em amostras citológicas anais, em base líquida. MÉTODOS: Trata-se de estudo comparativo, utilizando amostras coletadas primeiramente para citologia e então para biologia molecular, por pesquisadores do Hospital Universitário de Brasília (HUB) e disponibilizadas em banco de dados. As citologias em base líquida e as biópsias de amostras anais de 33 homens e mulheres infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV), sem lesões visíveis detectadas ao exame externo, foram avaliadas por imunocitoquímica usando uma interpretação independente de morfologia, com dupla marcação para p16/Ki67 e pelo teste de PapilloCheck® para detecção de HR-HPV. RESULTADOS: Foram observadas amostras de HR-HPV positivas em 77,77% daquelas com anormalidades citológicas e em 42,85% das negativas. Expressão positiva concomitante de p16/Ki67 (p16/Ki67+) foi observada em 33,33% das amostras com anormalidades citológicas. As amostras de citologia p16/Ki67+ mostraram aglomerados de células com dupla coloração e a maioria das células positivas eram células atípicas. Na biópsia com lesão intraepitelial escamosa de alto grau (HSIL) foram observadas células duplamente marcadas em toda a espessura do epitélio. A expressão de p16/Ki67 foi observada na única amostra com diagnóstico de biópsia de HSIL, mas apenas uma das sete amostras diagnosticadas com lesão intraepitelial escamosa de baixo grau (LSIL) foi p16/Ki67+. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a imunomarcação para p16/Ki67 é pode ser útil para melhorar a especificidade da citologia na detecção de lesões intraepiteliais escamosas anais de alto grau. Entretanto, estudos com maior casuística são necessários para confirmação.INTRODUCTION: In recent years, researches on Human Papillomavirus (HPV) biomarkers have been developed in order to increase the accuracy of cancer screening programs related to virus infection. Considering the role of p16 and Ki67 co-expression in the detection of high-grade cervical intraepithelial neoplasia and carcinoma, we hypothesized that CINtec PLUS®, an immunostain test that shows the simultaneous double-staining for p16/Ki67, has the same performance in detecting high-grade anal intraepithelial neoplasia and anal carcinoma. Thus, this biomarker could also help to improve anal cancer screening. OBJECTIVE: To evaluate the performance of CINtec PLUS® and high-risk DNA-HPV (HR-HPV) detection by PCR in anal cytology specimens. METHODS: This is a comparative study using samples that were collected first for cytology and then for molecular biology, by researchers of the University of Brasilia’s Hospital and made available in a database. Liquid-based cytology and biopsy of anal samples from 33 men and women infected by the Human Immunodeficiency Virus (HIV), with no visible lesions detected on external examination, were evaluated by immunocytochemistry using a morphology independent interpretation of the doublestain for p16/Ki67 and by the PapilloCheck® test for HPV detection. RESULTS: HR-HPV positive samples were observed in 77.77% of those with cytological abnormalities and in 42.85% of the negative samples. Concomitant positive expression of p16/Ki67 (p16/Ki67+) was observed in 33.33% of samples with cytological abnormalities. P16/Ki67+ cytology samples showed doublestained cell clusters and most positive cells were atypical cells. In biopsy with high-grade squamous intraepithelial lesion (HSIL), double-stained cells were observed in full thickness of the epithelium. P16/Ki67 expression was observed in the only sample diagnosed as HSIL by biopsy, but only one of the seven samples diagnosed as low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL) was p16/Ki67+. CONCLUSION: The results suggest that p16/Ki67 immunostaining may be useful for improving cytology specificity in detecting high-grade anal squamous intraepithelial lesions. However, other studies with major number of cases are required to confirm it