Os bambus Guadua magna e G. angustifolia têm sido propagados vegetativamente quase que exclusivamente por técnicas convencionais de propagação. Objetivou-se micropropagar, estimar a produção de mudas e analisar a fidelidade genética de G. magna e G. angustifolia por marcadores moleculares ISSR. Plantas matrizes de ambas as espécies foram cultivadas em casa-de-vegetação e pulverizadas ou não com fungicida. Em laboratório, microestacas foram desinfestadas e estabelecidas em meio MS com 3,0 mL L-1 de Plant Preservative Mixture (PPM®) e 1 mL L-1 de Carbendazin®. As brotações livres de contaminação foram multiplicadas em meio MS líquido ou semissólido com 3,0 mg L-1 de BAP, por cinco subcultivos. O enraizamento foi realizado em meio de MS1/2 líquido ou semissólido, acrescido de 3,0 mg L-1 de AIB. A aclimatização foi realizada em substrato comercial, em câmara de crescimento, sendo a fidelidade genética dos clones produzidos analisada por marcadores ISSR. A adição de fungicida e PPM® ao meio reduziu a contaminação em G. magna, mas não em G. angustifolia. O meio líquido foi mais eficiente que o semissólido para multiplicação das espécies, as quais mostraram potenciais de produção entre 760 e 920 plantas por microestaca inicial, após cinco subcultivos. Plantas enraizadas apresentaram sobrevivência de até 100 % na aclimatização. Não foram observadas regiões polimórficas nos clones analisados por ISSR ao final do quinto subcultivo, sugerindo que a micropropagação é uma técnica segura para a multiplicação de bambus em larga escala.The bamboo species Guadua magna and G. angustifolia have been propagated nearly exclusively by conventional techniques of vegetative propagation. Micropropagation is a promising technique and an alternative to conventional ones. This study aimed to micropropagate plants, estimate the plantlets production and analyze the genetic fidelity of G. magna and G. angustifolia by ISSR molecular markers. Mother plants of both species were cultivated in a greenhouse, and either sprayed or not with fungicide. In the laboratory, microcuttings were disinfested and established in MS culture medium with 3.0 mL L-1 of Plant Preservative Mixture (PPM®) and 1 mL L-1 of Carbendazin®. The contamination-free shoots were multiplied in liquid or semi-solid MS medium with 3.0 mg L-1 of BAP for five subcultures. Rooting was performed in liquid or semi-solid MS1/2 medium, plus 3.0 mg L-1 of IBA. Acclimatization was performed on a commercial substrate, in a growth chamber, and the genetic fidelity of the clones produced was analyzed via ISSR markers. The addition of fungicide and PPM® to the medium reduced the contamination in G. magna, but not in G. angustifolia. The liquid medium was more efficient than the semi-solid one for the multiplication of both species, which showed production potentials between 760 and 920 plants per initial microcutting, after five subcultures. Rooted plants exhibited a survival rate of up to 100 % in acclimatization. No polymorphic regions were found in the clones analyzed by ISSR at the end of the fifth subculture, suggesting that micropropagation is a safe technique for the large-scale multiplication of bamboos
