Article信州医学雑誌 16(1): 68-74(1967)journal articl

山田,  喜紹

村上,  昇

田崎,  忠勝

田村,  茂博

田波,  洋

Japanese

Shinshu University Institutional Repository

68－（68）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　僑　dl卜1　医　誌　　策16趣家兎水晶体上皮組織より確立されたRLE細胞系の核型について*昭和42年11月21日受付　　　　　信州大学医学部細菌学教室田波洋　山田喜紹　田崎忠勝信州大学医学部眼科学教室　　　　　（主任；加藤静一激授）田村茂博儒州大学阪学部学生村上昇Karyotypes in the RLE-ce11 1ine derived from rabbit lens epithelial tissues.Yoh Tanami, Yoshikazu Yamada, Tadakatu Tazaki,　　　　Department　of　Bactoriology，　Faculty　of　Medicine，　　　　　　　　　　　Shinshu　University．Shigehiro Tamura　　　　　Oplltha三エnological　Clinic，　Shinshu　U蕊iversity．　　　　　　　　　　（Director；Prof，　S，　Kato）Noboru Murakami　　　　Student　of　Faculty　of　Medicine，　Shinsllu　University　哺乳動物細胞をin　vitrOで長期間培養すると，　　をひきつづき継代しているが，培養開始後16ケ月たつdiploid（2倍性）の細胞は数ケ月のうちに消減して　　ても大部分の細胞はnear　dipleidの核型を保つていしまい，もし更にひきつづいて長期間培養可能の細胞　　　ることがわかつたので，その成績をこNに報告したがえられるとぎ㈹，その核型は3倍性ないし蠕性　い。のheteroploid（異数性）に．変つていることが一般に認められている①。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　材料と方法　ごうして得られる　heteroploidの細胞剰よ，ウイ　　　　RLE細胞系の培養経過　（1）初代培養1964年9月ルス感受性がprimary　cultureとは変つていたり，　　7日，体璽約2彫の健康白色叡兎（el）を耳静脈への潜在的な腫瘍化をおこしている怖れがあるのでウイル　　　空気注入で殺し，tc　scちに眼球を摘出した。水晶体の・・ワクチ・の鵬・は用いられな・・①②・また・　赤道部厳繊を、一・繭。糊し，。。ザ。瓶伽伽における胴様の分化機自邑をもつている細胞　（瑚ガラZKK）内にプラx’・…　一ク。ツト灘従つ馳融する必要もあつて・鞭鮪鹸重購頃り　て外移凱，37・Cでi羅膿した．鞭。難ち，d廊d蘇つことがこ礪域での鯨のひとつ瞼　雛材料を徽し，それ砿麟上皮のみで他騰の〔脚注〕拍Q撒難1欝講1　を鼠tl欝蹴灘撒鷹撒鴛　　　　学会で出されている。こXでは簡厳のため　　　一Hanksの培養液を用いた。その他の成分は下と同じ　　　　cell　line（細胞系）と呼ぶことにする。　　　　　である。鮨本研究の要旨は，昭和4工年5月，第21回日本組織培養掌会研究会（福岡）で発喪した。第1号（1967）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　69－（69）Mixture　199（千葉県血清研製）　　　　　90％　　　　であつた。（一般のestablished　cell　line，例えば　Lactoalbuminhydrolysate（Difco社製）0．25％　　　　HeLa細胞系やL細胞系でのdoubling　timeは20時　仔牛血清（56°C，30分間加温）　　　約　10％　　　　問前後である）。　penici11in　G　　　　　　　　　IOOunits／me　　　　約12ケ月ごろから，増殖速度は多少速くなつて　Dihydrostreptomycin　　　　　　IOOptg／me　　　doubling　timeは約3日となり，植えつぎも安定し　（iii）継代培養培養開始後18日目に，新しい瓶への　　　て来た。そこで培養液もEagle　Hanks培養液に変最初の継代を行つた。この植えつぎは，プラズマ・ク　　え，植えつぎのときの細胞処理もEDTA液を用いるロツト法を用いず，注射針の先で丁寧に剥した細胞を　　　ことにした。新しいタンザク瓶に植え，培養液を加えて静置培養し　　　　なお，このRLE細胞系は，1966年11月現在（培養た。数日後から細胞の遅い増殖がみられ，約1ケ月か　　　開始26ケ月後）も依然として活発な増殖をつづけていNつて単層シートを形成した。　　　　　　　　　　　　る。　　　　　　　　　　　　　　　　　凸　この時期の細胞は三角形，三ケ月形，紡纏形，類円　　　　核型分析法　一般に用いられているように，細胞を形，イチヨウ葉形などの多形性を示し，一般にfibr一　　コルヒチン処理（2～3μ9／meで16～30時間処理）しoblastとepithelioidの中問形を示している。（写　　　たのち，低滲透圧処理（1．12％クエン酸水溶液で20分真1，2）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　間）によつて染色体を分散させ，カルノー液で固定　培養を始めてから76日目にトリプシンによつて細胞　　　後，冷却した清浄のせガラス上で急激に乾燥して染色を軽く消化し，2代目の継代を行つた。このころの細　　　体標本をつくつた。染色体の染色には45％ゲンチァナ胞増殖速度はかなり遅く，doubling　timeは約5日　　　紫酷酸溶液または1％ダーリア液を用い，核型分析は　　　　　　’　　　　　　　　　　　　　　　　　　すべて顕微鏡写真像によつた。写真1，2　　　培養開始後約1ケ月目のRLE細胞の形態（100×）。　　　　　　　　　　　成　　績　1966年1’　Eから2月にかけて行つたRLE細胞系の核型分析の成績を失々図1～4に示す。染色体の配列はDave　et　al．（］965）④に従つた。その理由は後でのべる。　細胞あだりの染色体数の分布を図1に示すが，こxにみられるように，約90％の細胞の染色体数は36～46の間に分布し，最頻度は44本（これはdiploidに相当する。このようなdipl－oid型細胞の全体に対する比率拡6496）であつた。　残りの絢60％の細胞は染色体数が60～94の間に分布する3倍性ないし4倍性あheteroploidであつた。’h　・　”　．　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　、’　　　　　　　　　1・・雲　　　　　　trisomyがみられる。このような染色体構成の70－（70）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　イ言　少H　医　註吉1　舞客16巻図灌　　　　　　培養開始後16～17ケ月目におけるRLE細胞系の染色体数の分布　　20鶏8り0　　10曇舞RABBIT　　LENS　　CEL山　　LINEJan．　＿　Feb．　1966　　　　0　　　　　　　　30　　　　　　　　　40　　　　　　　　50　　　　　　　　60　　　　　　　　70　　　　　　　　　80　　　　　　　90　　　　　　　　　　　　Chremosome　　　Numbers　　　per　　　Cel1・図2　　　　　　長期培養（16ケ月）後のRLE細胞の核型のユ例。　Euploid型を示す、　　　　　　　 10μ　　1°　月　12　13　　14　15．16　17《朗b鯛＾AA　iC」S　　18　19　2021　．XY　　　10μ第1号　　（1967）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　71「（7T）　図3　　畏期培養（16ケ月）後のRLE細胞の核型の1例。2群にmonosornyが，18／19群にtrisomyが　　　　　夫々見られる　　　　　　　　　　チ　　　　　　　　”㍉　　　♪　　　　　　　　　雰　　　　　　　　　　　　　　福メ　　　　　　　　　　　　　　－　　 　　 　 　 　　 10μ 　　，　　　議　　　　震《》x湘轟榔ll醜糊稲器　　　　　1　2　3　4　5　6　7　8　9　　　　b）s》ζ義　描～　器　〉〈　　　　　10　11　12　13　　14　15　1617　　　　佃　軸＾　““ムv・1《　　　　　18　　　19　　　　20　　21　　XY　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　10μ異常は勿論長期間培養という条件によつて生じたもの　　　し，特に，家兎核型の特微とされている長大なsub・・と考えられる。　　　　　　　　　　　　　　　　　telocentricな4対の藻色体群（No．14～No．17）が　ただ，いずれの場合でも核型は家兎のそれに一致　　　はつきりみられており，RLE細胞が象兎由来のもの72－（72）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　信州医誌　第16巻図4　長期培養（16ケ月）後のRLE細胞の核型の1例。12群にmonesomyが，19群にtrisomyが見　　　られる　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　㌘　　　　騨　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　YkNK・　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　馬〃端　　　　〆グ　　オグ10μllゐ器～1罐x沿ζ　輔稲1葡藍遮10　　　　11　　　　12　　　　13　　　　　　　　 14　　　　　15　　　　16　　　17鶴醜　轟幽《　誘轟　《《　　煮醜　18　　19　　20　　21　　×Y　　　　　10μであることを証拠だてている。　　　　　　　　　　　　養のなかみがすりかわつてしまうことは，稀ではな　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　いeI　　　　　　　　　考・え方　　　　　　　　　　　　　Clausen＆Syverton⑥（1962）は各研究所で確　長期培養細胞系を確立する過程で，同じ研究室で維　　　立されたと称する31系の細胞の核型をしらべ，そのう持している別種の細胞系の“汚染”によつて，細胞培　　　ち約半数の15系統の核型は蓑面上の由来動物のそれと第1号　　（1967）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　73－（73）は全く異つていた，とのべている。即ち‘‘レツテル”　　　である。しかも16～／7ケ月に亘る長期口・冒培養後も，大によれば，夫々サル（2系），家兎（6系），ブタ（1　　部分の細胞が依然としてnear　diploidである鄭は注系），ウシ（1系）などから由来したことになつてい　　　目すべきことだと考えられる。この点と，田村③も摺る計10系の細胞群の核型がすべてヒトの核型に一致し　　摘しているように本細胞カミ非常に透明だということ，ており，また，夫々ヒト（4系）またはサノレ（1系）　　および増殖速度が（一般に例を見ない繰）遅いという由来といわれていた計5系の細胞群の核型カミマウス由　　事は，U）ずれも本細胞系のliヨ来組織である水晶体上皮来のEarleのL細胞系のそれに驚ろく程似ていたと　　　の“分化機能”を或程度維持していることな物語つていう。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　いて興味深い。　従つて，新しい細胞系を確立した場合は，その核型が由来動物のそれと一致することを示さなければなら　　　　　　　　　　　　まとめ　　　　　，ない。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　健羅蟹冤の水晶体．．L皮山来のRLE細胞系の核型分　家兎（domestic　ral）bit）の正常染色体数は44本　　　析な行つたところ，培i髭開始後】6ケ月経過していたにで，21対の常染色体と，1対の性染色体から構成され　　　も拘らず，大部分（90％）の細胞はdiploidないしていることはPainter（1926）⑥以来多くの研究者に　　はquasi－ciiploiclであることがわかつた。工diograniよつて確認されている⑦甲⑩。しかし，核型の群細に　　分析によつ’Cdiploid型の核翻は家蒐ll寺有のもの，ついては研究者によつて1多少のちがいが認められる。　　　即ち，13対のmeta一ないしsubmetacentric，4対　Clausen＆Syverton⑥（1962）は叡兎の常染色体　　　のsubte1。centric，4対のacrocentric，および1対は14対のmeta一ないしsubmeta，　centric，4対の　　　の憐染色体よりなつていることが確1認された。subtelocentric，および3対のacrocentricな染色　　　　RLE細胞系の増殖速度は比較的遅く　doubling体群よりなるとのぺているのに対し，Dave　et　al．④　　timeは3～5H（37。Cで）であつた。瓶から瓶へ（1965）は上の3群庶夫々13対，4対，および4対の染　　　の植えつぎは1％・）2ケ月毎で，1966年U月現在まで色体群から構成されている，とのべている。　　　　　　の継代数は10－12代である。艮期闘の培養にも拘ら・らに艶体…き・や腕比（一鑑麟書）・e淵轍常・撒であ・脳・・継欄がbヒ齢ついても両者の聞には意見の喰いちがいがみられる。　少いためと叛られる・即ち，前者⑤では疎色体はカ・なり小型（染磁体の　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　文　　献長さの総計あたりのper　cent　lengthでいうと3．2％）で，腕比が3。・のS、b・。1。。e。・ri、型で踊のに　④Hayflick，　L，，　and　M°°「head・P・S・：The　se「一対し，後者④の報告では，かなり大型（5～6％の長　　ial　cultivation　of　liu「nan　diPloid　ce11　st「ainslさでだいたいNo．3の染色体に近いという）で，腕比　　　Exp・Cell　Res・25・585－－621・196工　　②Hayflick・が約1，8のmetacentric型であるとされている。　　　　L・：Hurnan　diPloid　cell　st「ains　as　host　fo「vi「　”　これらの差異が用いた家兎の個体差iに．よるものか、　　　uses・Perspectives　in　Virology　3・213・－237・ユ963あるいは標本作成技法上の誤差によるものか，いまの　◎町畿博嫁兎水晶体上皮細胞のガラス瓶肖培養にところはつきりしていない。　　　　　　　　　　　　　関する研究，日眼会誌，69、317－320，1965；Long一　私どもの成績（図2・v4）を上の成績と比べてみる　　term　cultures　of　ep豆thelial　cells　of　a　rabb玉tと，常染色体の構成がユ3対のrneta・一ないしsubm－　　lens．　Jap．　J，　Ophthal、9，177－181tユ965　④Dave，etacentric・4対のsubtolocentric，および4対の　　　M・J．，　Takagi，　N・，　Oishil　H・，　and　1軍ikuchi，　Y：acrocentric　i型からなつていること，と，　X染色体が　　　Chromosome　study　on　the　hare　and　tlie　rabbit．大型のmetacentric型であるなどの点から，　Dave　　Proc．　Japan　Acad．41，244－248，1965　　⑤Claus－et　al．④（1965）の報告に一致する。　　　　　　　　　en，　J，　J．，　and　Syverton，　J．　T．：Gomparative　ただ正常核型に比べて，No．3の染色体の蒋糸点が　　　chromoso皿al　studles　of　31cultured　mammalian端にずれてsubtelocentric型になつている点が異な　　　cell　1ines・」、　Nat．　Cancer工nst．28，］．17－145，1962るが，これは長期間培養の影響によるものと考えられ．　　⑥Painter，　T．　S、：Studies　in　rnammalian　aper－一る。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　matogenesis．　VL　The　chromosomes　of　the　以上の点からみて，私どもの維持しているRLE細　　　rabbit，　J．　Morph．43，1　一・54，1926　　⑦立石新吉：胞系が家兎由来のものであつて（他の確立細胞系のコ　　　タイワγノウサギ並に家兎の染色体に就て、鋤物学雑ソタミネー・ショソによるものではない）ことは明らか　　誌，48，617－625、工936　　⑤1枚野佐嵩郎：i家畜の染 74-(74) IS dLH ee ss ee16igtsraglilFee, MillvSiEttsk:t-;uir, 56, 8--15, 1944 ; A contri- McMichael, H., Wagner, J. E., Nowell, ? C,, andbution to the study of the che ch,romosomes Hungerford, D. A.:Chromos.me studies ofin Asiatic mammals. Cytologia 16, 28S-301, 1952 virus-induced papillomas and derived priMary@Melander, Y.:The chromosome complement carcinomas, J. Nat. Cancer Inst, 31, 1197--1,215,of the rabbit. Hereditas 42, 432 435, 1956 ([ll) z963

Karyotypes in the RLE- cell line derived from rabbit lens epithelial tissues

https://soar-ir.repo.nii.ac.jp/record/5703/files/Shinshu_med16-1-05.pdf

家兎水晶体上皮組織より確立されたRLE細胞系の核型について

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