Blanco Gámez, Edgar Allan

García Miranda, José Norberto

Gómez Treviño, Jesús Alberto

Lopez Chuken, Ulrico Javier

Zárate Kalfópulos, Xristo

Repositorio Academico Digital UANL

IV Simposio Nacional de   Ciencias Farmacéuticas y Biomedicina  II Simposio Nacional de  Microbiología Aplicada 26 RCFB, Ed. Esp. 1, 2018  Abril 27 y 28 2017 Identificación de  bacterias aisladas de chapopotera del Estado de Veracruz José Norberto García Mirandaa, Ulrico Javier López Chukena, Xristo Zárate Kalfópulosa, Jesús Alberto Gómez Treviñoa, Edgar Allan Blanco Gámeza*. aUniversidad Autónoma de Nuevo León, Facultad de Ciencias Químicas, Laboratorio de Biotecnología I, San Nicolás de los Garza, Nuevo León. *allan_blanco@yahoo.com.mx Palabras clave: Genes tod, hidrocarburos, bacterias hidrocarbonoclastas.Introducción  Los hidrocarburos (HCs) son compuestos formados por cadenas de carbono (C) e hidrógeno (H)1. En la actualidad existen un gran número de áreas contaminadas por el uso, la manipulación y disposición inadecuada de los HCs2. Para reducir el daño y hacer uso del suelo contaminado con HCs se ha optado por métodos químicos, físicos, los cuales pueden tener inconvenientes como la generación de compuestos más tóxicos1. Se han usado métodos biológicos con microorganismos aislados de sitios contaminados con HCs, los cuales pueden usar estos compuestos como fuente de C y llevarlos hasta mineralización3. Se han aislado organismos como Pseudomonas aeruginosa, P. putida, Alcanivorax sp., Bacillus ceparia, Acinetobacter sp.4-5. En el presente trabajo se identificaron las cepas aisladas de chapopoteras del estado de Veracruz hasta especie con el fin se conocer diversidad de organismos presentes en sitios contaminados con HCs. Parte experimental Las cepas se reactivaron en caldo nutritivo y se preservaron a -20° C. Después se realizó la determinación hasta género usando pruebas API® 20E, en caso de ser Gram negativo y pruebas de catalasa, amilasa, oxidación de citratos, formación de endosporas, oxidación y fermentación de azúcares en el caso de ser Gram positivo. Posteriormente, se extrajo el DNA genómico usando el kit PrepEaseTM USB®, para después amplificar por PCR la secuencia que codifica para la subunidad 16S del rRNA usando los primers 27F (AGAGTTTGATCCTGGCTCAG) y 1392R (GGTTACCTTGTTACGACTT) y el kit GoTaq® Green Master Mix Promega ©. Los fragmentos amplificados se enviaron a secuenciar a la empresa MacroGen© y el análisis de los resultados de la secuenciación se hizo usando la base de datos del National Center for Biotechnology Information (NCBI). El cladograma se hizo con el método UPGMA usando el programa MEGA versión 7.0.21. Resultados y discusión El total de las cepas con las que se trabajó fue de 19, de las cuales 18 fueron aisladas previamente de las chapopoteras y se utilizó una cepa de E. coli (ATCC ® CRM-11229TM) como control. Con las pruebas bioquímicas se determinaron 4 cepas del género Pseudomonas, una del género Shigella, y 6 del género Bacillus. Se obtuvo el DNA génomico de las cepas y se realizó la PCR. Al analizar los resultados de la secuenciación del gen de la subunidad 16S de rRNA se identificaron 5 especies pertenecientes a los phyla Firmicutes y Proteobacteria (Fig. 1). .  Fig. 1. Cladograma realizado con las secuencia amplificadas del gen de la subunidad 16s rRNA. Para la construcción del cladograma se consideró la secuencia previamente reportada de M. ethanolicus De estas, solamente P. aeruginosa y especies del género Bacillus habían sido reportadas3-4, Mientras que las especies L. fusiformis, P. dendritiformis y Aneurinibacillus sp. no habían sido aisladas de sitios contaminados con hidrocarburos3-4. Conclusiones Se identificaron 14 cepas que pertenecen a 5 especies diferentes, de las cuales 4 son del phylum Firmicutes y 1 de Proteobacteria Referencias  1. Gan S, Lau E, Ng H, (2009) Remediation of soils contaminated with polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs).J. Hazard. Mater. 172, 532-49. 2. Fuentes S, Méndez V, Aguila P, Seeger M, (2014). Bioremediation of petroleum hydrocarbons: catabolic genes, microbial communities, and applications  Appl. Microbiol. Biotechnol. 98, 4781-94. 3. .Morimoto H, Kuwano M, Kasahara Y, (2013).l Gene expression profiling of Pseudomonas putida F1 after exposure to aromatic hydrocarbon in soil by using proteome analysisArch. Microbiol. 195, 805 4. Röling WF, Milner MG, Jones DM, et al., (2002). Robust hydrocarbon degradation and dynamics of bacterial communities during nutrient-enhanced oil spill bioremediation. Appl. Environ. Microbiol. 68, 5537-48. 5. Kostka JE, Prakash O, Overholt WA, et al., 2011. Hydrocarbon-degrading bacteria and the bacterial community response in Gulf of Mexico beach sands impacted by the Deepwater Horizon oil spill. Appl. Environ. Microbiol. 77, 7962-74  Bacillus thuringiensis (Chap 4) Bacillus thuringiensis (CP-1) Bacillus subtilis (T2-5) Lysinibacillus fusiformis (T3-1) Lysinibacillus fusiformis (T2-2) Lysinibacillus fusiformis (T2-1) Aneurinibacillus sp. (T1-1) Paenibacillus dendritiformis (Chap 2) Paenibacillus dendritiformis (Chap 1) Paenibacillus dendritiformis (SC-1) Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa (T3-3) Pseudomonas aeruginosa (T3-2v) Pseudomonas aeruginosa (T3-2) Pseudomonas aeruginosa (T3-3v) Methanofollis ethanolicus

Identificación de bacterias aisladas de chapopotera del Estado de Veracruz

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