The prevalence of Toxoplasma gondii in free range chickens is a good indicator of the prevalence of T.gondii oocysts in the environment and the meat of chicken is considered one of the sources of the humaninfection. A study to determine the seroprevalence of T.gondii in free ranging chickens in eight regency inBali have been undertaken. More over, attempt to isolate T gondii was also performed from the copropositivesample. Seroprevalence was detected using modified agglutination test (MAT) and isolation of T.gondiiwere performed from organs (heart and brain) using pepsin-HCl digestion method. Further the pathogenicityof the isolate was determined by bioassay using mice. The result showed that the seroprevalence was24.8% (31 out of 125 chickens examined). T.gondii was found in 17 of the 31 seropositive chickens (55%)more over all isolates were a vitulent to the mice

I Made Damriyasa

I Made Dwinata

Ida Bagus Made Oka

Nyoman Adi Suratma

jurnal veteriner

Directory of Open Access Journals

340Seroprevalensi dan Isolasi Toxoplasma gondiipada Ayam Kampung di Bali(SEROPREVALENCE AND ISOLATION OF  TOXOPLASMA GONDIIAMONG FREE-RANGE CHICKENS IN BALI)I Made Dwinata1, Ida Bagus Made Oka1,Nyoman Adi Suratma1, I Made Damriyasa11Lab Parasitologi Veteriner, 2Lab Patologi KlinikFakultas Kedokteran Hewan Universitas UdayanaJln Sudirman Denpasar Bali, Telepon 03610223759ABSTRAKPrevalensi Toxoplasma gondii pada ayam kampung merupakan indikator yang baik adanya oosistaT.gondii di lingkungan dan daging ayam merupakan salah satu sumber penularan pada manusia. Penelitianini bertujuan untuk menentukan prevalensi dan isolasi T.gondii pada ayam kampung di Bali. Jumlahsampel ayam yang digunakan sebanyak 125 ekor ayam kampung yang berasal dari delapan kabupaten diBali. Antibodi terhadap T.gondii diperiksa dengan metoda Modified Aglutination Test (MAT). Pada ayamyang terdeteksi adanya antibodi terhadap T gondii diambil otak serta jantungnya kemudian dilakukanisolasi parasit dengan metoda pepsin-HCl digestion. Isolat parasit tersebut kemudian diinokulasikansecara peritoneal pada mencit untuk menentukan patogenitas parasit tersebut. Secara serologi terdeteksiadanya antibodi terhadap T. gondii pada 31 ekor ayam, dengan demikian seroprevalensi toxoplasmosispada ayam kampung di Bali sebesar 24,8%, Uji digesti dan bioassay dapat diisolasi bradisoit 17 dari 31(55%) ayam-ayam yang positif terdeteksi adanya antibodi terhadap T. gondii (MAT ≥1:5) uji patogenitasnyapada mencit menunjukkan bahwa isolat tersebut avirulen terhadap mencit.Kata kunci : Toxoplasma gondii, Ayam kampungABSTRACTThe prevalence of Toxoplasma gondii in free range chickens is a good indicator of the prevalence of T.gondii oocysts in the environment and  the meat of chicken is considered one of the sources of the humaninfection.  A study  to determine the seroprevalence of T.gondii in free ranging chickens in eight regency inBali have been undertaken.  More over, attempt to isolate T gondii was also performed from the copropositivesample.  Seroprevalence was detected using modified agglutination test (MAT) and isolation of T.gondiiwere performed from organs (heart and brain) using pepsin-HCl digestion method.  Further the pathogenicityof the isolate was determined by bioassay using mice.  The result showed that the seroprevalence was24.8% (31 out of 125 chickens examined).  T.gondii was found in 17 of the 31 seropositive chickens (55%)more over all isolates were a vitulent to the mice.Key word : Toxoplasma gondii, Ayam kampungPENDAHULUANInfeksi Toxoplasma gondii diketahuipenyebarannya di seluruh dunia pada manusiadan hewan (Dubey dan Beattie, 1988). Manusiaterinfeksi secara postnatal apabila menelan sistaparasit yang terkandung pada daging yangmentah atau kurang dimasak dengan sempurna,di samping itu dapat juga terinfeksi melaluimakanan atau air yang tercemar oleh oosita T.gondii, atau dari lingkungan yang tercemar olehoosita parasit tersebut.  Bangsa kucing merupa-kan induk semang terpenting dari T. gondiikarena hewan tersebut akan menyebarkan atauJurnal Veteriner Desember 2012 Vol. 13 No. 4: 340-344ISSN : 1411 - 8327341mencemari lingkungan dengan oosita. Kucingterinfeksi akibat makan daging inang antarayang mengandung sista T. gondii. Diketahuiburung serta rodensia seperti tikus merupakansumber penularan penting toksoplasmosisterhadap kucing.Hasil-hasil penelitian terhadap seropreva-lensi toksoplasmosis pada manusia di berbagaidaerah di Indonesia telah dilaporkan, yaituberkisar antara 3,1%-64,0% (Chomel et al., 1993;Uga et al., 1996). Hasil penelitian  beberapapeneliti menampilkan bahwa kebiasaan makansangat menentukan terjadinya infeksi parasittersebut.  Kebiasaan makan sate yang belummasak dengan sempurna  (Gandahusada,1980), kebiasaan makan lawar di Bali (Chomelet al., 1993) dan kebiasaan makan daging organvisceral ayam yang dimasak setengah matang(Asgari et al. 2006), mendorong terjadinyainfeksi.Toksoplasmosis dilaporkan menyeranghampir semua ternak termasuk unggas. Isolasidan karakterisasi toksoplasma pada mamaliatelah banyak dilakukan. Beberapa penelitianmengarah terhadap toksoplasmosis pada ayamkampung (Dubey  et al.,2005a; Dubey  et al.,2005b ) dan di Iran (Asgari et al., 2006)melaporkan seroprevalensi sebesar 36,1%.Mereka tertarik melakukan penelitian  karenaayam kampung tersebut mempunyai kebiasaanmencari makan di tanah sangat cocok dipakaisebagai indikator  kontaminasi toksoplasmosispada lingkungan atau tanah. Belakangan initelah diisolasi T. gondii pada unggas, antara laindi Mesir telah diisolasi T.gondii pada ayam danitik (Dubey et al., 2003a), di Brasil  pada ayam(Dubey et al., 2003b) serta di India  pada ayam(Sreekumar et al., 2003).  Di Indonesia sangatsedikit laporan penelitian tentang T. gondii,bahkan pada unggas belum banyak dilaporkan.Penelitian ini merupakan pendekatanpenelaahan agen penyakit T.  gondii pada ayamkampung sebagai salah satu inang antara.Sampai saat ini belum pernah diisolasi T. gondiipada unggas di Indonesia. Pemahamankeragaman  T. gondii pada induk semangantara (ayam kampung) akan memperluascakrawala pengendalian penyakit tersebutsecara terpadu.Penelitian ini bertujuan mengetahuiseroprevalensi T. gondii pada ayam kampungdi Bali, serta patogenitas isolat parasit tersebutpada mencit.METODE PENELITIANPengambilan SampelAyam yang dipakai sampel penelitianadalah ayam kampung yang berumur di atasenam bulan yang dipelihara secara ekstensif.Sampel berasal dari delapan kabupaten di Balimasing masing: kabupaten Badung, Gianyar,Tabanan, Bangli, Karangasem, Kelungkung,Negara, dan Buleleng. Dari masing masingkabupaten diambil sekitar 10-20 ekor ayam yangberasal dari peternak yang berbeda. Jumlahsampel keseluruhan adalah 125 ekor.Pengambilan sampel pada masing masingkabupaten dilakukan secara bertahap.  Setiapkali pengambilan sampel hanya lima ekor ayamyang dikorbankan nyawanya. Terhadap sampeltersebut dilakukan pengambilan darah, otak,dan jantung.Pemeriksaan SerologiDarah yang diperoleh dilakukan pemisahanserum yang kemudian dilakukan pemeriksaanserologis untuk menentukan adanya antiboditerhadap T. gondiii. Pemeriksaan serologimenggunakan metoda Modified AglutinationTest (MAT).Metode tersebut menggunakan 96 wellmicroplate dengan dasar cekung, serum yangdiperiksa diencerkan dengan 0,2 M 2-mercaptoethanol dalam phosphat buffer saline/PBS. Masing masing well/sumuran diisi dengan50 μl serum sampel yang diencerkan mulaipengenceran 1:5, di samping itu dua barissumuran diisi 50 μl diisi dengan serum kontrolpositif dan negatif dengan pengenceran yangsama dengan serum sampel. Setelahpenambahan serum kemudian ditambahkan 50μl suspensi antigen pada masing masingsumuran. Microplate kemudian digoyang pelanpelan supaya antara serum dan antigentercampur dengan baik kemudian diinkubasi.Setelah inkubasi dilakukan pembacaan hasildengan serum kontrol sebagai pembanding.Isolasi T. gondiiSebanyak 50 gram untuk masing masingjaringan digerus dengan blender dengankecepatan rendah, kemudian ditambah PBS dandigerus lagi dengan kecepatan tinggi. Hasilgerusan tersebut kemudian ditambahkanlarutan pepsin HCl (Dubey, 1998), setelahdiinkubasi pada suhu kamar dan diputar denganmagnetic stirer selama satu jam homogenatdicuci tiga kali dengan PBS (mengandung  104Dwinata et al  Jurnal Veteriner342unit potassium-G penisilin dan 100 mgstreptomisin dalam 100 ml). Untuk memisah-kan pepsin-HCl dilakukan pemusingan pada2000 rpm selama 10 menit. Supernatan dibuangdan sedimen ditambahkan PBS sampai  100 ml.Suspensi tersebut kemudian diperiksa di bawahmikroskop untuk menentukan adanya bradisoit.Bioassay pada MencitSuspensi dari hasil pemeriksaan metodedigesti yang mengandung bradisoit T. gondiikemudian diinokulasikan pada mencit (enammencit untuk tiap sampel positif).  Sebanyak0,5 ml suspensi yang mengandung bradisoit T.gondii diinokulasikan pada mencit secaraperitoneal. Mencit diamati sampai hari ke 30setelah infeksi. Mencit yang mati selamapengamatan dilakukan pemeriksaan eksudatdari peritoneum dan otak untuk menentukanadanya parasit T. gondii. Mencit yang bertahanhidup sampai hari ke 30  dikorbankan nyawanyadengan cara eutanasi menggunakan eter untukisolasi T. gondii pada otak dan cairanperitoneum. Untuk menentukan patogenitasdari isolat yang didapat dilakukan denganmenghitung lethal dose (LD) 50 dan infectiousdose (ID) 50 berdasarkan metode Reed danMuench.HASIL DAN PEMBAHASANDari 125 ekor ayam kampung yang diteliti,antibodi terhadap T. gondii ditemukan pada 31ekor. Hasil penelitian ini menunjukanseroprevalensi toksoplasmosis pada ayamkampung di Bali sebesar 24,8%. Penelitian inipertama kali dilakukan di Bali untukmendeteksi keberadaan toksoplasmosis padaunggas. Dibandingkan dengan seroprevalensiToksoplasmosis pada hewan lain yang pernahditeliti di Bali, menunjukkan seroprevalensitoksoplasmosis pada ayam kampung di Balilebih rendah bila dibandingkan denganseroprevalensi pada babi (32%) yang pernahdilaporkan oleh Damriyasa et al., (2001). Biladibandingkan dengan seroprevalensi yangpernah dilaporkan oleh Dubey et al., (2008) dariMuntilan Jawa Tengah, ditemukan 24 dari 94ayam kampung positif mengandung antiboditerhadap T. gondii dengan metode MAT. Hasilpenelitian tersebut tidak jauh berbeda denganhasil yang diperoleh pada penelitian ini. Laporandari beberapa negara juga menunjukkan bahwaseroprevalensi toksoplasmosis bervariasi antara18-40% yang pernah dilaporkan di India(Sreekumar et al., 2003) dan Columbia (Dubeyet al., 2005). Tenter et al., 2000 melaporkanbanyak faktor berpengaruh terhadap penularantoksoplasmosis seperti managemen dan standarhigiene peternakan, kepadatan kucing dankondisi lingkungan.  Titer antibodi dari ayam yang positifmengandung antibodi terhadap T. gondiibervariasi antara 1:5 sampai 1: 320, sepertidisajikan pada Tabel 1.Pada penelitian ini, uji serologi dengan MATdimulai dengan titer yang berpengenceranrendah (1:5). Hal tersebut dilakukan karena T.gondii pernah diisolasi oleh Dubey et al., (2005)pada ayam yang mempunyai titer antibodi yangrendah. Otak dan jantung ayam yang terbuktipositif mengandung antibodi terhadap T. gondiisetelah dilakukan metode digesti danselanjutnya diinokulasikan pada mencit, setelah30 hari pascainokulasi ditemukan adanyabradisoit parasit tersebut di otak mencit yangberasal dari  17 ekor ayam. Hasil penelitian inimenunjukkan bahwa dari 31 ekor yangterdeteksi antibodi terhadap T. gondii hanyapada 17 (55%) ekor ayam dapat diisolasi T. gondiimelalui inokulasi otak dan jantung ayam padamencit. Selanjutnya hasil uji kedua metodetersebut disajikan pada Tabel 2.Hasil yang ditunjukkan pada Tabel 2membuktikan bahwa hampir sebagian dariayam yang positif mengandung antiboditerhadap T. gondii, dapat diisolasi parasittersebut melalui uji bioassay.Tabel 1. Sebaran titer antibodi terhadap T. gondii pada ayamTiter1:5 1:10 1: 20 1:40 1:80 1:160 1 : 320Jumlah 7 5 3 3 7 3 3% 21,9 % 15,6% 9,4% 9,4% 21,9% 9,4% 9,4%Jurnal Veteriner Desember 2012 Vol. 13 No. 4: 340-344343mengarah toksoplasmosis. Hasil penelitian inimenunjukkan bahwa isolat T. gondii yangdiisolasi dari ayam kampung di Bali bersifatavirulen terhadap mencit. Hasil penelitian yangsama juga dilaporkan oleh Dubey et al., (2008)yang mengemukakan bahwa isolat T. gondiiyang diisolasi dari Ghana, Indonesia, Italia,Polandia, dan Vietnam bersifat avirulenterhadap mencit.SIMPULANSeroprevalensi infeksi T. gondii pada ayamkampung di Bali sebesar 24,8% dan sebagiandari sampel yang positif mengandung antiboditerhadap T. gondii  dapat di isolasi. Isolat T.gondii yang diisolasi dari ayam kampung di Balibersifat avirulen terhadap mencit.SARANDari hasil penelitian ini perlu adanyapenelitian secara nasional tentang prevalensiinfeksi T. gondii dari berbagai hewan danmanusia di Indonesia. Adanya kajian lebihmendalam tentang kemungkinan ayamkampung sebagai sumber penularan T. gondiipada manusia.Tabel 2. Hasil pemeriksaan serologi (MAT) danbioassay  T. gondii pada ayam                                  MATTotalPositip negatipPositip 17 0 17BioassayNegatip 14 94 108Total 31 94 125Keterangan : MAT = Modified Aglutonation Test.BradisoitT. gondiiGambar. Siste Toxoplasma gondii pada organayam dan mencit (400 kali)Tabel 3.Hasil pemeriksaan bioassay terhadap T. gondii dan hubungannya dengan titer antibodipada pemeriksaan Modified Aglutination Test  (MAT)             Titer1:2 1:5 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320Bio-assay positif 0 0 0 2 3 6 3 3negatif 1 7 5 1 0 1 0 0Total 1 7 5 3 3 7 3 3Hal tersebut dapat disebabkan olehpengaruh perlakuan pada saat proses digestidengan pepsin HCl, dalam proses tersebutkemungkinan terjadi kerusakan-kerusakanpada parasit tersebut sehingga tidakberkembang setelah diinokulasikan pada mencit.Faktor lain yang dapat menyebabkan haltersebut adalah terjadinya autolisis dari jaringanselama penyimpanan sebelum dilakukaninokulasi pada mencit.  Berdasarkan data titerantibodi dan hasil bioassay menunjukkan bahwauji bioassay positif pada ayam yang menunjukkantiter antibodi 1:20 ke atas, hasil ini selengkapnyadisajikan pada Tabel 3.Dari 14 sampel yang positif denganpemeriksaan MAT, pada bioassay hasilnyanegatif, 13 dari sampel tersebut memiliki titerdi bawah 1:20, sehingga dapat disimpulkansampel yang negatif pada uji bioassay memilikititer di bawah 1:20. Hal tersebut senada denganpernyataan Dubey et al., (2008), yangmengemukakan bahwa umumnya titer dibawah 1:25 merupakan hasil reaksi non spesifik.Sehingga untuk uji tapis/screening disarankandimulai dengan titer 1:20 atau 1:25.Dari 31 sampel yang diinokulasikan padamencit melalui uji bioassay untuk mengetahuipatogenitas dari isolat tersebut, sampai hari ke30 tidak ada mencit yang mati ataumenunjukkan gejala klinis yang spesifikDwinata et al  Jurnal Veteriner344UCAPAN  TERIMAKASIHPenulis mengucapkan terimakasih kepadaDirektorat Jendral Pendidikan Tinggi,Departemen Pendidikan Nasional , Sesuaidengan surat Perjanjian Pelaksanaan HibahPenelitian Nomor 027/SP2H/PP/DP2M/III/2008l atas dana yang diberikan  sehingga terlaksa-nanya penelitian ini.DAFTAR  PUSTAKAAsgari  Q,   Farzaneh A,  Kalantari M,  AkramiMohajeri F,  Moazeni M,   Zarifi M,Esmaeilzadeh B , Motazedian MH . 2006.Seroprevalence of Free-Ranging ChickenToxoplasmosis in Sub-Urban Regions ofShiraz, Iran. International Journal ofPoultry Science.262-264.Chomel BB, Karsten R, Adam C, LambilotteC,Theis J, Goldsmith R, Koss J, Chioino C,Widjana DP , Sutisna P .1993. Serosurveyof some major zoonotic infections in childrenand teenagers in Bali, Indonesia. SutheastAsian J Trop Med Public Health 24: 321-326Damriyasa IM,  Edelhofer R, Volmer R, BauerC,  Zahner H. 2001. Current seroprevalenceof Toxoplasma gondii infections in sows intwo regions of Germany. Abstr. Proceeding18th Intern. Conf. WAAVP, Stresa/Italy.A2p, .8Dubey JP. 1986. A riview of Toxoplasmosis inpigs. Vet. Paras. 19: 181-223.Dubey JP, Beattie CP. 1988. Toxoplasmosis ofanimals and man. Boca Raton, FL: CRCPress.Dubey JP. 1998. Refinement of pepsin digestionmethod for isolation of Toxoplasma gondiifrom infected tissue. Veterinary Parasitology74, 75-77Dubey, JP, Graham DH, Dahl E,  Hilali  M, El-Ghaysh A, Sreekumar C, Kwok OCH, ShenSK, Lehman T. 2003a. Isolation andmolecular characterization of Toxoplasmagondii from Chickens and ducks from Egypt.Vet. Parasitol. 114, 89-95.Dubey JP, Navaro  I T, Graham DH, Dahl E ,Hilali M , Freire  LB, Prudencio LB,Sreekumar C, Vianna MCB, Lehman T.2003b. Characterization of Toxoplasmagondii isolates from free range chickens fromParana, Brazil. Vet. Parasitol. 117, 229-234.Dubey JP, Gomez-Marin JE,  Bedoya A,  FabianaLora MCB, Viaanna  D Hi,  Kwok OCH,Shen SK, Marcet PL, Lehmann T. 2005.Genetic and Biologic Characteristics ofToxoplasma gondii Isolates in Free –rangeChickens from Columbia, South Amerika.Vet. Parasitology 134. 67-72Dubey JP,  Edelhoper R,  Marcet P,  ViannaMCB,  Kwok OCH,  Lehmann T. 2005.Genetic and Biologic Characteristics ofToxoplasma gondii Infections in Free-rangeChickens from Austria.  Vet. Parasitology133. 299-306Dubey JP, Lam Thi Thu Huong,  Lowson BWL,Subekti DT, Tassi P, Cabaj W,  Sundar N,Velmurugan GV, Kwok OCH, Su C. 2008.Seroprevalence and isolation of Toxoplasmagondii from free-range chicken in Ghana,Indonesia, Italy, Poland and Vietnam.  J.Parasitol. 94. Pp 68-71Gandahusada S, Endardjo S .1980. Toxoplasmaantibodies in Obano, Irian Jaya, Indonesia.Sutheast Asian J Trop Med Public Health.11: 276-279Sreekumar C, Graham DH, Dahl E, Hilali M,Freire LB, Prudencio LB, Vianna MCB,Lehman T, Dubey JP. 2003. Genotyping ofToxoplasma gondii isolates from chickensfrom India. Vet. Parasitol. 118, 187-194Tenter AM,   Heckeroth  AR,   Weiss LM . 2000.Toxoplasma gondii: From animal to human.Inter. J.for Parasitol., 30: 1217-5Uga S, Ono K, Kataoka N, Hasan H. 1996.Seroepidemiologi of five major zoonotikcparasite infections in inhabitants ofSidoarjo, East Java, Indonesia. SutheastAsian J Trop Med Public Health 27: 556-561Jurnal Veteriner Desember 2012 Vol. 13 No. 4: 340-344

Seroprevalensi dan Isolasi Toxoplasma gondii pada Ayam Kampung di Bali (SEROPREVALENCE AND ISOLATION OF TOXOPLASMA GONDII AMONG FREE-RANGE CHICKENS IN BALI)

https://ojs.unud.ac.id/index.php/jvet/article/download/6024/4502

Seroprevalensi dan Isolasi Toxoplasma gondii pada Ayam Kampung di Bali (SEROPREVALENCE AND ISOLATION OF TOXOPLASMA GONDII AMONG FREE-RANGE CHICKENS IN BALI)

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Directory of Open Access Journals