Obtención de Variantes Hiperactivas e Inactivas de la Endocelulasa Cel9 de Myxobacter Sp. Al-1 Obtención de Variantes Hiperactivas e Inactivas de la Endocelulasa Cel9 de Myxobacter Sp. Al-1

Abstract

Debido a su aplicación industrial, existe un gran interés en la producción de celulasas con propiedades bioquímicas novedosas. Por ello, en el presente trabajo se utilizó una estrategia basada en un método de mutagénesis aleatoria in vivo para la obtención de variantes de la endocelulasa Cel9 del microorganismo gram-negativo Myxobacter Sp. AL-1. Siguiendo este enfoque, se obtuvieron cepas transformantes de Escherichia coli capaces de secretar variantes de la proteína Cel9 cuyas actividades específicas fueron incrementadas hasta 7.5 veces con respecto a la actividad mostrada por la enzima nativa. Del mismo modo, se generaron cepas de E. coli productoras de variantes de la proteína Cel9 con baja o nula actividad enzimática. Experimentos de subclonación y fraccionamiento celular revelaron que las mutaciones asociadas con los fenotipos de las variantes de la enzima Cel9 ocurrieron en la secuencia del gen cel9. Así mismo, se demostró que los fenotipos de las cepas mutantes carentes de actividad enzimática no dependen de su incapacidad para secretar las proteínas mutantes. Además de su potencial aplicación biotecnológica, los resultados obtenidos en este trabajo permiten avanzar en el entendimiento de la relación estructura-función de la celulasa Cel9 de Myxobacter Sp. AL-1.Due to its biotechnological impact, there is currently a growing interest in the production of cellulases with novel biochemical properties. Here, multiple generations of random mutagenesis in vivo and screening were employed to generate variants of the modular cellulase Cel9 from Myxobacter Sp. AL-1. Following this approach, Cel9 variants which showed increases upto 7.5 fold of cellulase activity were obtained. In addition, Cel9 mutants which completely lost the ability to degrade cellulose were also obtained. Results revealed that mutations associated with the phenotype of the Cel9 variants occurred on the mutant gene sequence and that themutants with null or reduced activity did not accumulate in the cell. In addition to the potential biotechnological application of the enzymes with improved activity obtained here, the results of this work will contribute to the understanding of the structure and function of cellulases grouped in the family 9 of glycosyl hydrolases