Individual genomic DNA isolation of Entomogenous nematodes: the Deladenus study case </p><p> Isolamento de DNA genômico de indivíduo de nematoide parasita de insetos: estudo de caso de Deladenus

Abstract

Populational studies involve single individual DNA extraction in order to grant further genotyping data. In the case of some parasitic nematodes, the reduced dimensions and high individual number per infestation makes individual genotyping a difficult task. Aiming the development of a protocol we performed adjustments in available methods in order to acquire the best gain in purity and concentration of genomic DNA. Single specimens were digested in Worm Lysis Buffer and submitted to PCR amplification as a concept test. It was possible to obtain good amount and concentration of DNA from individuals. Quality was sufficient to grant subsequent ITS1 sequencing. Estudos populacionais envolvem a extração de DNA de um único indivíduo para permitir a genotipagem. No caso de alguns nematoides parasíticos, suas dimensões reduzidas e o grande número de indivíduos por infestação tornam a genotipagem difícil. Com o objetivo de desenvolver um protocolo, foram feitos ajustes em métodos já disponíveis, visando melhor ganho em pureza e concentração de DNA genômico. Espécimes foram digeridos em tampão de digestão de verme e submetidos à amplificação por PCR, como prova de conceito. Foi possível a obtenção de boa quantidade e concentração de DNA de indivíduos. A qualidade foi suficiente para garantir o sequenciamento da região ITS1