La salmonelosis es reconocida por ser una de las más importantes causas de problemas de Salud Pública a nivel mundial. En el presente estudio, Salmonella fue aislada de 12 de 30 (40%) muestras de hisopados cloacales de víboras. Se encontraron un total de ocho diferentes serovares de Salmonella. Los aislamientos correspondieron al género Salmonella, especie enterica, subespecie enterica (42%, Salmonella Newport, Saintpaul y Carrau) y Salmonella enterica diarizonae (58%, IIIb 17:-:-, IIIb 48:i:z. IIIb 38:z:- y IIIb 65:k:z). Todos los aislamientos fueron susceptibles a los antimicrobianos utilizados: ampicilina, cefalotina, cloranfenicol, gentamicina, estreptomicina, sulfametoxazol-trimetoprima, tetraciclina, ciprofloxacina, norfloxacina, nitrofurantoína, fosfomicina y polimixina. Las víboras pueden ser una fuente de salmonelosis para los humanos. Existen pocos estudios sobre Salmonella realizados en víboras en parques zoológicos en Latinoamérica. Este es el primer informe sobre este tipo de relevamiento realizado en víboras de zoológico en la República Argentina.Salmonellosis is known to be one of the most important causes of public health problems worldwide. In the present study, Salmonella was isolated from 12 of 30 (40%) fecal swabs of snakes. A total of eight different Salmonella serovars were found. The isolates belonged to genus Salmonella, species enterica, subspecies enterica (42%, Salmonella Newport, Saintpaul and Carrau) and Salmonella enterica diarizonae (58%, IIIb 17:-:-, IIIb 48:i:z, IIIb 65:-:-, IIIb 38:Z:- and IIIb 65:k:z). All isolates were sensitives to the antimicrobials tested: ampicillin, cefalotin, chloramphenicol, gentamicin, streptomycin, trimethroprim-sulphamethoxazole, tetracycline, ciprofloxacin, norfloxacin, nitrofurantoin, fosfomycin and polimixin. Snakes can be a source of human salmonellosis. There are few Salmonella studies from snakes performed in zoological parks in Latin America. This is the first report about this type of survey perfomed in snakes of a zoological garden in the Argentine Republic.Facultad de Ciencias Veterinaria

Caffer, M.

Carriquiriborde, Martín

Leotta, Gerardo Aníbal

Origlia, Javier Aníbal

Vigo, Germán Blas

Servicio de Difusión de la Creación Intelectual

19IntroducciónLa salmonelosis es uno de los más im-portantes problemas de Salud Pública, afectando más seres humanos y ani-males que cualquier otra enfermedad11. Salmonella spp. habita el tracto intesti-nal de animales vertebrados e inverteb-rados en el mundo entero y su excreción resulta en la contamina-ción del agua, alimento, y el medio ambiente23,24. Rep-tiles silvestres y domesticados son res-ervorios de Salmonella3,5,13,18. Una gran variedad de serovares de Salmonella de todas las subespecies han sido ais-lados de reptiles, muchos de los cuales representan serovares raros o también denominados exóticos3. Últimamente, el número de reptiles exóticos se ha in-crementado en popularidad al ser utili-zados como mascotas y este hecho, ha llevado a provocar un incremento en el número de infecciones por Salmonella asociado a reptiles en los Estados Uni-dos18 y en países europeos1. Aunque diferentes reptiles, tales como iguanas, tortugas y víboras fueron descriptos como fuente de salmonelosis humana, sin embargo, no está determinado con qué frecuencia ciertas especies de víboras son colonizadas por especies de Salmonella5,10,22. Los objetivos de este trabajo fueron investigar diferen-tes especies de víboras en el Parque Zoológico de La Plata para determinar la presencia de Salmonella spp., iden-tificar los aislamientos mediante prue-bas bioquímicas y serología, y determi-nar sus susceptibilidades a diferentes antimicrobianos. Materiales y métodosLas muestras fueron recolectadas en el año 2004 en el Parque Zoológico y Botánico de La Plata, Buenos Aires, Argentina. Fueron muestreadas 30 víboras aparentemente sanas perte-necientes a tres Familias y siete Géne-ros distribuidos en nueve hábitats. Las víboras estaban alojadas individual-mente o en grupos en cajas de vidrio, cemento o madera con piso de ce-mento, pasto sintético, tierra, arena u Microbiología            Rev. Med. Vet. (B. Aires) 2011, 92, 1/2: 19 - 22Salmonella enterica enterica y Salmonella enterica diarizonae aisladas de ofidios en el Parque Zoológico de La Plata, Argentina.Vigo G.1*, Caffer M.2, Origlia J.3, Carriquiriborde M.4, Leotta G.5,6 1. Cátedra de Microbiología, 3. Cátedra de Patología Aviar y Pilíferos, 4. Cátedra de Animales de Laboratorio, 5. Cátedra de Tecnología de los Alimentos, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, 60 y 118, 1900, La Plata, Provincia de Buenos Aires, Argentina.2. Servicio Enterobacterias, Instituto Nacional de Enfermedades infecciosas-ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”, 1281 Buenos Aires, Argentina6. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas.*Correo electrónico: gvigo@fcv.unlp.edu.ar No existe conflicto de intereses.Palabras claveSalmonella enterica, Salmonella diarizonae, Serovares, Antimicrobianos, Víboras.RESUMENLa salmonelosis es reconocida por ser una de las más importantes causas de problemas de Salud Pública a nivel mundial. En el presente estudio, Salmonella fue aislada de 12 de 30 (40%) muestras de hisopados cloacales de víbo-ras. Se encontraron un total de ocho diferentes serovares de Salmonella. Los aislamientos correspondieron al género Salmonella, especie enterica, subespecie enterica (42%, Salmonella Newport, Saintpaul y Carrau) y Salmonella enterica diarizonae (58%, IIIb 17:-:-, IIIb 48:i:z. IIIb 38:z:- y IIIb 65:k:z). Todos los aislamientos fueron susceptibles a los antimicrobia-nos utilizados: ampicilina, cefalotina, cloranfenicol, gentamici-na, estreptomicina, sulfametoxazol-trimetoprima, tetraciclina, ciprofloxacina, norfloxacina, nitrofurantoína, fosfomicina y po-limixina. Las víboras pueden ser una fuente de salmonelosis para los humanos. Existen pocos estudios sobre Salmonella realizados en víboras en parques zoológicos en Latinoamérica. Este es el primer informe sobre este tipo de relevamiento rea-lizado en víboras de zoológico en la República Argentina.KeywordsSalmonella enterica, Salmonella diarizonae, Serovars, Antimicrobials, Snakes.SUMMARYSalmonella enterica sv. Enterica and Salmonella enterica sv. Diarizonae isolated from ophidia at La Plata Zoological Park, Argentina. Salmonellosis is known to be one of the most important causes of public health problems worldwide. In the present study, Salmonella was isolated from 12 of 30 (40%) fecal swabs of snakes. A total of eight different Salmonella serovars were found. The isolates belonged to genus Salmonella, spe-cies enterica, subspecies enterica (42%, Salmonella Newport, Saintpaul and Carrau) and Salmonella enterica diarizonae (58%, IIIb 17:-:-, IIIb 48:i:z, IIIb 65:-:-, IIIb 38:Z:- and IIIb 65:k:z). All isolates were sensitives to the antimicrobials tested: ampicillin, cefalotin, chloramphenicol, gentamicin, streptomycin, trimethroprim-sulphamethoxazole, tetracycline, ciprofloxacin, norfloxacin, nitrofurantoin, fosfomycin and polimixin. Snakes can be a source of human salmonellosis. There are few Salmonella studies from snakes performed in zoological parks in Latin America. This is the first report about this type of survey perfomed in snakes of a zoological garden in the Argentine Republic. 20hojas muertas. Los animales fueron ali-mentados con ratones, ratas o cobayos provistos por el Bioterio de la Facultad de Ciencias Veterinarias-UNLP. Los ani-males fueron muestreados mediante hisopados cloacales, los cuales fueron colocados en medio de transporte de Stuart (Laboratorios Britania S.A., Buenos Aires, Argentina) e inmediata-mente transportados al laboratorio. Las muestras fueron inoculadas en 10 ml de agua peptonada taponada (APT) (Laboratorios Britania S.A.) e incubadas a 37ºC por 24 horas. Luego, 1 ml. del APT fue transferido a 10 ml. de caldo tetrationato (Laboratorios Britania S.A.) e incubado a 37ºC por 20-24 horas. Luego, una ansada del caldo de enri-quecimiento fue estriada en una placa de agar entérico hektoen (laboratorios Britania S.A.) con el agregado de no-vobiocina (10µg/ml) (ICN Biomedicals, Ohio, USA). Esta metodología fue la uti-lizada en una publicación anterior21. Las placas fueron incubadas a 37ºC por 24-48 horas. Las colonias sospechosas de ser Salmonella (5 por cada placa) fueron subcultivadas para realizarles las prue-bas bioquímicas. Salmonella spp. fue confirmada por pruebas bioquímicas convencionales9. Los resultados de las pruebas bioquímicas fueron las siguien-tes: S. e. e.: indol: -, rojo de metilo: +, Voges-Proskauer: -, citrato: + Urea: - (S. Carrau: +), lisina: +, ornitina: +, ma-lonato: -, glucosa: +, lactosa: -, manitol: +, dulcitol: +, salicina: -, adonitol: -, produc-ción de sulfito de hidrógeno (TSI): +, tartrato de Jordan´s: +, fermentación del mucato: +. S. e. d: indol: -, rojo de metilo: +, Voges-Proskauer: -, citrato: +, urea: -, lisina: +, ornitina: +, malonato: +, glucosa: +, lactosa: +, manitol: +, dul-citol: -, salicina: -, adonitol: -, produc-ción de sulfito de hidrógeno (TSI): +, tartrato de Jordan´s: -, fermentación del mucato: -. Los medios de cultivo utiliza-dos fueron de laboratorios Britania y los hidratos de carbono y reactivos de Sig-ma Chemical CO, St Louis, USA. Los aislamientos fueron serotipificados con antisueros polivalentes y específicos O y H de acuerdo al método de Popoff y Le Minor15, Popoff.16 en el Instituto INEI-ANLIS “Dr. C.G: Malbrán, Buenos Aires, Argentina y los aislamientos de S. e. diarizonae fueron determinados en el National Microbiology Laboratory, Canadian Science Centre for Human and Animal Health, Winnipeg, Canada, e identificadas de acuerdo al esquema de Popoff16. El método de difusión en disco, según normas del Clinical and Laboratory Standards Institute4, fue uti-lizado para determinar la sensibilidad a los antimicrobianos de todos los aisla-mientos de Salmonella spp. Los  antimi-crobianos (Laboratorios Britania S.A.) empleados y sus concentraciones fue-ron los siguientes: ampicilina (30 µg), cefalotina (30 µg), cloranfenicol (30 µg), gentamicina (10 µg), estreptomicina (10 µg), sulfametoxazol-trimetoprima (23,15-1,25 µg), tetraciclina (10 µg), ciprofloxacina (5 µg), norfloxacina (10 µg), nitrofurantoína (300 µg), fosfomi-cina (50 µg) y polimixina (300 U).ResultadosS. enterica fue aislada de 12 de 30 víboras (40%), 7 (58%) de las cuales pertenecieron a S. e. diarizonae y 5 (42%) pertenecieron a S. e. enterica. Fueron encontrados ocho diferentes serovares: IIIb 17:-:- (en Boa constric-tor constrictor), IIIb 48:i,z (en Boa con-strictor occidentalis e Hydrodinastes gi-gas), IIIb 65:-:- (en Epicrates cenchria), IIIb 38:z:- (en Python regius), IIIb 65:k:z (en Clelia rustica), S. Carrau (en Hydrodinastes gigas), S. Newport (en Epicrates cenchria) y S. Saintpaul (en Bothrops alternatus) (Tabla 1). Todos los aislamientos fueron susceptibles a todos los antimicrobianos utilizados en el estudio. Tabla 1. Origen e identificación de los aislamientos realizados.Familia Nombre común Nombre científicoMuestras positivas/total (%)Cajas Subespecies y serovares de SalmonellaBoidae Boa constrictora Boa constrictor constrictor 1/1 (100 %) A IIIb 17:-:-Boidae Boa lampalagua Boa constrictor occidentalis 1/10 (10 %) B IIIb 48:i:zCrotalidae Yarará grande Bothrops alternatus 1/1 (100 %) C S.  SaintpaulBoidae Boa arco iris Epicrates cenchria 2/5 (40%) D S.  Newport;  IIIb 65:-:-Boidae Pitón bola Python regius 1/1 (100%) E IIIb 38:z:-Colubridae Culebra marrón Clelia rustica 2/2 (100 %) F IIIb 65:k:z (2)Colubridae Ñacanina Hydrodinastes gigas 4/7 (57 %) G S.  Carrau (3);  IIIb 48:i:zColubridae Musaraña Clelia  clelia 0/1 (0%) HColubridae Culebra verde Phylodrias  baroni 0/2 (0%) ITOTAL 12/30 (40%)21DiscusiónLos reptiles cautivos son identificados como reservorios de Salmonella spp. En este trabajo, se halló una alta pro-porción de muestras positivas (40%). El  porcentaje de Salmonella encon-trado en víboras en este estudio, está en concordancia con los resultados de otros investigadores7,10,11,18. Todos los ais-lamientos pertenecieron a S. enterica, subespecie enterica y a S. e. diarizonae. S. e. e. serovar Saintpaul, Newport y Carrau aisladas en este estudio, son patógenos para humanos y animales, y también fueron identificados en reptiles salvajes o cautivos7,11,12. S. Carrau se encuentra asociada a reptiles, que son la fuente de infección de este serovar para los humanos, habiéndose incre-mentado el número de aislamientos de S. Carrau  desde 1987 hasta 1997 en USA y fue incluido como uno de los 20 serovares que se incrementaron du-rante este período2, atribuyéndose este fenómeno a la moda de poseer reptiles como mascotas en este país. Los tres aislamientos de S. Carrau fueron urea positivos, lo que es una característica bioquímica inusual para Salmonella spp., mientras que  el resto de las reac-ciones bioquímicas y serológicas dier-on resultados típicos. La identificación de S. Carrau urea positiva podría ser un problema para los laboratorios que realizan la combinación del agar hierro triple azúcar y agar urea para identifi-car Proteus, una enterobacteria que es parte de la microbiota intestinal normal de muchos reptiles. Este es el primer informe de S. Carrau urea positivo. An-teriormente, solo una cepa de S. Cuba-na con esta característica fue descripta en la literatura6. S. e. diarizonae se en-cuentra asociada principalmente a ver-tebrados de sangre fría. El serovar 48:i:z fue aislado de boa constrictora (Boa constrictor constictor) y de ñacanina (Hydrodinastes gigas) en este estudio, fue informado en otros trabajos en ais-lamientos a partir de víbora cuerno de rinoceronte18 (Bitis nasicornis),de víbo-ra de pestañas (Bothriechis schlegelii), de crótalo17 (Crotalus willardi), de cróta-lo tigre8 (Crotalus tigris) y de víbora rey californiana14 (Lampropeltis gettulus californiae) reflejando su presencia en diferentes especies de víboras de diferentes regiones del mundo. Los serovares 17:-:-, 65:-:-, 65:k:z y 38:z:-, son serovares denominados raros o exóticos y en la bibliografía consultada no fueron encontrados, confirmando la variedad y la presencia de nuevos se-rovares en reptiles. Todos los animales muestreados fueron víboras que no presentaron signos clínicos. Solo una pequeña proporción de Salmonella en reptiles causan signos clínicos o mor-talidad12 y esos serovares no fueron aislados en el presente trabajo, con la excepción del serovar IIIb 48:i:z, aislado en este estudio y de víboras con osteo-mielitis por Ramsay y col17. Todos los aislamientos incluidos en este trabajo fueron susceptibles a un amplio rango de antimicrobianos, lo que concuerda con los resultados de otros estudios7,18. El origen de Salmonella spp. en rep-tiles no está claramente determinado. La infección puede residir en el ovario y puede ingresar por contaminación del alimento o a partir de otros animales infectados3,19. Las siete víboras ñacani-nas (Hydrodinastes gigas) nacieron en el zoológico, por lo tanto, la vía de transmisión más probable pudo haber sido el ovario, ya que los animales fueron mantenidos encerrados en sus cajas sin tener  contacto con otras es-pecies animales. Las víboras incluidas en esta investigación siempre fueron alimentadas con animales de labora-torio, lo cual permite inferir que el ali-mento no fue la fuente de infección del microorganismo.En este estudio se aislaron diferentes serovares aún en animales viviendo en la misma caja. Esto está en con-cordancia con lo hallado por Chiodini y Sundberg3, quienes informaron que Salmonella  no parece que pueda dis-eminarse de un reptil a otro (vía hori-zontal), aún en ambientes cerrados. Los reptiles emergieron como una fuente significativa de infecciones por Salmonella en los últimos años y el pe-ligro de transmisión a humanos puede incrementarse porque la infección por Salmonella es usualmente asintomáti-ca en los reptiles. Las personas que manipulan estos animales o limpian los accesorios de las víboras están expuestos a adquirir Salmonella spp. cuando no tienen en cuenta las medi-das de protección adecuadas. Existen pocos trabajos acerca de Salmonella en víboras realizadas en zoológicos en Latinoamérica. Este es el primer in-forme sobre un estudio desarrollado en víboras de zoológico en la República Argentina. Bibliografía1. Andreaccio A, Miller F. Salmonella osteomyelitis transmitted from an iguana. Orthopedics. 2000; 23:1201-1202. 2. Bandy U, McCarthy H, Hannafin C. Reptile-Associated salmonellosis: a preventable pediatric infections. Med Health. R I. 2003; 86:27-29. 3. Chiodini RJ, Sundberg JP. Salmonellosis in reptiles: a review. Am J Epidemiol. 1981; 113:494-499.4. Clinical and Laboratory Standards Institute. Disk diffusion. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; nineteenth informational supplement, 2009; M-100-S 19.  Wayne, PA, USA.5. Cohen ML, Potter M, Pollard R, Feldman RA. Turtle-associated salmonellosis in the United States, effect of public health action. 1970 to 1976. JAMA. 1980; 243:1247-1249.6. Farmer JJ,  McWohrter A, Huntley G, Catignani J. 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Salmonella enterica sv. Enterica and Salmonella enterica sv. Diarizonae isolated from ophidia at La Plata Zoological Park, Argentina

http://sedici.unlp.edu.ar/bitstream/handle/10915/142105/Documento_completo.pdf?sequence=1

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