Bueno, Juan Gabriel

Martínez, Catalina

Mesa, Ana Cecilia

Montiel, Jehidys

Pino, Nayive

Stashenko, Elena

Zapata, Bibiana

Spanish

Revistas UTP

Scientia et Technica Año XIII, No 33, Mayo de 2007. UTP. ISSN 0122-1701                                                                                                                      247   ACTIVIDAD IN VITRO ANTI-CANDIDA Y ANTI-ASPERGILLUS DE ACEITES ESENCIALES  DE PLANTAS DE LA FAMILIA PIPERACEAE  RESUMEN Plantas de la familia Piperaceae se han utilizado con fines curativos en diferentes regiones del mundo. El objetivo del presente fue evaluar la actividad antifúngica in vitro de 10 aceites esenciales provenientes de especies  del genero Piper, mediante la determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI), con las cepas Aspergillus flavus ATCC 204304 y A. fumigatus ATCC 20430, siguiendo el protocolo CLSI M38-A. Además, se evaluaron las cepas Candida krusei ATCC 6258 y Candida parapsilosis ATCC 22019 según el protocolo M27-A2 modificado. El aceite esencial con mayor actividad fue el de  P. sanctifelisis para C. krusei (CMI:125 µg/mL).  PALABRAS CLAVES: actividad antifúngica,  Piperaceae,  aceites esenciales   ABSTRACT Plants of the Piperaceae family have been used with medicinal purposes in different regions around the world. In vitro antifungal activity of 10 essential oils from species of Piper genus were measured by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) against A. flavus fungi ATCC 204304 and A. fumigatus ATCC 204305 following the standard protocol CLSI M38-A. In addition, Candida krusei ATCC 6258 and C. parapsilosis ATCC 22019 were evaluated with modified protocol M27-A2. The essential oil with the most antifungal activity was Piper sanctifelisis for C. krusei (CMI: 125 µg/mL).  KEYWORDS: Antifungal activity, Piperaceae, essential oils.    ANA CECILIA MESA Bacterióloga y laboratorista clínico, MSc Profesor Asistente Grupo Infección y Cáncer Universidad de Antioquia amesa@medicina.udea.edu.co  JEHIDYS MONTIEL Microbióloga y bioanalista Auxiliar de Investigación Grupo Infección y Cáncer Universidad de Antioquia jeyito126@hotmail.com  CATALINA MARTÍNEZ Microbióloga y bioanalista Auxiliar de Investigación Grupo Infección y Cáncer Universidad de Antioquia catamartinezjyahoo.com    BIBIANA ZAPATA Microbióloga y bioanalista, Asp MSc Estudiante de Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas Grupo Infección y Cáncer Universidad de Antioquia bibianazapata@gmail.com  NAYIVE PINO  Bióloga Química, MsC  Profesora  Grupo de Productos Naturales  Universidad Tecnológica del Chocó  nayivepino@yahoo.com  JUAN GABRIEL BUENO Médico y Cirujano, Asp MSc Estudiante de Maestría en Ciencias Básicas Biomédicas Grupo Infección y Cáncer Universidad de Antioquia juangbueno@medicina.udea.edu.co  ELENA STASHENKO Química, PhD Profesora Titular Grupo CIBIMOL Universidad Industrial de Santander elena@tucan.uis .edu.co  Fecha de Recepción: 15 Febrero de 2007 Fecha de Aceptación: 12 Marzo de 2007 Scientia et Technica Año XIII, No 33, Mayo, 2007. U.T.P    248 1. INTRODUCCIÓN  Durante las últimas décadas, las infecciones ocasionadas por hongos han incrementado notablemente dado el aumento de la población inmunocomprometida y al avance en los trasplantes de órganos  [1].  A nivel mundial, se explora el uso y valoración de los productos naturales como  fuente de nuevos y variados agentes antimicóticos [2]. Las plantas, en particular, representan un alto potencial terapéutico si se considera que desde la antigüedad son utilizadas para el tratamiento de diversas enfermedades infecciosas [3].   Plantas del género Piper, son ampliamente utilizadas en la medicina tradicional para el tratamiento de vaginitis, desordenes intestinales, y como antimicrobiano y citotóxico [4]. La evaluación in vitro de extractos de estas plantas, muestran propiedades antifúngica y antibacteriana. Los aceites esenciales (AE) de Piper spp. inhiben el crecimiento de una amplio grupo de microorganismos que causan infecciones importantes en humanos como Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa , E.coli, y los hongos Trichophyton mentagrophytes, C. albicans,  A. flavus y A. fumigatus [5].   2. MATERIALES  Y MÉTODOS  2.1. Material vegetal  Se utilizaron 10 plantas de la familia Piperaceae recolectadas en diferentes regiones de Colombia .  2.2. Obtención de AE  Los AE se obtuvieron de 350g de material fresco correspondientes a hojas y tallos, por el método de hidrodestilación por la técnica de arrastre de vapor, descrito por Stashenko y col (2004). [6].  2.3. Actividad antifúngica 2.3.1. Cepas  Se utilizaron las cepas C. parapsilosis ATCC  (American Type Culture Collection) 22019, C. krusei ATCC 6258, A. flavus ATCC 204304 y A. fumigatus ATCC 204305. 2.3.2 Preparación de las placas con los AE  De cada uno de  los AE se realizaron cinco diluciones dobles seriadas en DMSO a partir de una  solución stock de 20mg/mL. Posteriormente, se realizó una dilución 1:20 en agua destilada con tween 80 al 0.001% , para obtener cinco concentraciones finales (500- 31.25µg/mL). De estas soluciones se agregaron  100uL en placas de 96 pozos. Estas se conservaron a -70°C hasta su uso. Los ensayos se realizaron por duplicado en tres momentos diferentes.  2.3.3. Determinación de las CMIs    La concentración mínima inhibitoria (CMI), definida como la mínima concentración de un AE aceite que inhibe el crecimiento de un hongo, se determinó por la técnica de microdilución en caldo EUCAST para levaduras fermentadoras de glucosa [7]. Para las especies de Aspergillus, se siguió el protocolo CLSI M38-A [8].  2.4 ANÁLISIS ESTADÍSTICO Se determinaron las medias geométricas (MG) y las desviaciones estándar (DS) de las CMIs de los seis resultados obtenidos para cada AE  con cada cepa.  3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN  La familia Piperaceae comprende 10 géneros. En el  género Piper se estima que existen aproximadamente 700 especies  algunas utilizadas para la atención primaria en salud [9]. Estudios previos reportaron su utilidad como antiviral, antibacteriano y particularmente como antimicótico. Estas propiedades biológicas son atribuidas a la presencia de lignanos y flavonoides en los extracto. Además, la actividad de estos, puede variar de acuerdo al solvente utilizado y a la parte de la planta empleada para la extracción [10].   En este estudio se encontró actividad importante en el aceite extraído de dos plantas: P. sanctifelisis y Piper spp, contra C. krusei ( CMI de 125 ug/mL) (Tabla 1). Otras especies también presentaron actividad contra esta levadura a concentraciones mayores (Tabla 1). C. krusei presenta resistencia intrínseca a fluconazol, medicamento de elección para el tratamiento de infecciones por levaduras del género [11]. por lo que identificar moléculas con actividad en este microorganismo es de vital importancias.   El AE de la planta P.bogotense fue el único que mostró actividad contra A. fumigatus. Este hongo es el más implicado en aspergilosis invasiva la cual causa alta mortalidad en individuos inmunocomprometidos [12]          Scientia et Technica Año XIII, No 33, Mayo de 2007. U.T.P     249 AE Cepa   C. parapsilosis  C. krusei  A. flavus  A. fumigatus       Piper sanctifelisis >500   125 >500 >500 Piper auritum Kunth  >500 >500 >500 >500 Piper auduncum >500   250 >500 >500 Piper spp. >500   250 >500 >500 Piper bogotense  >500 >500 >500   250 Piper michita >500 >500 >500 >500 Piper friedestalina >500 >500 >500 >500 Piper spp.  >500    125 >500 >500 Piper brachypodom >500 >500 >500 >500 Piper brachypodom >500 >500 >500 >500  Tabla 1. MG de las  CMIs (ug/mL) de 10 aceites esenciales procedentes de plantas del género Piper con cuatro cepas de hongos  4. CONCLUSIONES   Los resultados obtenidos en este estudio, presentan una posibilidad para la búsqueda de moléculas con actividad antimicótica en AE derivados de plantas del genero Piper Estudios posteriores se enfocaran en la identificación de los compuestos responsables de la actividad antimicótica de los aceites. Además se evaluará la actividad citotóxica.  5. BIBLIOGRAFÍA   [1] Quindos, G., 2002. 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Actividad in vitro anti-candida y anti-aspergillus de aceites esenciales de plantas de la familia piperaceae

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