Poster presentado al XXII Congreso Nacional de Microbiología celebrado en Salamanca los días 11-14 julio de 2011.Gobierno Vasco IT376-1

Arana Basabe, María Inés

Barcina López, María Isabel

Gallego Andrés, Lucía

Garaizabal Ruiz, Idoia

Kaberdin, Vladimir

Oruño Beltrán, Maite

Spanish

Archivo Digital para la Docencia y la Investigación

BIBLIOGRAFÍA 1. Arana I, Muela A, Orruño M,  Seco C,  Garaizabal I,  Barcina I. 2010.  FEMS Microbiol Ecol 74: 500- 509. 2. Banning N, Toze S, Mee .BJ. 2002. J Appl Microbiol 93:69-76. 3. Barcina I, Arana I. 2009. Rev Environ Sci Biotechnol 8:245-255. 4. Hobbie JE, Daley RJ, Jasper S. 1977. Appl Environ Microbiol 33:1225-1228.  5. Joux F, Lebaron P, Troussellier M. 1997. FEMS Microbiol Ecol 22:65-76. 6. Muela A, Seco C, Camafeita E, Arana I, Orruno M, López JA, Barcina I. 2008. FEMS Microbiol Ecol 64:28-36. 7. Oliver JD. 2010. FEMS Microbiol Rev 34:415-425. Influencia de las bajas temperaturas en la supervivencia  y el perfil proteico de Vibrio harveyi Maite Orruño, Idoia Garaizabal, Lucía Gallego, Vladimir Kaberdin, Inés Arana & Isabel Barcina Dpto. Inmunología, Microbiología y Parasitología, Fac. Ciencia y Tecnología, Fac. Farmacia, Fac. Medicina y Odontología Universidad del País Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea, Apdo. 644, E-48080 Bilbao, Spain   En situaciones de estrés, gran número de bacterias incapaces de formar estructuras de resistencia adoptan el estado Viable No Cultivable (VNC)  Los factores ambientales regulan la formación de este fenotipo, siendo la temperatura uno de los más estudiados (3, 7)  La distribución del género Vibrio en el medio marino presenta una pauta estacional regida por la temperatura, con un patrón similar al descrito para bacterias psicrófilas/psicrotrofas (Pseudomonas fluorescens) pero opuesto al encontrado para bacterias mesófilas (Escherichia coli) (1) OBJETIVO Estudiar comparativamente los cambios fisiológicos/fenotípicos que experimentan poblaciones de V. harveyi y E. coli mantenidas en agua de mar e incubadas a 4º y 20ºC.  MATERIALES Y MÉTODOS:  Vibrio harveyi CECT 525 y Escherichia coli CECT 416   Agua de mar natural (Arminza, Vizcaya) esterilizada en autoclave   Temperaturas de incubación: 4º y 20ºC  Cuantificación de poblaciones microbianas: Nº total de células/ml (4) Nº de bacterias con membrana citoplasmática íntegra/ml (2, 5) Nº de bacterias cultivables/ml en TSA y AM  Perfil metabólico: API 20E  Perfil proteómico de la membrana externa (6) E. coli CECT 416 V. harveyi CECT 525 Células totales Células viables Células cultivables (TSA) Células cultivables (AM) 10 Pm (kDa) 25 37 100 50 pH 4 pH 7 pH 4 pH 7 Log Nº células/ml Log Nº células/ml Tiempo (d) Tiempo (d) Tiempo (d) Tiempo (d) 4ºC 4ºC 20ºC 20ºC 10 Pm (kDa) 25 37 100 50 pH 4 pH 7 pH 4 pH 7 Ioduro de propidio (2) Vibrio harveyi Escherichia coli 4ºC Temperatura inductora del fenotipo 20ºC Mantenimiento integridad celular Disminución de tamaño Células totales Mantenimiento integridad celular Sin variaciones en tamaño Fallo kit Live/Dead BacLight: 4 - 5 d Fallo método IP: 10 - 12 d Células activas Dificultad relativa de enumeración Efecto negativo de medios con baja salinidad y elevada concentración de nutrientes Células cultivables - Difícil recogida de células Fácil rotura Extracción de proteínas de membrana Fácil recogida de células  Dificultad relativa de rotura Rango pH: 4,5 - 5,5 Rango Pm: 70 -  <15 kDa Proteínas Rango pH amplio: 4 - 6,5 Rango Pm: 100 – 25 kDa  Escasa Variación proteoma Incremento proteínas de bajo Pm Kit Live/Dead BacLight (Molecular Probes) (5) Log Nº células/ml Día 4 Día 6 Día 14 Log Nº células/ml CONCLUSIONES  Diferencias en el proceso de tránsito al estado VNC dependiendo del tipo microbiano  Diferentes estrategias rinden un fenotipo común A FUTURO Análisis shotgun  (SGIker, UPV/EHU) AGRADECIMIENTOS  Grupos Gobierno Vasco IT376-10  Beca Predoctoral Gobierno Vasco (I. Garaizabal) Día 0 Día 15 Día 0 Día 15 © 2011 Maite Orruño et al.  

Influencia de las bajas temperaturas en la supervivencia  y el perfil proteico de Vibrio harveyi

http://addi.ehu.es/bitstream/10810/9308/1/Poster%20Vibrio%20SEM%202011.pdf

Influencia de las bajas temperaturas en la supervivencia y el perfil proteico de Vibrio harveyi

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