Coelho, Paulo Marcos Zech

Gazzinelli, Giovanni

Pellegrino, J.

Pereira, Leógenes Horácio

Portuguese

Cadernos Espinosanos (E-Journal)

.Rev. Inst. Med. trop. São Paulo .15(6):417-420,. novembro-dezembro, 1973 CDU 616. 995 .122 PADRONIZAÇÃO DO MÉTODO DJ;: INCORPORAÇÃO DE 59Fe, EM BIOMPHALARIA GLABRATA) PARA ESTUDOS DE EFEITOS DE DENSIDADE POPULACIONAL Paulo Marcos Zech COELHO (1), Giovanni GAZZINELLI (2), J. PELLEGRINO (3) e Leógenes Horácio PEREIRA (1) RESUMO Foram realizados estudos sobre o método de incorporação de 59Fe por Biom-phalaria glabrata, visando sua padronização. Os resultados obtidos estabelecem re-lações entre diversas variáveis e mostram que as contagens de radiação devem ser feitas nas partes moles do molusco. Resultados reprodutíveis são obtidos quando o tempo de incubação é fixado em 24 horas e o isótopo usado na concentração de 2,0 µ,Ci/300 ml. INTRODUÇÃO O crescimento pondera! e numérico de uma população de planorbídeos está condicionado .a múltiplos fatores, tais como a oferta de alimento, número de indivíduos, tamanho do espaço, inimigos naturais, competidores. Es-te crescimento parece ser também limitado por substâncias eliminadas pelos próprios mo-luscos. WRIGHT 5 sugere que os efeitos de-·correntes da densidade populacional de mo-luscos de habitat aquático são devidos a substâncias tóxicas eliminadas pelos próprios ,caramujos possivelmente hormônios. BERRIE & VISSER 1 extraíram de um lago onde se encontrava Biomphalaria sudanica uma subs-tância inibidora do crescimento do referido molusco. Em concentração mais elevada, tal ~s_ubstância era letal para o caramujo. · Baseando-se em estudos sobre captação de ferro por Biomphalaria glabrata, feitos por HENEINE & col. 3, GAZZINELLI & coL 2 veri-ficaram que populações de moluscos de maior -densidade incorporavam menos 59Fe que po-pulações menos densas. Estes Autores con-cluiram que a incorporação de 59Fe é méto-do útil para o estudo dos efeitos da densi-dade populacional em B. glabrata. No pre-sente trabalho, este método é estudado com maior dc:alhe, visando sua padronização. MATERIAL E MÉTODOS Moluscos Os exemplares de Biomphalaria glabrata eram provenientes de criação mantida em laboratório durante um tempo superior a 10 anos. Alimentaçiio Para a alimentação dos moluscos foi usa-da alface seca, desidratada e pulverizada. A desidratação foi feita a 50°C. A ração pre-parada da forma acima descrita era adminis-trada, em algumas experiências, na dose de 8 mg/caramujo/dia; em outras, a dose foi reduzida à metade (para moluscos de menor tamanho). Contribuição n.0 33 do Grupo Inter-Departamental de Estudos sobre Esquistossomose, Instituto de Ciências Biológicas da UFMG (1) Departamento de Zoologia e Parasitologia do ICB, UFMG (2) Departamento de Bioquímica e Imunologia do ICB, UFMG '(3) Grupo Inter-Departamental de Estudos sobre Esquistossomose, ICB, UFMG, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil · Endereço para separatas: Caixa Postal 1404, 30000 Belo Horizonte, Brasil 417 COELHO, P. M. Z.; GAZZINELLI, G.; PELLEGRINO, J. & PEREIRA, L. H. - Padronização do método d·e Incorporação de "Fe, em Biomphalaria glabrata, para estudos de efeitos de densidade po-pulacional. Rev. Inst. Med. trop. São Paulo 15:417-420, 1973. Água utilizada Os caramujos eram colocados, em cad~ experiência, em 300 ml de água deionizada. Temperatura e aeração A temperatura da água era mantida cons-tante (27 + 0,5°C). A aeração era feita continuadamente, utilizando ar bombeado por compressores. Isótopo usado - 59Fe O material empregado foi o citrato ferroso (Ferrutope Squibb) acondicionado em fras-cos contendo 250 ,,uCi. A atividade específica inicial foi de 4,98 mc/mg e o ferro radioativo só foi usado quan-do apresentava mais de 30% de atividade inicial. Aparelho medidor de radioatividade O rádio analisador usado foi de marca Nuclear Chicago - mod. 181-B, calibrado para detectar partículas gama. A calibração foi fixada nos seguintes valores: Rádio analisador Ajustador de alta voltagem ... posição 900 Abertura da janela .. , ...... posição 6 Nível da base .............. posição 650 Aumento .................. posição 2 Contador Teste . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . posição ligado Escala . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . posição 1000 Operação Voltagem posição tempo 1200 volts O material a ser estudado era introduzido no poço do aparelho sendo feita a conta-gem em cpm. Todas as contagens foram feitas no apaa relho calibrado conforme esquema descrito acima. 418 Avaliação da incorporação do 59Fe pelos moluscos Caramujos inteiros: após cuidadosa lava-gem em água corrente, os moluscos eram co-locados nos tubos de plástico do aparelho e a seguir feitas as contagens. Partes moles dos caramujos: os moluscos eram mortos em água quente (70°C), onde eram deixados durante 30 segundos. As par-tes moles eram então retiradas da concha, colocadas em tubos de hemólise e estes nos tubos de plástico do aparelho. Conchas: em alguns casos, as medidas eram feitas com a concha íntegra. Em outros, as conchas eram trituradas e os fragmentos colocados dentro de tubos de hemólise. RESULTADOS E CONCLUSÕES Os dados obtidos mostram haver uma re-lação direta entre a concentração do isótopo e sua incorporação pelo caramujo (Tabela I). Da mesma forma, há uma incorporação pro-porcional ao tempo de incubação quando se usa uma concentração determinada (Tabe-la II) . Os resultados são satisfatórios usan-do-se a concentração de 2,0 .,uCi e o tempo de incubação de 24 horas. Pelos dados da Tabela III pode-se verifi-car que praticamente não houve diferença na incorporação entre as partes moles dos mo-luscos de 1,5 e 2,5 cm, embora os moluscos inteiros de 2,5 cm pesassem três vezes mais que os moluscos de 1,5 cm. A relação in-corporação ( cpm) /peso total ( mg) das par-tes moles foi de 1,17 para os caramujos de 1,5 cm de diâmetro e 0,36 para os caramu-jos de 2,5 cm de diâmetro. Os resultados apresentados na Tabela IV demonstram que houve contaminação de isó-topo na concha dos moluscos, podendo esta mascarar comparações estatísticas entre mé-dias com valores próximos, quando se ava-lia a radioatividade do animal inteiro. Dos dados da Tabela V conclui-se que . as conchas dos moluscos se contaminam propor-COELHO, P. M. Z.; GAZZINELLI, G.; PELLEGRINO, J. & PEREIRA, L. H. - Padronização do método de incorporação de 59Fe, em Biomphalaria glabrata, para estudos ele efeitos de densidade po-pulacional. Rev. Inst. Med. trop. São Paulo 15:417-420, 1973. TABELA I Incorporação do 50Fe pela B. glabrata em função da concentração elo isótopo Quantidade N.0 de Incorporação Coeficiente de Grupo de 59Fe caramujos Média ± desvio-padrão variação (µCi) (cpm) (%) 1 0,35 10 577 ± 130 23 2 0,70 10 1.263 ± 222 18 3 1,05 10 2.118 ± 719 34 4 1,40 10 2.832 ± 674 24 5 1,75 10 3.576 ± 752 21 6 2,10 10 3.843 ± 838 22 TABELA II Relação entre incorporação e tempo de incubação. Conc-entração de 2,0 µCi (do 69Fe) Incubação N. 0 ele Média ± desvio-padrão Coeficiente Grupo (horas) caramujos (cpm) de variação 1 16 10 596 ± 109 18 2 26 10 1.006 ± 119 12 3 40 10 1.321 ± 185 14 TABELA III Relação entre o peso, tamanho e incorporação do 50Fe Tamanho N.0 de Peso do Incorporação nas partes moles (cm) caramujos caramujo inteiro média ± desvio-padrão (gr) (cpm) 1,5 10 0,516 ± 0,80 603 ± 176 CV= 16% CV = 29% 2,5 10 1,680 ± 0,210 604 ± 217 CV = 13% CV = 36% CV Coeficiente de variação TABELA IV Relação entre a radioatividàue da concha e partes moles, em caramujos de 1,2 cm de diâmetro Média desvio-padrão Coeficiente de Material N.º de caramujos ± variação (cpm) ( %) Concha 14 591 ± 107 18 Partes moles 14 377 ± 86 23 419 COELHO, P. M. Z.; GAZZINELLI, G.; PELLEGRINO, J. & PEREIRA, L. H. - Padronização do método de incorporação de "Fe, em Biomphalaria glabrata, para estudos de efeitos de densidade po-pulacional. .Rev. Inst. Med. trop. São Paulo 15:417-420, 1973. TABELA V Relação entre o tamanho do molusco e a incorporação do 59Fe na concha Diâmetro da concha N.0 de caramujos (cm) 1,5 10 2,5 10 cionalmente à sua área. Assim, para se obter resultados válidos na comparação da incor-poração entre dois grupos, quando as conta-gens são feitas em animais inteiros, os ani-mais devem ter o mesmo diâmetro da con-cha. SUMMARY Standardization of the 59Fe uptake method, by Biomphalaria, for studies on the crowding · effect Studies were undertaken aiming to the standardization of the 59Fe uptake method. The results obtained demonstrated that the radiation counts should be clone in the soft parts of the mollusc. Reproducible data are obtained when the incubation period is 24 hours and the isotope concentration 2. O µCi/ 300 ml. 420 Média ± desvio-padrão Coeficiente de variação (cpm) (%) 306 ± 62 1 20 1.235 ± 272 22 REFERll:NCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. BERRIE, A. D. & VISSER, S. A. - Inves-tigations of a growth-inhibiting substance affecting a natural population of fresh-water snails. Physiol. Zool. 36:167-173, 1963. 2. GAZZINELLI, G.; RAMALHO-PINTO, F. J.; PELLEGRINO, J. & GILBERT, B. - Uptake of 69Fe as a tool for the study of the crowd-ing effect in Biomphalaria glabrata. Amer. J. Trop. Med. and Hyg. 19:1034-1037, 1970. 3. HENEINE, I. F.; GAZZINELLI, G. & TAFU-RI, W. L. - Iron metabolism in the snail Biomphalaria glabrata: uptake, storage, and transfer. Oompt. Biachem. Physiol. 28:391-399, 1969. 4. WRIGHT, C. A. - The crowding phenomenon in laboratory colonies of fresh-water snails. Ann. Trop. Med. Parasit. 54:224-232, 1960. Recebido para publicação em 27/2/1973. 

Padronização do método de incorporação de ⁵⁹Fe, em biomphalaria glabrata) para estudos de efeitos de densidade populacional

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