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Tovo, Luiz Carlos

Portuguese

Em Questao

Fenômeno de aglutinação uma de suas aplicações práticas

Archives of the Faculty of Veterinary Medicine UFRGS

As proteinas ingeridas pelo or-ganismo humano são atacadas pe-las enzimas do aparêlho digestivo,e se transformam em amino-ácidos,sendo êstes finalmente aproveita-dos pelo organismo que sintetizaráa sua própria proteina à partirdêles.Se, entretanto, a proteina fôr ad-ministrada por via parenteral, elaescapará à ação das enzimas di-gestivas e quando atingir a cor-rente circulatória e a intimidadedos tecidos vai gerar uma reaçãodo organismo cuja finalidade e ade eliminar a proteina estranha àcomposição do corpo animal. Estareação consiste na elaboração desubstâncias que reagem específica-mente com a proteina injetada.A estas substâncias dá-se o nonìede ANTICORPOS e às substânciasFENÔMENO DE AGLUTINAçÃ,OUMA DE SUAS APLICAçÕES PRÁTICASór2.1t8.221 .2Luiz Carlos Tovo 'que como as proteinas, solicitam aprodução de anticorpos, dá-se onome de ANTÍGENO.Denomina-se então, de FUNçÃOANTIGÊNICA, a capacidade quetêm determinadas substâncias (pro-teinas) de produzirem anticorpos ereagirem com êstes anticorpos pro-duzidos.BORDET (1895), GRUBER e DU-RHAM (1896) demonstraram quese â uma emulsão de vibriões colé-ricos adicionarmos um traço de sô-ro anticoÌérico, os germes se reú-nem em grumos depositando-se nofundo do tubo. e deixando o sobre-nadante claro.Êste mesmq fenômeno, foi veri-ficado com fiumerosas outras es-pécies de microrganismos e a êledá-se o nomè de AGLUTINAçÃOColaborador do Ensino da Cáledro de MìcrobiologioR. Fac. Odont. P. A. 2 (l/2): L25-132, jan./dez. 1960726e ao anticorpo que o determina, ode aglutinina.Há pois, reação entre antígeno eanticorpo, e se o antígeno estiversituado na superfície de partículas,rrsultará a agregação das mesmase teremos então, o fenômeno daAGLUTINAÇÃO.Já os antigos haviam observadoque ao transfundirem o sângue deanimais domésticos parâ o homem,êstes apresentavam hemoglobinú-ria, febre e não raro, morriam.LANDOIS (1875) verificou quemisturando-se <<in vitro> o sanguehumano ao sangue de animais, o-corria a aglutinação e lise dos gló-bulos vermelhos.LANDSTEINER (1900) entretan-to, foi quem esclareceu os aciden-tes pós-transfusionais ao descobriros grupos sanguíneos do sistemaABO, dizendo serem devidos a rea-ções do aglutinogênio contido nashemácias do doador com as isoa-glutininas normais do sôro do re-receptor.Com a descoberta do fator Rhem 1940, ficou demonstrado que a-cidentes pós-transfusionais pelosistema ABO podiam ser desenvol-vidos, devido a uma isoimunizaçãoou sensibilização do receptor pro-vocadas por transfusões anterio-res, seja pelo estímulo antigênicoexercido pelas hemácias fetais nodecurso da gestação.Tipos de grupos sanguineos -LANDSTEINER (1900) foi quemprimeiro reconheceu a existênciade três grupos sanguineos de 22indivíduos normais, deixando rea-gir entre si os sôros e as hemâciasdêsses individuos.Estabeleceu então:Grupo O - quando as hemâciasdos indivíduos erâm inaglutináveis.Grupos A e B - quando os gló-bulos vermelhos dos indivÍduoseram aglutináveis por certos sôrose não por outros.DESCATELLO e STURLI (1901)descobriram um 40 grupo, denomi-nado AB, cujas hemácias eram a-glutináveis por ambos os sôros.Os grupos sanguíneos ficaramassim caracterizados:Denominação Reações das hemâ.cias com os sôrosdo grupo Anti-A Anti-BoAB++A+B+(De O. Bier)Essa nomenclatura ê internacio-nal, e hoje preferida às de JANS-KY (I, II, ilI, IV) e de MOSS (IV,II, III, I) a fim de designar res-pectivamente os grupos O, A, B,AB.A nomenclatura internacionalindica o mecanismo pelo qual seoperam as reações cruzadas entreos glóbulos e os sôros dos dife-rentes grupos.Basta reter que as designaçõesO, A, B, e AB denotam os agluti-nogênios presentes nas hemácias eque conforme a regra de LANDS-TEINER não existem no sôro aglu-tininas capazes de agir sôbre asR. Fac. Odont. P. A. 2 (I/2) : L25-132, jan./dez. 1960hemácias do mesmo sangue (<<hor-ror autotóxico>) mas sim pâra osantígenos que nelas não ocorrem.Assim, üE individuo do grupoA, em virtude de possuir em suashemâcias o aglutinogênio À, só po-derá conter no sôro a aglutina B(Anti B); o indivÍduo B possuiráo aglutinogênio B e aglutinina a(Anti A), etc. conforme o quadroabaixo: (de O. Bier)Grupo Aglutinogêniosan- nas hemáciasguíneoAglutininasno sôroârbb (anti-B)a (anti-A)oABABoABABTécnica para a determinação dosgrupos sanguíneos - A determi-nação dos grupos sanguíneos podeser feita em lâmina ou em tubopelas técnicas de BETH-VINCENTou LANDSTEINBR, respectivamen-te.Descreveremos a técnica em lâ-mina com sôros anti-A e anti-B daJOHNSON.JOHNSON.Êstes sôros são preparados comsangue de doadores selecionados,imunizados por injeções de subs -tâncias específicas A e B. Possuemelevado título de agÌutininas e dãoreações rápidas quando usados noteste em lâmina ou em tubo.Técnica do teste em lâmina1 - Colocar num dos cantos da127lâmina uma gôta de sôro anti-A(verde) e no canto oposto, uma gô-ta de sôro anti-B (amarelo). E con-veniente dividir a lâmina ao meiocom lápis dermogrâfico para evitarconfusão.2 - Deixar cair uma pequenagôta de sangue fresco sôbre cadagôta de sôro (A quantidade de san-gue deve ser sempre menor que ade sôro).3 Misturar ir'dividualmenteo sangue e o sôro de cada tipo comcantos diferentes de outra lâminalimpa.4 - Fazendo oscilar a lâmina,âssegura-se uma mistura perfeitado sôro e do sangue. Em cêrca de30 segundos a aglutinação tem iní-cio, tornando-se evidente em menosde 2 minutos podendo o resultadoser lido a olho nú.Sangues que contêm o aglutino-gênio A ou B reagem intensamente,porém o aglutinogênio ^z reagemais lentamente e a aglutinação émais delicada.Deve-se repetir a leitura após5 minutos, a fim de confirmar osresultados.Colheita de sangueDeve-se usar sangue fresco. San-gues coaguladoS ou contaminadosnão são satisfafórios.I - Sangue. venoso colhido emoxalato ou heparina é ideal para oteste e deve s& preferido.2 - Sangue da polpa do dedotambêm pode ser empregado (usa-do por nós em nossos testes); nês-te caso êle deve ser pingado dire-tamente sôbre as gôtas de sôro pré-R. Fac. Odont. P. A. 2 (I/2): L25-L32, jan./dez. 1960128viamente colocadas na lâmina. Osangue da polpa do dedo não de-ve ser oxalatado.3 - Na eventualidade de só sepoder usar sângue coagulado, de-ve-se proceder primeiro a liberta-ção das hemácias, por meio de umbastonete de vidro ou de uma pi-peta.a - preparar uma suspenção dehemácias à 10% em solução fisioló-gica.b - usar â suspensão de hemá-cias da mesma maneira já descrita.As pesquisas de VON DUNGERNe HIRSZFELD (1910) mostraramque os sôros B, quando absorvidospor certas hemácias A, conserva-vam ainda a capacidade de agluti-nar outras hemácias A.Êste fenômeno, analisado sobre-tudo por LANDSTEINER e seus co-legas (1926), levou à conclusão deque há uma diferença qualitativaentre êsses dois tipos do sangue A,que podem ser convenientementedesignados com A, e Ar.Existem pois, dois subgrupostanto de A como de AB: Ar, Ãr,ArB, A2B.Nos sôros de B ê O, além daisoaglutinina a, que reage tanto cornglóbulos A, como com glóbulos Ar,costuma existir também uma aglu-tinina al, específica para os glóbu-los Ar.Na seleção de sôros padrões an-ti-A (a) parâ a determinação dosgrupos sanguíneos é Ímportanteusar sôros que mostrem título ele-vado em relação à uma série desangues A, a fim de incluir tantoglóbulos A1 como glóbulos A2.As isoaglutininas encontradas nosangue humano são de grande im-portância devido ao número cres-cente de transfusões sanguíneas quese estão utilizando para tratar mui-tas afecções clínicas e cirúrgicas.Entretanto, ê de maior impor-tância determinar corretamente otipo de sangue antes de injetá-lo emum paciente, devido ao perigo deuma reação grave (aglutinação) sese administra sangue de tipo incom-patível.Na transfusão sanguinea o me-lhor é injetar sangue do mesmo ti-po. Todavia quando isto não é pos-sível, pode-se dar sangue do tipoO, se não há incompatibilidade dofator Rh.Esquema para escolha de um doa-dor: (de O. Bier),zf\,/t\,/ì\,/lrA-+Ae--{-+B<-BÌoFator Rh - Os avanços mais sig-nificativos nas transfusões sangul-neas e em certas enfermidades cli-nicas, resultaram do descobrimen-to por LANDSTEINER e WIENER(1940) do antígeno Rh (agÌutino-gênio).Em 1939, LEVINE e STETSONjá haviam observado um acidentetransfusional numa paciente que a-presentara copiosa hemorragiaABJABR. Fac. Odont. P. A. 2 (L/2) | 125-L32, ian./dez. L960após haver dado à luz um feto ma-cerado, e por isso recebera trans-fusões de sangue do marido, quecomo ela, era do tipo O. Esta pa-ciente possuia no seu sôro uma aglu-tinina irregular que aglutinava osangue do marido e do filho, bemcomo as hemácias de 857o de in-divíduos pertencentes ao gruPo O.Sugeriram então que a reação trans-fusional observada se devia a umaaglutinina atipica, resultante daimunização da mãe por um antíge-no fetal herdado do pai.Em 1940, LANDSTEINER e WIE-NER, injetando hemácias de <<Ma-cacos rhesus> em coelhos consegui-ram a produção de anti-corpos queaglutinavam, não só os glóbulosvermelhos daquêle, como os de cêr-ca de 85% da população branca.Denominaram fator Rh ao ele-mento responsável por esta reaçãode imunização, símbolo êste tiradodas duas primeiras letras de <<Rhe-sus>.Pouco depois LEVINE eomKATZIN, BURNHAM E VOGEL,constataram que um acidente trans-fusional idêntico ao que relataraem 1930 era devido ao fatôr Rh, eque a paciente era portadora deuma aglutinina irregular anti-Rh.Estava assim descoberto um no-vo, fator sanguíneo, eue acarretouprofundas modificações nos concei-tos e técnicas de transfusão, tra-zendo por outro lado marcada con-tribuição para a patologia fetal eneofetal, ao ficar patenteado que agrande maioria dos easos de doençahemolítica do recém-nato a êle sedeviam. As investigações que des-de então se sucederam, vieram de-129monstrar que não se tratava porémde um único fator ou grupo, mâsde vários constituindo o sistemaRh. Sabemos hoje que o sistema Rhé bem complexo.Com efeito, além do sôro origi-nal (85%) que corresponde ao an-tígeno Rho foram encontrados maisdois sôros anti-Rh e denominadosde Rh' (70%) e Rh" (30%r.Os indivíduos cujos glóbulos ver-meÌhos contém o antígeno Rh sãodesignados Rh positivos; aquêlescujos glóbulos vermelhos cârecemdo antígeno são Rh negativos.Êste fator é importante por suacapacidade imunizante; está prova-do que os anticorpos do fator Rhcausam reação em indivíduos Rh ne-gativos que préviamente receberamtransfusões com sangue Rh positi-vo.Pior ê a situação quando estâestimulada a formação de anticor-pos em uma mãe Rh negativa du-rante a gravidez. Isto só ocorrequando o feto é Rh positivo comoresultado dos gens herdados de umpai Rh positivo.A criança pode sofrer eritro-blastose e morrer no útero.Tecnica para determinação dofator Rho ou anti-D, 85% com oantisôro Rho de, JOIINSON-JOEN-SON.:O sôro anti-Rho - é o único quese destina a determinação do fatorRh em gestant'es e receptores desangue, uma vez que se demons-trou que aproiimadamente 93% detodos os casos de eritroblastose fe-tal e das reações por transfusõesR. Fac. Odont. P. A. 2 (I/2): L25-L32, jan./dez. 1960130de sangue, mesmo de grupos san-guíneos compatíveis ABO, são de-vidas a uma incompatibilidade defator Rho.Técnica do teste em lâmina.1 - Colheita do sângue - San-gue oxalatado é o .que se prestirmelhor para o teste. O oxalato de-ve ser usado em pequena quanti-dade, apenas o suficiente para im-pedir a coagulação, em excesso, in-terfere com a aglutinação. Uma gô-ta da solução de oxalato de potás-sio é suficiente pârâ um mI., de san-gue venoso. Sangue coagulado tam-bém se presta parâ o teste, mas épreciso fazer uma suspensão de 40--50% no próprio sôro.Quando a colheita de sanguefôr impraticável, também se podeusar sangue da polpa do dedo (usa-do por nós nos testes) I deve-se en-tão pingá-lo diretamente sôbre alâmina sem quaÌquer agente anti-coagulante.Todavia, os resultados obtidoseom êste processo, não são tão bonscomo os que se conseguem com atécnica acima descrita. Sangue ci-tratado ou em suspensão de sôro fi-siológico é formalmente contra-in-dicado.2 - Aquecer a lâmina junto auma lâmpada elétrica a uma tem-peratura de aproximadamente 40oC.3 - Sôbre a lâmina já aquecidacolocar duas gôtas de sangue oxa-latado ou duas gôtas de sangue dapolpa do dedq e uma gôta de sôroanti-Rh para testes em lâmina. Como canto de uma lâmina limpa, oucom um bastão misturar ràpida-mente o sangue e o sôro (Homo-genizar) e espalhar uma superfí-cie equivalente a um têrço da lâ-mina.4 - Agitar â lâmina com ummovimento oscilatório, fazendo comque o sangue deslize de um ladopara outro. A lâmina deve estarsempre aquecida a 40eC, bastandomantê-la sempre próxima da lâm-pada.5 - Em cêrca de 30 segundos aaglutinação se inicia, tornando-sebastante evidente, com grandes gru-mos, em menos de 2 minutos.Aglutinação indica sangue Rhpositivo e a ausência de aglutina-ção no fim de 2 minutos traduzsempre Rh negativo.Existem várias possibilidades deêrro neste teste, que entretanto nãoabordaremos.TRABALIIO EXPERIMENTALDeterminamos o grupo sangú-neo e fator Rh de 124 alunos ma-triculados em uma das séries daFaculdade de Odontologia, usando atécnica da lâmina e empregandosôro Jonhson, e pudemos estabele-cer o seguinte:R. Fac. Odont. P. A. 2 (L/2): 125-132, jan./dez. 1960131PERCENTAGEM DE GRUPOS SANGUÍNEOS.Ënpo 0{3?Ê-,Grupo A5947,3Grupo B Grupo AB16613,5 4TOTAL124%PEBCENTAGEM DE FATOR Rh POSITIVO E FATOR Rh NEGATTVO.Rh + Rh_ TOTAL118 6 12495,2 4,8 %RELÂÇÃO ENTBE GRUPO SANGITÍNEO A FATOB Bh + EFÂTOR Rh-lu*uPool "*rro^ |i-i-lroiarl % | Torar l, . IGRUPO BïotalGRUPO ABTotalllrRh+ ì +o iç:,rl sg 98,4RELAçÃO ENTRE GRUPO SANGUÍNEO E SEXOGrupo O Grupo ATotal TotalMasc. 38 88,3 76,623,4t4I 1,7Fem.R. Fac. Odont. P. A. 2 (1/2): 125-L32, jan./dez. 1960132RELAçÃO ENTRE FATOR Rh+ E FATOR Rh- COM SEXOolfoot/oTotal83,481,4Masc.16,ô18,ô22Fem.BIBLIOGRAFIA:BIER, Otto Bacteriologia eImunologia 8a. EdiçãoEdições Melhoramentos - Págs.271-277.GRELLE, F. C. - Manual de Obs-tetrícia - Volume 2, - Athe-neu S. A. - Págs. 1493-1528.SMITH, D. T. e MARTIN, D. S. -Bacteriologia de Zinsser - Ed.UTEHA México Págs.201-202.JOHNSON-JOHNSON Bula queacompanha o sôro.R. Fac. Odont. P. A. 2 (L/2): 125-132, jan./dez. 1960

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