Timbal merupakan contoh logam berat yang dapat menyebabkan keracunan
pada saraf sehingga dapat menyebabkan gangguan integritas, struktural bahkan fungsi
syaraf sehingga terjadi penurunan kecerdasan, fungsi kognitif, penurunan minat serta
perubahan aktivitas dan gangguan motorik kasar. Kemenkes menyebutkan bahwa 5-10
% balita mengalami keterlambatan perkembangan sedangkan 1-3 % diperkiraka
mengalami gangguan perkembangan motorik, bahasa, sosio-emosional dan kognitif.
Masuknya timbal ke dalam tubuh akan meningkatkan jumlah radikal bebas sehingga
menyebabkan stres oksidatif. Keadaan stres oksidatif dapat menghambat kerja enzim
tirosin hidroksilase serta menyebabkan penurunan dopamin sehingga mengakibatkan
perubahan aktivitas lokomotor. Pegagan merupakan tumbuhan yang mengandung
triterpen yang berfungsi sebagai antioksidan dan quarcetin yang berfungsi sebagai
pengikat (chelator) logam berat. Tujuan penelitian ini adalah membuktikan ekstrak etanol
pegagan dapat mencegah penurunan ekspresi tirosin hidroksilase, kadar dopamin serta
aktivitas lokomotor pada larva zebrafish yang dipapar timbal mulai 2 hpf – 72 hpf.
Penelitian ini adalah true experimental menggunakan post test only control group
design. Paparan timbal 2.5 ppm dan ekstrak etanol pegagan dengan konsentrasi 1.25
μg/ml, 2.5 μg/ml, 5 μg/ml diberikan secara bersamaan pada larva zebrafish mulai usia 2
hpf sampai dengan 72 hpf (hour post fertilization). Ekspresi tirosin hidroksilase larva
zebrafish diukur saat usia 6 dpf dengan menggunakan Reverse Trancription Polymerase
Chain Reaction (RT-PCR). Hasil elektroforesis dikuantifikasikan menggunakan Bio-Rad
Gel Doc Imaging system, sedangkan kadar dopamin diukur menggunakan Enzyme-
Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Data dianalisis menggunakan uji One Way Anova.
Lokomotor zebrafish diukur dengan menggunakan hasil kuantifikasi pergerakan larva
melewati pola kemudian dibuat pattern dengan menggunakan Image J.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekspresi tirosin hidroksilase antar kelompok
tidak terdapat perbedaan signifikan (p > 0.05), namun terdapat kecenderungan kelompok
kontrol positif memiliki rata-rata terendah bila dibandingkan dengan kontrol negatif.
Pemberian ekstrak pegagan dengan konsentrasi berbeda membuktikan bahwa semakin
tinggi konsentrasi konsentrasi semakin meningkat ekspresi tirosin hidroksilase. Kadar
dopamin pada larva zebrafish mengalami peningkatan pada kelompok yang diberi
pegagan dengan konsentrasi berbeda bila dibandingkan dengan kontrol positif. Analisis
data menunjukkan terdapat perbedaan signifikan kadar dopamin dengan p < 0.05. Hasil
pengamatan yang dilakukan terhadap aktivitas lokomotor larva zebrafish usia 4 – 6 dpf
menunjukkan adanya perbedaan signifikan p < 0.05. Pada usia 5 dpf dan 6 dpf timbal
menurunkan aktivitas lokomotor secara signifikan dan pemberian ekstrak pegagan
meningkatkan aktivitas lokomotor seiring dengan peningkatan konsentrasi. Korelasi
Spearman antara ekspresi tirosin hidroksilase dengan kadar dopamin menunjukkan
adanya hubungan positif (searah) dan kuat (0.700) artinya semakin tinggi ekspresi tirosin
hidroksilase maka semakin tinggi kadar dopamin. Hubungan antara kadar dopamin
dengan aktivitas lokomotor menunjukkan hubungan positif (searah) dan sempurna
(1.000) yang berarti bahwa peningkatan kadar dopamin akan diikuti dangan peningkatan
aktivitas lokomotor.
Timbal mampu menurunkan ekspresi tirosin hidroksilase, kadar dopamin serta
aktivitas lokomotor pada larva zebrafish. Pemberian ekstrak etanol pegagan mampu
meningkatkan ekspresi tirosin hidroksilase, kadar dopamin serta aktivitas lokomotor.
Paparan timbal diketahui menyebabkan peningkatan Ca2+ intraseluler sehingga terjadi
disfungsi mitokondria. Kerusakan pada mitokondria akan mengakibatkan stress oksidatif
serta menghambat kerja dari tirosin hidroksilase bahkan terjadi apoptosis. Tirosin
hidroksilase merupakan enzim yang berfungsi untuk biosintesis dopamin. Penurunan
ekspresi tirosin hidroksilase akan mengakibatkan penurunan terhadap dopamin dan
lokomotor. Ekstrak etanol pegagan memiliki kandungan quercetin yang berfungsi sebagai
chelator logam berat serta sebagai scavenger radikal bebas. Asiaticoside pada pegagan
berfungsi untuk peningkatan enzim antioksidan endogen, sehingga memberikan efek
neuroproteksi pada dopaminergik dan mampu meningkatkan ekspresi tirosin hidroksilase.
Hasil penelitian ini didukung oleh penelitian sebelumnya bahwa timbal dengan
konsentrasi 50 mg/kg dapat menghambat dopaminergik dan lokomotor pada tikus
Kesimpulan dalam penelitian ini adalah ekstrak etanol pegagan dapat
meningkatkan aktivitas lokomotor melalui peningkatan kadar dopamine pada larva
zebrafish yang dipapar timba
