高速逆流双水相色谱法纯化卵白蛋白

Abstract

生物大分子的液．固色谱纯化过程中固相载体会产生产物吸附、变性等不良影响。高速逆流色谱无需固相载体．且具有高分便率和高回收率的优点，其中有机相／水相体系在分离天然产物中应用广泛，而应用双水相体系分离生物大分子尚处于研究阶段。双水相高速逆流色谱体系的建立与仪器设备及操作工艺条件密切相关，因此利用多分离柱高速逆流色谱仪，研究了PEG1000-无机盐双水相体系对标准蛋白质混合物以及卵白蛋白的分离。pH值和PEG浓度对不同种类蛋白质的分配系数影响不同，实验发现在pH9．2的15．0％(W／W)PEGl000．17．0％(W／W)磷酸钾盐体系中，细胞色素C、溶菌酶和肌红蛋白的分配系数差异较大，且分布合理，因而采用该体系在0．8mL/min流速，850r／min转速的条件下，成功分离了细胞色素c、溶菌酶和肌红蛋白的混合物。实验也发现在pH9．2的16．0％(W／W)PEG1000-17．0％(W／W)磷酸钾盐体系中，鸡蛋清样品中的主要蛋白质成分：卵转铁蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的分配系数差异最大，因而采用该体系在1．8mL/min流速、850r／min转速的条件下，200min内从鸡蛋清样品中成功分离卵白蛋白，其电泳纯度为100％，收率为95％