Identificación inicial de genes en Babesia bigemina mediante análisis de Etiquetas de Secuencia Expresadas en el estadio intraeritrocítico del parásito

Abstract

In this study, Expressed Sequence Tags (EST) were obtained and analyzed from 2208 randomly selected clones containing plasmids with cDNA inserts derived from a Babesia bigemina library. The obtained sequences were extracted and subject to Blast homology search in the Genbank databases. Sequence homology analysis resulted in the identification of 470 clones (grouped in 267 distinct clusters) which contained EST with no significant sequence identity with Babesia sp genes or other Apicomplexan parasites. Presumably, these EST would correspond either to new, unreported B. bigemina transcribed genes present in the erythrocyte stages of the parasite, or to non-translated sequences of the putative genes. 21 clones were identified which contained EST corresponding to 6 genes coding for B. bigemina antigens already reported in the literature; 1285 clones (grouped in 159 clusters of distinct sequences) had significant sequence identity with genes coding for hypothetical proteins previously identified in the Babesia bovis genome. Moreover, 32 clones had EST corresponding to 16 different Theileria sp. genes; 51 clones (26 distinct sequences) showed EST with sequence similarity to genes of Plasmodium sp., 25 EST had low identity with 13 different Toxoplasma gondii genes; and 4 clones with EST for 4 different Cryptosporidium sp genes. The results obtained, in addition to EST analysis of a larger number of B. bigemina cDNA clones, will allow the characterization and, eventually, the manipulation of gene coding regions, essential for the establishment of improved control strategies for cattle babesiosis caused by B. bigemina.En este estudio se realizó el análisis de Etiquetas de Secuencias Expresadas (EST) obtenidas a partir de 2208 clonas de Escherichia coli, con plásmidos recombinantes conteniendo insertos de cDNA de Babesia bigemina. Las secuencias se analizaron mediante búsqueda de homología en las bases de datos de genes. El análisis de homología en secuencia permitió identificar 470 clonas (agrupadas en 267 clusters) conteniendo EST con similitud de secuencia estadísticamente no significativa con algún gen de Babesia spp o de otro organismo Apicomplexa, sugiriendo la presencia de genes nuevos de B. bigemina; Se identificaron 21 clonas con EST correspondientes a 6 secuencias de genes previamente reportados para B. bigemina; además de 1285 clonas (conformando 159 clusters de genes distintos) de identidad significativa con proteínas hipotéticas o correspondientes a genes ya reportados en el genoma secuenciado de Babesia bovis; 32 clonas con EST homólogas a 16 genes distintos de Theileria spp; 51 clonas (26 genes distintos) con similitud en secuencia a genes de Plasmodium spp; 25 clonas con EST de moderada similitud con 13 genes distintos genes de Toxoplasma gondii; y 4 clonas con EST de mayor identidad con 4 genes diferentes de Cryptosporidium spp. Los resultados obtenidos permiten elaborar una base de datos sobre EST del estadio intraeritrocítico de Babesia bigemina, información básica esencial para la caracterización molecular del parásito, que permite llevar a cabo la identificación y regulación de nuevas regiones génicas codificadoras y, eventualmente el establecimiento de nuevas estrategias de control de la babesiosis bovina causada por B. bigemina