O objetivo deste trabalho foi avaliar o perfil de ácidos graxos (AG) do leite de vacas Holandesas x Gir submetidos a dois tipos de manejo de pastejo (períodos de descanso fixo e variável) de pastagem de Urochloa brizantha 'Marandu'. Utilizou-se o delineamento de blocos ao acaso, com duas repetições de área de pastagem (blocos) por tratamento e quatro vacas por bloco. A produção e a composição do leite não foram influenciadas pelas estratégias de pastejo. Não houve efeito dos tratamentos sobre as proporções (g 100 g-1 de AG totais) dos principais AG (palmítico, linoleico e α-linolênico) do pasto, mas suas ingestões (gramas por dia) foram influenciadas pelas diferenças de ingestão de matéria seca da forragem. As concentrações dos AG no plasma e na gordura do leite não foram influenciadas pelos tratamentos. As concentrações dos ácidos rumênico, vacênico, oleico e α-linolênico na gordura do leite variaram de 0,71 a 0,93, 1,40 a 1,50, 19,40 a 19,70 e 0,39 a 0,43 g 100 g-1 de AG totais, respectivamente. As estratégias de pastejo de U. brizantha 'Marandu' não alteram o perfil de ácidos graxos do leite das vacas.The objective of this work was to evaluate the milk fatty acid (FA) profile of Holstein x Gyr cows subjected to two different grazing managements (fixed and variable rest periods) of Urochloa brizantha 'Marandu' pastures. A randomized complete block design was used, with two replicates of pasture areas (blocks) per treatment and four cows per block. Milk production and composition were not affected by grazing strategies. No treatment effects were observed on the proportions (g 100 g-1 of total FA) of the main FAs (palmitic, linoleic, and α-linolenic) of the pasture, but their intakes (grams per day) were affected by differences in forage dry matter intake. The concentrations of FAs in milk plasma and fat were not affected by the treatments. Milk fat contents of rumenic, vaccenic, oleic, and α-linolenic acids varied from 0.71 to 0.93, 1.40 to 1.50, 19.40 to 19.70, and 0.39 to 0.43 g 100 g-1 total FAs, respectively. Grazing strategies of U. brizantha 'Marandu' cause no changes on the milk fatty acid profile of cows