Estudo dos fatores clínicos e imunológicos associados à disseminação de Leishmania sp para a mucosa nasal e avaliação da segurança de antígeno de montenegro em camundongos
Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2022.Introdução: Uma parte dos pacientes com Leishmaniose tegumentar americana
desenvolvem lesões mucosas com consequentes deformidades. A compreensão da
fisiopatogênese da forma mucosa é limitada pelo escasso conhecimento dos fatores
associados à disseminação do parasito e pelo grande intervalo de tempo que pode
existir entre o desenvolvimento das lesões cutânea e mucosa da doença.
Objetivo: Avaliar fatores clínicos e imunológicos fatores associados à disseminação
de Leishmania spp para a mucosa nasal através de avaliação clínica e laboratorial
sistematizada. Além disso procuramos validar novo antígeno de leishmania produzido
na UnB.
Métodos: Foi realizado estudo transversal onde foram incluídos consecutivamente
pacientes atendidos no ambulatório de Leishmaniose do Hospital Universitário de
Brasília. Os pacientes foram submetidos a fotografias sistematizadas das lesões e os
exames dermatológico/otorrinolaringológico foram registrados em fichas específicas.
Citocinas inflamatórias foram medidas no soro. O desfecho principal foi a presença de
DNA de leishmania em swab nasal realizada por PCR. Também foi testado antígeno
derivado da cepa MHOM/BR/PH8 o qual foi inoculado em camundongos B57BL/6 com
avaliação de segurança por parâmetros clínicos, laboratoriais e histopatológicos.
Resultados: Para avaliar a associação entre os níveis de citocinas IL-12, IL-6, TNFα, IL-10, IL-1β e IL-8 e a presença de leishmania em mucosa nasal foi construído um
modelo de regressão de Poisson considerando interações multivariadas de
características clínicas e laboratoriais. Dos 79 pacientes com Leishmaniose cutânea,
24 (30%) apresentavam DNA de L. (V.) braziliensis na mucosa nasal. No modelo
multivariado, a presença de DNA do parasito na mucosa foi associada à redução dos
níveis de IL-12 (RP = 0,440; p = 0,034), aumento dos níveis de IL-6 (RP = 1,001; p =
0,002) e maior número de afetados segmentos corporais (RP = 1,65; p <0,001). Em
um segundo modelo as áreas de infiltração, mácula e eritema foram maiores em
pacientes com a disseminação de leishmania para a mucosa nasal, mas a associação
não foi significativa. Após a aplicação do antígeno derivado da cepa MHOM/BR/PH8
foi verificada infecção por leishmania em um dos camundongos. Não foram verificados
outros sinais clínicos, laboratoriais e histopatológicos de toxicidade em nenhum dos
outros camundongos.
Conclusões: O modelo multivariado sugeriu que a indução de um perfil Th1 com a
produção de IL-12 é importante para prevenir a disseminação de L. (V.) braziliensis
para a mucosa. Observamos uma taxa de disseminação precoce de Leishmania spp
para a mucosa nasal maior do que a descrita anteriormente. O antígeno testado no
estudo produziu possível infecção em um dos camundongos, não sendo seguro para
testes em humanos.Introduction: A portion of patients with American Tegumentary Leishmaniasis develop
mucosal lesions with consequent deformities. The understanding of the
pathophysiogenesis of the mucosal form is limited by the limited knowledge of the
factors associated with the dissemination of the parasite and by the large time interval
that may exist between the development of the disease's cutaneous and mucosal
lesions.
Objective: To evaluate clinical and immunological factors related to the spread of
Leishmania spp to the nasal mucosa through systematic clinical and laboratory
evaluation. In addition, we seek to validate a new leishmania antigen produced at UnB.
Methods: A cross-sectional study was carried out in which patients treated at the
leishmaniasis outpatient clinic of Hospital Universitário de Brasília were consecutively
included. The patients were submitted to systematic photographs of the lesions and
dermatological/otorhinolaryngological exams were registered in specific forms.
Inflammatory cytokines were measured in serum. The main outcome was the presence
of leishmania DNA in a nasal swab performed by PCR. An antigen derived from the
MHOM/BR/PH8 strain was also tested and inoculated in B57BL/6 mice with safety
assessment by clinical, laboratory and histopathological parameters.
Results: To assess the association between the levels of cytokines IL-12, IL-6, TNFα, IL-10, IL-1β and IL-8 and the presence of leishmania in the nasal mucosa, a Poisson
regression model was built. considering multivariate interactions of clinical and
laboratory characteristics. Of the 79 patients with cutaneous leishmaniasis, 24 (30%)
had L. (V.) braziliensis DNA in the nasal mucosa. In the multivariate model, the
presence of parasite DNA in the mucosa was associated with reduced IL-12 levels (RP
= 0.440; p = 0.034), increased IL-6 levels (PR = 1.001; p = 0.002) and greater number
of affected body segments (PR = 1.65; p < 0.001). In a second model, the areas of
infiltration, macula and erythema were greater in patients with spread of leishmania to
the nasal mucosa, but the association was not significant. After application of the
antigen derived from the MHOM/BR/PH8 strain, infection by leishmania was verified in
one of the mice. There were no other clinical, laboratory and histopathological signs of
toxicity in any of the other mice.
Conclusions: The multivariate model suggested that the induction of a Th1 profile with
the production of IL-12 is important to prevent the spread of L. (V.) braziliensis to the
mucosa. We observed a higher rate of early spread of Leishmania spp to the nasal
mucosa than previously described. The antigen tested in the study produced a possible
infection in one of the mice, and was not safe for testing in humans
