金沢大学薬学部本研究では紫外線損傷を認識するモノクロ-ナル抗体の樹立を図り、それら抗体を用いてヒト細胞における紫外線損傷の修復動態を比較検討することを目的とした。これまでにチミン二量体認識抗体3種、(6ー4)光産物認識抗体5種、Dewar型光損傷認識抗体1種の計9種を樹立した。254nmの紫外線10J/m^2を照射されたヒト細胞での各種損傷の修復動態を抗体を用いて調べたところ、(6ー4)光産物は紫外線照射後12時間で除去されるが、チミン二量体は24時間を経過しても約半数が残存していた。損傷により除去動態が異なることの意義を明かにするため、紫外線照射されたplasmidとヒト細胞抽出液を用いた無細胞修復合成系を導入した。本系はWood等によって修復合成に関わる因子の解析に役立つことが立証されている。無細胞修復合成系で観察される修復合成が損傷の除去を伴うか否かを調べたところ、チミン二量体と(6ー4)光産物は細胞内と同様な動態でplasmidから除去されていた。アセトフェノン存在下で313nm紫外線を照漏してチミン二量体を誘起させたplasmidを基質として用い、チミン二量体1個の除去に伴って修復合成されるpatchーsizeを求めたところ、14〜24塩基と大腸菌のそれに極めて近い結果を得た。一方、Dewar型損傷認識抗体を用い損傷生成の波長依存性を求めたところ、260nm紫外線によってもDewar型損傷が生成されることを見いだした。しかも、長波長紫外線は(6ー4)光産物をDewar型損傷に光異性化するので、太陽光紫外線(300nm<)によって生成される損傷はチミン二量体とDewar型損傷であり、(6ー4)光産物はほとんど生成されないことが明かになった。以上の結果から、太陽光紫外線の人体影響について考える場合、254nm紫外線照射の結果を長波長紫外線のそれに外挿することは誤りであることが判明した。We established 9 monoclonal antibodies directed against ultraviolet (UV) light-induced DNA damage. Three of them recognize cyclobutane-type thymine dimers. Other 5 recognize (6-4) photoproducts, and one the Dewar isomer of (6-4) photoproducts.By using these antibodies for assessing the amount of DNA damage induced and repaired in human cells irradiated with various wavelength of UV, we showed that human cells irradiated with 10 J/m^2 of 254 nm UV completely excised the (6-4) photoproducts from cellular DNA by 12 hr, whereas 50 % of thymine dimers remained in DNA 24 hr after UV-irradiation.We incorporated in the present study ; an in vitro repair system using UV-irradiated plasmid and human cell-free extract. We found that the repair replication taken place in UV-plasmids was accompanied with the excision of both thymine dimers and (6-4) photoproducts. Furthermore, we investigated the repair of thymine dimers introduced in the plasmid by irradiating with 313 nm UV in the presence of acetophenone, and found that the repair-patch size of thymine dimer in the repair system settled from 14 to 24 bases per thymine dimer. This result resembles coincidentally to that of Eschericha coli.The action spectra for the induction of photodamage in DNA irradiated with various wavelength of UV were analysed by the monoclonal antibodies. It was revealed that (6-4) photoproducts were efficiently photoisomerized by longer wavelength of UV (around 320 nm) which is contained in solar light. The results indicate that thymine dimers and the Dewar photoproducts are the main DNA damage induced by solar UV.研究課題/領域番号:02454547, 研究期間(年度):1990 – 1991出典：研究課題「ヒト細胞における各種紫外線損傷の修復動態の比較解析」課題番号02454547（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-02454547/024545471991kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作
