Evaluación de una vacuna subcelular contra la brucelosis ovina constituida por la quimera BLSOmp31 formulada en un cristal líquido (Coagel) adicionado con secuencias CpG-ODN en el modelo murino

Abstract

Evaluación de una vacuna subcelular contra la brucelosis ovina constituida por la quimera BLSOmp31 formulada en un cristal líquido (Coagel) adicionado con secuencias CpG-ODN en el modelo murinoMaría Celeste Morán* (1), Alejandra Graciela Díaz* (1), María Fernanda Sánchez Vallecillo (2), Vanesa Zylberman (3), Fernando Goldbaum (3), Belkys Maletto (2), Santiago Palma (4), Silvia Marcela Estein (1)(1) Laboratorio de Inmunología, Depto. SAMP. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil (CIVETAN)-CONICET-CIC, F.C.V, U.N.C.P.B.A. Tandil, Argentina(2) Universidad Nacional de Córdoba, Facultad de Ciencias Químicas. CONICET, Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI), Córdoba, Argentina(3) INMUNOVA S.A., Buenos Aires, Argentina(4) Universidad Nacional de Córdoba, Facultad de Ciencias Químicas. CONICET, Unidad de Tecnología Farmacéutica (UNITEFA), Córdoba, Argentina*igual contribuciónBrucella ovis es el agente causal de la epididimitis contagiosa del carnero (ECC), enfermedad que ocasiona pérdidas económicas significativas en la producción ovina. La ECC se controla a través de la eliminación de los animales serológica o bacteriológicamente positivos. No hay vacuna específica para prevenir la ECC. La inmunización con una quimera constituida por la Brucella Lumazina Sintetasa y un péptido de la proteína de membrana Omp31 (BLSOmp31) formulado en adyuvante de Freund Incompleto (AFI) ha demostrado ser una vacuna subcelular inmunogénica y eficaz contra B. ovis en ratón y en ovino. BLSOmp31 formulada en un sistema nanoestructurado de cristal líquido vehiculizando secuencias CpG-ODN (Coagel+CpG-ODN) indujo la producción de anticuerpos en ovejas preñadas que fueron transferidos a sus crías. El objetivo de este trabajo fue evaluar la respuesta inmunitaria humoral y la protección conferida por BLSOmp31 formulada con Coagel+CpG-ODN. Veinticinco ratones Balb/c hembras de 8 semanas se distribuyeron en 5 grupos (G) (n=5/G): G1) BLSOmp31 en solución, G2) BLSOmp31+CpG-ODN, G3) BLSOmp31+CpG-ODN+Coagel, G4) BLSOmp31+AFI y G5) PBS. Se inmunizaron por la vía subcutánea el día 0 y el día 30 con BLSOmp31 (30g/dosis) de y CpG-ODN (30g/dosis. Los días 0, 21 y 50 se extrajo sangre para suero para análisis de IgG por ELISA y el día 65 se inoculó vía intraperitoneal con 2,9 x 105 unidades formadoras de colonia (UFC) de B. ovis PA76250. El día 95 fueron sacrificados y los bazos fueron procesados bacteriológicamente para recuento de UFC. La protección se evaluó como la reducción en unidades logarítmicas de las UFC con respecto al grupo control PBS. Los títulos de anticuerpos IgG en los animales inmunizados alcanzaron niveles significativos en todos los grupos tras la primera inmunización y máximos al momento del desafío con un perfil mixto IgG2a/IgG1 en los grupos inmunizados con CpG-ODN. BLSOmp31 en solución o formulada con CpG-ODN confirió protección significativa contra B. ovis (1,12 y 1,2 log de protección, respectivamente) (p<0,01). Sin embargo, los mayores niveles de protección se obtuvieron con BLSOmp31+CpG-ODN+Coagel que protegió de modo similar a BLSOmp31+AFI (2,13 y 2,21 log de protección, respectivamente) (p<0,001). Nuestros resultados preliminares indican que BLSOmp31 formulada con Coagel+CpG-ODN y administrada por la vía parenteral es una vacuna segura y eficaz contra B. ovis en el modelo murino.Fil: Moran, María Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Díaz, Alejandra Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Sánchez Vallecillo, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Zylberman, Vanesa. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Goldbaum, Fernando Alberto. Inmunova; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Maletto, Belkys Angélica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Palma, Santiago Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Unidad de Investigación y Desarrollo en Tecnología Farmacéutica. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Unidad de Investigación y Desarrollo en Tecnología Farmacéutica; ArgentinaFil: Estein, Silvia Marcela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaIV Congreso Argentino de Microbiología Agrícola y Ambiental y I Jornada de Microbiología GeneralMar del PlataArgentinaAsociación Argentina de Microbiologí