пчелы, гнилец, профилактика, бактериофаг

Смирнова, Н. И.

Undetermined

Repository of Vitebsk State Academy of Veterinary Medicine

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ БАКТЕРИОФАГИ В ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ ГНИЛЬЦОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИИ ПЧЕЛН. И. СМИРНОВАКак показывают исследования В. Д. Тимакова (1961) и Д. М. Гольдфарб (1961), изучение бактериофагии при­обрело в последние годы большое общебиологическое значение. Бактериофаг широко используют при изуче­нии вопросов наследственности и изменчивости, онтоге­неза и филогенеза вирусов, а также в качестве тест- объекта в радиобиологических исследованиях и при изыскании лекарственных средств, обладающих антиви­русным действием. Практическую ценность имеет разра­ботка фагопрофилактики и терапии инфекционных за­болеваний.Из общего числа бактериофагов, выделенных в тече­ние последних десятилетий, наименее изучены фаги энтомопатогенных бактерий — возбудителей европей­ского и американского гнильца пчел. К этим бактерио­фагам относятся альвейный, ларвейный и плютоновый.Задача настоящей работы состояла в том, чтобы изу­чить некоторые биологические свойства указанных бак­териофагов и их практическое применение в качестве профилактических и лечебных препаратов в сравнитель­ном аспекте.Проведенная работа показала, что альвейный, лар­вейный и плютоновый бактериофаги можно выделить из больных личинок. Плютоновый фаг выделяется, кроме того, из гомологичной лизогенной культуры микробов.При электронномикроскопическом изучении морфо­логии этих фагов установлено, что альвейный бактерио­фаг имеет форму сперматозоида (диаметр головки 70— 80 ммк длина отростка — 160—180 ммк (рис. 1). Части­ца ларвейного бактериофага шарообразной формы. Можно предполагать наличие очень короткого хвосто-Ученые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.вого отростка. Морфология плютонового бактериофага нами не изучалась.Наиболее активными из изучаемых бактериофагов оказались альвейный и ларвейный, имевшие титр 10 8, 10~10 после 10—12 пассажей с чувствительной микроб­ной культурой. Вторичный рост Вас. larvae в фаголиза- тах отмечен через 72 часа, Вас. alvei — через 20 суток.Рис. 1. Альвейный бактериофаг под электрон­ным микроскопом. X 30 000.В связи с этим оказалось возможным получить произ­водственный бактериофаг, представляющий собой про­зрачную жидкость соломенно-желтого цвета без осадка и опалесценции. Возможность быстрой адаптации этих бактериофагов позволила использовать при их изготов­лении местные штаммы возбудителей гнильца, выделен­ные из сотов с больным расплодом, полученных с пасек, где предполагалось профилактическое и лечебное при­менение бактериофага.При испытании активности производственного аль- вейного и ларвейного бактериофага по отношению к местным штаммам Вас. alvei и Вас. larvae методом «до­рожки» на плотных средах образовывались большие стерильные пятна (рис. 2, 3). Диапазон литического дей­ствия был достаточно широким: лизис бактериальных культур происходил в пределах 85—90%. Дальнейшее исследование показало, что производственный альвей­ный бактериофаг лизировал и гетерогенные культуры — Bad. pluton и Sir. apis. В связи с этим его нельзя отне-Ученые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.сти к числу бактериофагов, отличающихся строгой спе­цифичностью.Аналогичное явление наблюдали С. С. Казарновская (1933), Е. Т. Дружинина (1960) при изучении литиче-Рис. 2. Стерильное пятно (/) в агаровой культуре Вас. alvei (2) в бактериологической чашке.ского действия чумного фага, а также В. Роминг и А. Бродецки (Roming, Brodetsky, 1961), выделившие из почвы бактериофаг, лизирующий микробов девяти видов.В отличие от высокоактивных альвейного и ларвей- ного бактериофагов плютоновый фаг обладал низкой литической активностью: лизис бактериальной культу­ры происходил только на плотных средах с образова­нием крупных (экзогенный фаг) или мелких (лизоген­ный фаг) пятен (рис. 4).При рассмотрении вопроса об устойчивости бакте­риофагов энтомопатогенных бактерий принимали во внимание длительность сохранения их активности в раз-Ученые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.Рис. 3. Стерильное пятно ( / )  в агаровой культуре Вас. larvae (2), образовавшееся под влиянием бактериофага.Рис. 4. Лизис (/)  агаровой культуры B ad. pluton (2) под влиянием экзогенного плютонового фага.Ученые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.личных условиях. Наиболее высокой устойчивостью от­личался альвейный бактериофаг: при хранении во фла­конах с резиновой пробкой и ампулах при температуре 2—4° он сохраняет активность в течение 7 лет, выдержи­вает высушивание при температуре —40° под вакуумом,Рис. 5. Лизис колоний Bad. pluton под влиянием плютонового фага:1 — крупные колонии с зонами лизиса; 2 — мелкие прозрачные, «тающие* колонии. X 56.устойчив к нагреванию до 80° и консервированию хино- золом. Ларвейный бактериофаг при аналогичных усло­виях сохраняет литическую способность в течение 2 лет при постепенном снижении титра до 10_3, выдержи­вает высушивание при температуре —40°, неустойчив к нагреванию, консервированию хинозолом и фенолом. Плютоновый бактериофаг остается литически активным в течение двух месяцев.В целях усовершенствования методов лабораторной диагностики гнильцовых заболеваний было исследованоУченые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.влияние бактериофага на изменчивость Вас. alvei, Bad. pluton и Вас. larvae.При воздействии плютонового и ларвейного бакте­риофага на гомологическую бактериальную культуру наблюдалось образование колоний S- и R-формы, зер­нистых, бесцентровых и прозрачных, как бы тающих (рис. 5). Культура Вас. alvei, устойчивая к фагу, росла на агаре в виде слизистого наложения. Бактериофаг снижает биохимическую активность и вирулентность Вас. alvei. В ряде случаев отмечено выделение аспоро- генных вариантов этого микроба.В процессе электронномикроскопического исследова­ния было установлено, что клетки Вас. alvei под влия­нием фага увеличиваются в объеме, теряют электронно­микроскопическую плотность, протоплазма их разрых­ляется (рис. 6). В дальнейшем на месте микробных клеток можно видеть скопление глобулярных частиц (рис. 7).Рис. 6. Просветление и зернистость внутренней структуры Вас. alvei в результате воздействия бактериофага. X 20 000.Ученые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.Эффективность профилактического и лечебного дей­ствия бактериофагов (альвейный и ларвейный) изуча­ли на пасеках совхозов и колхозов Рязанской, Тульской, Харьковской областей, Краснодарского края, Башкир­ской АССР и др.Рис. 7. Лизис клеток Вас. alvei под влиянием бактериофага.X 20 000.С целью профилактики европейского гнильца бакте­риофаг давали пчелам вскоре после выставки (через 2—3 недели), до появления клинических признаков гнильца на пасеках, сильно пораженных этой болезнью в прошлом сезоне. Кроме того, бактериофаг применяли и в более поздний срок — в первой половине июня. В этом случае подкормку получали здоровые семьи, нахо­дившиеся на одной пасеке с больными.Профилактическое действие бактериофага сравнива­ли с действием биомицина — одного из распространен­ных в пчеловодной практике антибиотиков.Бактериофаг давали в дозе 100 мл, а биомицин по 200 000 е. д. (единиц действия) на 1 л сахарного сиропаУченые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.три раза, через три дня по 0,8—1 л подкормки на семью. Контрольные семьи получали чистый сахарный сироп.Производственное испытание профилактического дей­ствия бактериофага проведено на 540 пчелиных семьях. Полученные данные (табл. 1) показывают, что в ре­зультате фагопрофилактики заболеваемость пчелиных семей европейским гнильцом снизилась в 4—4,4 раза по сравнению с контролем и предшествующим сезоном. Бактериофаг (9,6% больных) является более эффектив­ным профилактическим препаратом, чем биомицин (14,3% заболевших семей).Таблица 1Эффективность профилактического действия альвейного бактериофагаПрепаратКоличествопчелиныхсемейЗаболеваемость пчелиных семей на пасе­ках до опытав 96Количество больных семей после подкорм­ки в % U961 г.)Альвейный бактериофаг . . 275 42,9 9,6Биомицин ................................. 209 35,0 14,3Контроль (сахарный сироп) 56 50,0 39,5В качестве лечебных препаратов применяли как аль- вейный, так и ларвейный бактериофаг. Лечение пче­линых семей, больных европейским и американским гнильцом, проводили в течение всего летнего сезона. Бактериофаги давали по 50 (ларвейный) — 100 мл аль- вейный) на 1 л сахарного сиропа три раза через 5 дней по 0,8—1 л на семью. Учет результатов проводили через 7—10 дней после окончания курса лечения.Лечебную эффективность бактериофагов сравнивали с действием лекарственных препаратов, рекомендован­ных инструкцией по борьбе с болезнями пчел, т. е. с пе­нициллином, норсульфазолнатрием, а также с биомици­ном. Всего лечили 245 пчелиных семей. Результаты пред­ставлены в табл. 2.Как видно из этой таблицы, эффективность лечебного действия бактериофага (73,0—79,5%) приближается к лечебной эффективности биомицина, пенициллина и нор- сульфазолнатрия. Следовательно, бактериофаг можно использовать для лечения гнильцовых заболеваний пчел .наряду с антибиотиками и норсульфазолнатрием.Ученые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.Таблица 2Лечебное действие бактериофага при европейском и американском гнильцеПрепаратКоличество больных пче­линых семейВид гнильца Выздоровело семей в «Альвейный бактериофаг 72 Европейский 73,0Ларвейный бактериофаг 52 Американский 79,5Биомицин 106 Европейский 78,2Пенициллин 80 » 83,4Норсульфазолнатрнй 25 Американский 84,0В ы в о д ы1. Альвейный, ларвейный и плютоновый бактериофа­ги, выделенные из личинок, больных европейским и аме­риканским гнильцом, обладают различной литической активностью (10-10, 10-8, 10-1), диапазоном действия и устойчивостью в период хранения. Альвейный бактерио­фаг лизирует гетерогенные микробные культуры Bad. pluton и Sir. apis.2. Бактериофаги способствуют значительной изменчи- востй культуральных (слизистые, бесцентровые, тающие колонии) и морфологических (увеличение размера, рас­пад клеток) свойств возбудителей европейского и аме­риканского гнильца, что необходимо учитывать при про­ведении лабораторной диагностики.3. Использование альвейного бактериофага в качест­ве профилактического препарата снижает заболевае­мость пчел европейским гнильцом в 4,4 раза. При этом профилактическая эффективность бактериофага в 1,4 раза выше, чем биомицина.4. Альвейный и ларвейный бактериофаги способ­ствуют выздоровлению 73—79,5% пчелиных семей, боль­ных европейским и американским гнильцом.5. Альвейный и ларвейный бактериофаги можно ре­комендовать производству в качестве профилактических и лечебных препаратов при гнильцовых заболеваниях пчел.Ученые записки ВВИ. - 1968. - Т. 20.

Специфические бактериофаги в профилактике и лечении гнильцовых заболеваний пчел

https://repo.vsavm.by/bitstream/123456789/13016/1/z-1968-20-52-60.pdf

Специфические бактериофаги в профилактике и лечении гнильцовых заболеваний пчел

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repository of Vitebsk State Academy of Veterinary Medicine