Universidade Estadual do Oeste do Parana - UNIOESTE
Abstract
Aromatase cytochrome P450 is an enzyme that is responsible for a key step in the biosynthesis of estrogens, which is linked to reproduction. This enzyme is a product of the gene Cyp19 and catalyzes the formation of estrogen from androgen. Estrogen is essential for the development of the gonads and various other physiological processes, ranging from normal growth to reproductive behavior. This study aimed at validation of primers for microsatellite locus in the regulatory region of gene Cyp19b in Oreochromis niloticus. Thirty samples of three strains were analyzed: Chitralada and Supreme from larviculture Aquabel, and GIFT from the State University of Maringá (Paraná, Brazil). After extraction of DNA, the samples were subjected to PCR using primers designed to flank a microsatellite region. After confirmation of amplification, the samples were subjected to electrophoretic separation in the apparatus Origins (Elchrom Scientific, USA) to identify the alleles. A polymorphism in the regulatory region of Cyp19b was identified in the three strains. Three alleles, ranging from 123 to 141 bp, were observed. The primers for amplification of microsatellite in the regulatory region of gene Cyp19b were efficient and, therefore, they may be used for identification of mutations in this region in typical microsatellite analysis. Studies are being conducted to correlate the effect of temperature with the alleles observed in the animals sampled and the resulting sex ratio.A aromatase citocromo P450 é uma enzima que é responsável por um passo chave na biossíntese de estrogênio que está ligado à reprodução. Esta enzima é um produto do gene Cyp19 e catalisa a formação de estrogênio a partir de androgênio. O estrogênio é essencial para o desenvolvimento das gônadas e diversos processos fisiológicos, que vão desde o crescimento normal até o comportamento reprodutivo. Este estudo teve como objetivo a validação de primers para locus microssatélite presente na região regulatória do gene Cyp19b de Oreochromis niloticus. Trinta amostras de três linhagens: Chitralada e Supreme da larvicultura Aquabel e GIFT da Universidade Estadual de Maringá – PR foram analisadas. Após a extração de DNA as amostras foram submetidas a PCR utilizando os primers desenhados para flanquear a região microssatélite. Após a confirmação da amplificação as amostras foram submetidas à separação eletroforética no aparato Origins (Elchrom Scientific, USA) para identificação dos alelos. Foi verificada a existência um polimorfismo na região promotora de Cyp19b nas três linhagens. Observamos três alelos, variando entre 123 e 141 pb. Os primers para a amplificação de microssatélite na região regulatória do gene Cyp19b foram eficientes e, portanto, seu uso para identificação de mutações nesta região pode ser empregada na análise típica de microssatélite. Estudos estão sendo conduzidos para correlacionar o efeito da temperatura com os alelos observados nos animais amostrados e a proporção de sexo resultante. 
