Endocardite infecciosa por coxiella burnetti em válvulas cardíacas humanas congeladas em um hospital de referência em Brasília após sua detecção: continuação de uma linha de pesquisa

Abstract

Coxiella burnetii é uma bactéria de morfologia cocobacilo, gram negativa, estritamente intracelular, do gênero Rickettsia causadora de zoonoses em mamíferos. Está envolvida na patogênese da febre Q e, na maioria das vezes, desencadeia um quadro agudo que tende a ser subclínico (60% dos casos) ou autolimitado. Sabe-se que a febre Q está associada a 5% das ocorrências desta afecção cardíaca, como também está entre as principais causadoras de endocardite com cultura bacteriana negativa. O diagnóstico da endocardite passa por cultura de sangue, excisão de tecido da válvula cardíaca ou dos êmbolos, PCR e sorologia. Para se confirmar o diagnóstico é necessário que haja a detecção microbiana por cultura ou PCR com um perfil sorológico correspondente e, ainda, ausência de indícios de infecção. O objetivo desse trabalho foi verificar a prevalência de endocardites por Coxiella burnetii dentre endocardites com culturas negativas em válvulas cardíacas humanas congeladas em um hospital de referência em Brasília. Inicialmente, foram selecionadas novas 25 amostras de valvas cardíacas humanas, além das 20 anteriormente processadas, que se encontram congeladas a 20º C negativos, acondicionadas em frascos individuais estéreis, no Instituto de Cardiologia do Distrito Federal-ICDF, nas quais se utilizou metodologia com princípios moleculares de detecção desenvolvida no PIC 2018/2019. O material genético é extraído a partir de aproximadamente 200 mg de tecido originário de valvas cardíacas que são colocadas em tubos plásticos de 1,5 mL e macerados mecanicamente com pistilo de vidro durante 2 minutos. O tampão de extração utilizado é 10 mM Tris-HCl pH 8,0, 1 mM EDTA pH 8,0 e 0,3% Triton X-100 sendo posteriormente usados fenol/ clorofórmio/álcool isoamílico (25:24:1) no processo de extração do DNA. Em seguida, realiza-se nested-PCR com consequente amplificação do material genético. A extração de DNA produz, em média, 40 ng/ul de DNA total. Esses DNA`s são então diluídos e usados nas reações de nested-PCR. A primeira reação de PCR gera fragmentos de tamanho esperado de 485 pb. Submetendo-se as amostras ao segundo ciclo de PCR deve-se obter fragmentos de tamanho esperado de 260 pb. Das 20 amostras de DNA testadas (incluídas as mesmas do PIC 2018-2019), 7 amostras de válvulas cardíacas foram identificadas como positivas para a presença de DNA da bactéria Coxiella burnetti. As demais amostras não resultaram em amplificação, sendo consideradas como negativas quanto à presença do DNA dessa bactéria. Em conclusão, a suspeita dos pesquisadores se confirmou pelos resultados obtidos gerando esperança com a expectativa de resultados futuros nas demais amostras congeladas disponíveis. No segundo semestre de 2019, as 20 amostras incialmente preparadas, contando as do PIC 2018-2019, foram analisadas, os materiais solicitados e novas bibliografias buscadas. Em 2020, não foi possível o preparo de novas valvas, que estão congeladas, e nem a realização das pesquisas, já que que os laboratórios do UniCEUB permanecem sem acesso e o funcionamento do laboratório da EMBRAPA está restrito e sobrecarregado com outras demandas, devido ao período paralisado pelo isolamento social. Infelizmente, não foi possível concluir a pesquisa da maneira esperada, mesmo havendo os materiais comprados e as valvas disponíveis