Régulation de l’expression de KCNN1 par EWS-FLI1: rôle dans le développement du sarcome d’Ewing

Abstract

Le sarcome d’Ewing est la seconde tumeur osseuse primitive maligne en termes de prévalence et touche principalement l’adolescent et le jeune adulte. En dépit des progrès thérapeutiques cette tumeur présente un taux de survie à 5 ans de 30% lorsque des métastases sont présentes au diagnostique. Une des caractéristiques principales de ces tumeurs réside dans la présence d’une translocation chromosomique, entre un gène de la famille EWS et un gène de la famille ETS, donnant dans 85% un gène de fusion codant pour la protéine EWS-FLI1. Dans ce contexte nous avons étudié l’expression d’un canal potassique activé par le calcium de faible conductance le canal SK1. Les canaux potassiques sont des protéines transmembranaires assurant le passage sélectif des ions K+ à travers la bicouche phospholipidique. Il s’agit d’un groupe de 70 membres assurant un grand nombre de fonctions biologiques, et dont certains d’entre eux ont été décrits comme étant impliqués dans le processus de tumorigenèse. Lors de ce travail nous nous sommes tout d'abord intéressés à étudier l’expression du canal SK1 au niveau transcriptionnel et protéique dans des lignées cellulaires d’ostéosarcome et de sarcome d’Ewing. Nous avons ensuite étudié la régulation de KCNN1 par EWS-FLI1. A l’aide d’expérience de gènes rapporteur, de délétions en 5’ du promoteur mais aussi d’immuno-précipitation de la chromatine, nous avons pu mettre en évidence le rôle majeur de la région -1176 à -1005 en amont du site d’initiation dans la régulation de KCNN1 par EWS-FLI1. De plus nous avons pu optimiser les conditions expérimentales optimales d’expérience de « gel retard » pour identifier précisément l’élément de réponse du promoteur de KCNN1 à EWS-FLI. Nous avons finalement mis en évidence dans nos premières expériences in vitro et in vivo que l’expression de KCNN1 semble impliquée dans le contrôle de la prolifération cellulaire