セルロース担体セルロファインに対するセルロース結合部位を付加した融合タンパク質の吸着

Abstract

A fusion protein gene of endo‒beta‒glucanase (EG) attached cellulose binding module (CBM) was constructed. The end‒beta‒glucanase gene was cloned from fungus Robillarda sp. strain NFRI1090 and the CBM gene was cloned from fungus Trichoderma viride. The fusion protein gene was transformed to Pichia pastoris gene expression system and the fusion proteins were produced as recombinant protein. The fusion protein, EG attached CBM, adsorbed on Cellulofine CG‒700 m column in low salt concentration buffer and easily eluted by high salt concentration buffer. The fusion protein method with CBM is useful for separation of a recombinant protein from crude protein mixture.糸状菌 Robillarda sp. NFRI1090 株由来エンド‒β‒グルカナーゼ (EGI) にTrichoderma viride 由来セロビオヒドロラーゼ I のセルロース結合モジュール (CBM) を付加した組み換え融合タンパク質遺伝子を作製し, Pichia pastoris の分泌発現系に導入することよって生産した. 得られた組み換え融合タンパク質のセルロース担体カラムに対する吸着, 脱着を行い, 融合タンパク質 (EGI‒linker‒CBM) が Cellulofine CG‒700 m カラムに対して低塩濃度にて吸着し, 高塩濃度条件にて容易に溶出回収することが可能であることを明らかにした. CBM を付加した組み換え融合タンパク質を Cellulofine によって吸着, 溶出することは, 組み換えタンパク質の分離精製において有用である

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