RHD genotyping relevance in RhD negative blood donors

Abstract

Cilj: RHD genotipizacijom odrediti vrstu i učestalost alela RHD koji uzrokuju serološki slabe D varijante u populaciji dobrovoljnih darivatelja krvi (DDK) u Hrvatskoj. Procijeniti osjetljivost seroloških metoda u otkrivanju slabog i/ili parcijalnog D antigena u skupini DDK kojima je D antigen dokazan indirektnom metodom, te razdiobu pojedinih varijantnih D alela u toj skupini. ----- Metode: Ukupno je obrađeno 6533 RhD negativnih DDK. Nakon izolacije genomske DNA u mješavini od 20 uzoraka, učinjen je RHD probir lančanom reakcijom polimeraze u stvarnom vremenu. Uslijedila je genotipizacija pomoću PCR-SSP metode korištenjem komercijalnih kitova (Inno-Train, Njemačka), te DNA sekvenciranje 6 uzoraka. U studiju je bilo uključeno i 263 DDK kojima je dokazan D antigen samo indirektnom metodom kojima je učinjena RHD genotipizacija i definiranje RHD polimorfizma. ----- Rezultati: Od 6533 RhD negativnih DDK, 23 nositelja gena RHD su potvrđena (0,35%), svi C/E pozitivni. Dvanaest uzoraka je reklasificirano kao RhD pozitivni. Izračunata frekvencija klinički značajnih D alela je bila 1: 543 (0,18%) u populaciji RhD negativnih DDK, ili 1:53(1,89%) kod C/E pozitivnih DDK. U populaciji DDK sa slabijom ekspresijom D antigena utvrđeno je 84,4% nositelja slabih D tipova 1, 2, 3, a najveća je učestalost slabog D tipa 1. ----- Zaključak: Istraživanje je otkrilo značajan broj D varijantnih alela u populaciji RhD negativnih DDK. Darivatelji krvi koji su ranije bili tipirani kao RhD negativni su reklasificirani kao RhD pozitivni i time je povećana sigurnost transfuzijskog liječenja.Aims: Determine the presence of RHD genes as well as the distribution of RHD alleles among RhD negative blood donors. Examine serologic accuracy in the detection of a weak and / or partial D antigen in donors with weak D antigen expression. ----- Methods: A total of 6,533 samples obtained from D-negative Croatian donors were screened for the presence of RHD by RT- PCR method. PCR-SSP was performed for D variants genotyping by using commercial genotyping kits (Inno-Train, Kronberg, Germany). The study also included 263 voluntary blood donors with weaker expression of D antigen confirmed by indirect method, who underwent RHD genotyping. ----- Results: 23 (0.35%) carriers of RHD alleles were identified. Twelve of them were redefined as RhD positive. The calculated frequency of clinically significant D alleles in RhD negative blood donors was 1:543(0.18%), or 1:53(1.89%) in C/E blood donors. Weak D type 1 was the most prevalent in the population of donors with weak D test positive. ----- Conclusion: The study revealed a significant number of D variant alleles in a population of RhD negative blood donors. Those once typed as RhD negative were reclassified as RhD positive, increasing the safety of transfusion therapy