金沢大学医学部附属病院ヒト重層扁平上皮細胞に感染したヒトパピローマウイルス(HPV)の遺伝子発現を制御する細胞因子を同定するために、まずHPV type31 を用いてtransient expression assayによるHPV promter-enhancerの同定を試みた。その結果HPV long control regionの中央部約260bPのenhancer領域を同定した。続いてこのenhancerに結合する核内蛋白をDNA-protein binding assay(Footprint analysis,Gel shift assay)により解析したところ、癌遺伝子産物APl、未同定の蛋白F1,F2,F5および転写因子Oct-1が結合することが判明した。mutation assayにより、この中でHPVpromoterの転写にcriticalな因子を検討したところ、AP1が最も重要な転写調節因子であることが判明した。続いてraft cutureによりHPV31 genomeをepisome状態で含有する細胞を重層培養し、AP1の局在を免疫組織染色で確認したところ、重層扁平上皮の基底および傍基底細胞層に発現を認めた。in situ hybridization法でHPVの癌遺伝子産物であるE6,E7のmRNAの発現を確認したところ、APlの局在とほぼ一致した基底層、傍基底層に発現を認めた。以上のことからHPVの遺伝子発現には細胞性因子AP1の発現が重要なdeterminantであることが明らかになった。AP1の発現はHPVの細胞種特異性を決定する因子のひとつであると考えられる。さらに我々はlong control regionのより上流に新たなenhancerを同定し、この領域に結合しAP1との共同作用でHPV遺伝し発現を活性化する因子YY1を特定した。以上よりAP1とYY1二つの核内蛋白をtargetにした子宮頚癌の遺伝子治療の可能性が示唆された。To clarify the molecular mechanisms through which human papillomavirus E6/E7 expression is activated during the process of cellular differentiation in stratified epithelial cells of uterine cervix, we identified core enhancer of upstream regulatory region of HPV3 1 b E6/E7 genes using transient expression assays. DNA foot print analyses and gel shift analyses identified sevral nuclear factors which bind core enhancer and regulate transcription of E6/E7 genes. In particular, Ap1 was found to be the most potent transactivator. In situ hybridization analyses revealed that E6/E7 mRNA was expressed mainly in the undifferentiated basal layers of stratified epithelial cells in uterine cervix, which was co-localized with AP1 expression determined by immunohistochemical analyses. These findings suggest that AP1 is the critical determinant of HPV oncogene expression. In addition, we found that cellular factor YY1 cooperates with API to achieve full activation of HPV oncogene expression. These results may provide insight into molecular targets for gene therapies against cervical cancer induced by HPV infection.研究課題/領域番号:08671876, 研究期間(年度):1996 – 1998出典：研究課題「子宮頚癌の細胞分化にともなうヒトパピローマウイルス癌遺伝子発現機構の解明」課題番号08671876（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-08671876/086718761998kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作
