取得学位 : 博士（医学）, 学位授与番号 : 医博甲第1709号, 学位授与年月日：平成17年9月30日, 学位授与大学 : 金沢大

Kawaguchi Kazunori

川口, 和紀

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甲第１７０９号平成１７年９月３０日川口和紀DifferentialgenealterationamonghepatomacelllinesdemonstratedbycDNAmicroarray-basedcomparativegenomichybridization(肝癌培養細胞株におけるcDNAマイクロアレイ法を用いたゲノム異常解析）学位授与番号学位授与年月曰氏名学位論文題目沼尾武中中澤二二雄安眞紀論文審査委員主査副査教授教授内容の要旨及び審査の結果の要旨癌化のメカニズムとして遺伝子発現異常に加えて，ゲノム構造異常も極めて重要な要因と考えられる．またヒト肝細胞癌においてアルファ・フェトプロテイン(AFP)は臨床的に重要な腫瘍マーカーの一つであり，ＤＮＡマイクロアレイ法を用いてＡＦＰ産生肝癌細胞株と非産生株では遺伝子発現レベルにおいて異なるクラスターを形成することが既に報告されているゴ今回、ｃＤＮＡマイクロアレイを用いてゲノム構造の異常検出系を確立し，遺伝子発現の変化も同定し、肝癌培養細胞株におけるＡＦＰ産生と非産生の関連性を検討した．まず陽性コントロール細胞株３種類を用いてｃＤＮＡマイクロアレイの信頼性を確証した．続いて５種類のＡＦＰ産生肝癌細胞株，２種類のＡＦＰ非産生肝癌細胞株を用いてゲノム増幅，欠失の認められる遺伝子群を特定した．ＨＢＶゲノムの組み込まれている細胞株ではこのスポットでの増幅が認められ，HepG2ではアポトーシス関連遺伝子の増幅が目立ち，PLC/PRF/5ではサイトカイン関連遺伝子の異常が多く認められた．ゲノム異常と実際の発現異常の関連`性を検討すると，ゲノム異常を示す遺伝子のおよそ４０％で発現異常が認められた．これらの結果はサザンブロッテイング法でも確認された．続いて各肝癌細胞株間におけるゲノム異常と発現異常との関係をクラスター解析で評価した．ゲノムの解析では1,080個全てのｃＤＮＡを利用した場合にＡＦＰ産生株と非産生株の間でクラスター分けすることは出来ないが，解析ソフトウェアを用いて４０個のＡＦＰ産生株優位の遺伝子と１７個の非産生株優位の遺伝子を特定することができた．これらの５７個の遺伝子の中で遺伝子発現のマイクロアレイの結果を用いると－部の細胞株を除きＡＦＰ産生株と非産生株とにクラスター分けすることが可能であった．これらの所見は、肝癌細胞株においてＡＦＰ産生の有無は包括的な遺伝子発現変化の差異を反映し，その前段階としてゲノム構造異常も関連しているものと考えられた．以上、本研究は肝癌細胞株を用い、新しいゲノム構造異常の同定と遺伝子発現異常との関連性を検討することを可能にした労作であり、学位に値すると評価された．－２－

肝癌培養細胞株におけるcDNAマイクロアレイ法を用いたゲノム異常解析

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肝癌培養細胞株におけるcDNAマイクロアレイ法を用いたゲノム異常解析

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