Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性反应对神经元细胞Mecp2蛋白表达的影响

Abstract

目的:体外研究Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎症反应对海马神经元细胞甲基化Cp G结合蛋白（Mecp2）表达的影响。方法:（1）用不同浓度的Aβ1-42（终浓度分别为0,5,10,20,30μmol/L）处理小胶质细胞系（N9）,24h后取上清液,ELISA检测每组N9细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,选择合适的Aβ1-42的终浓度。（2）用Aβ1-42（终浓度为20μmol/L）及TLR4拮抗剂TAK-242（终浓度为1μg/ml）处理小胶质细胞系（N9）,分为3组:正常对照组（con组）、单纯Aβ1-42处理组(Aβ1-42组)、Aβ1-42处理后TAK-242干预组（TAK-242组）。24 h后取上清液,ELISA检测每组N9细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量。（3）实验分组同（2）,24 h后收集培养液,分别干预生长良好的海马神经元细胞系（HT-22）。24 h后,通过Western Blot、免疫荧光染色方法检测每组HT-22细胞中Mecp2蛋白的表达。结果:（1）ELISA结果显示:与con组相比,Aβ1-42处理后,N9细胞分泌的TNF-α、IL-1β的表达量随Aβ1-42浓度的增加而增加（P<0.05）。（2）ELISA结果显示:与con组相比,Aβ1-42组的TNF-α、IL-1β的表达水平明显提高（P<0.05）;TAK-242组的细胞分泌TNF-α、IL-1β水平较Aβ1-42组显著降低（P<0.05）。（3）Western Blot结果显示:与con组相比,Aβ1-42组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显增加（P<0.05）;与Aβ1-42组相比,TAK-242组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显减少（P<0.05）。（4）免疫荧光染色结果显示:与con组相比,Aβ1-42组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显增强;而与Aβ1-42组相比,TAK-242组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达减弱。结论:Aβ诱导的小胶质细胞发生炎性反应,导致神经元的损伤,可能是由于这种炎性反应使得神经元细胞中Mecp2蛋白的表达量增加,从而损伤神经元。国家自然科学基金(31570845);国家自然科学基金青年项目(81501207);;陕西省自然科学基础重大研究项目(2016ZDJC-16