克伦特罗和莱克多巴胺同属于β_2-肾上腺素受体激动剂(简称β_2-兴奋剂),能够改善动物养分的代谢途径,促进动物肌肉的合成,抑制脂肪合成的积累,因此常被不法分子添加于动物饲料或饮用水中,以提高胴体瘦肉率。由于其易在动物肝脏中积聚残留,并通过食物链进入人体。人类食用后,可能出

庄峙厦

蔡尽忠

赵丽

郝春莉

陈海玲

黄华斌

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知 识 与 经 验高效液相色谱一质谱法同时测定猪尿中克伦特罗和莱克多巴胺陈海玲 , 郝春莉 , 黄华斌 , 蔡尽忠工, 赵 丽 , 庄峙厦 ,2(1 . 厦门华厦职业学院 食品药品安全检测中心 , 厦门 361024; 2. 厦门大学 化学化工学院 , 厦门 361 005)中图分类号: 0 652.63 文献标志码: B 文章编号: 1001一4020(20 11)07一0859一02克伦特罗和莱克多巴胺同属于 俘2一肾上腺素受体激动剂(简称 俘2一兴奋剂) ,能够改善动物养分的代谢途径 ,促进动物肌肉的合成 ,抑制脂肪合成的积累 , 因此常被不法分子添加于动物饲料或饮用水中 ,以提高胭体瘦肉率 由于其易在动物肝脏中积聚残留,并通过食物链进人人体 人类食用后 ,可能出现心跳加快 震颤 心悸等症状 , 严重危害人类健康中国卫生部 农业部 国家药品监督管理局联合发布的第 176 号公告 禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录 中已将其列 但是在兽禽养殖过程中 ,添加克伦特罗或莱克多巴胺的现象仍然存在近年来 ,莱克多巴胺作为克伦特罗的替代品 ,非法使用现象更有蔓延之势目前克伦特罗和莱克多巴胺的测定主要有气相色谱一质谱法(G C一M S) f 3 液相色谱法州 免疫分析法困等 作为一种灵敏度高 方便适用的确证方法 , G C一M S 和液 相 色谱一串联 质谱 法 (LC一M S/M S)( 一7?在检测 俘2一兴奋剂上具有较广泛的应用 但是 , G C一M S 需要将分析 目标物进行衍生化处理 , 分析周期长 ,操作复杂 ;LC一M S/ M S 分析成本昂贵 ,难以普及 ;液相色谱法灵敏度低 ,定性困难 ;免疫分析法虽然灵敏度高 ,分析快速 ,但 假阳性 的几率高本工作建立了高效液相色谱一质谱法 (H PI , C一M S) 同时测定猪尿中克伦特罗和莱克多巴胺1 试验部分1. 1 仪器与试剂SH IM A D ZU IJC M S ZOIO E V 液相色谱串联电收稿日期 : 20 10一03一03* 联系人喷雾质谱联用仪 ,E Y E L A 减压旋转蒸发仪 ,IK A 台式涡轮振荡器 , A gilen t固相萃取装置 , M CX (阳离子)固相萃取柱(60 m g/3 m L )盐酸克伦特罗标准溶液:10 m g L一盐酸莱克多巴胺标准溶液:10 0 m g I洲一混合标准溶液:分别移取 10 0 m g L一盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺标准溶液 20 oL 于10 m L容量瓶中, 用甲醇定容 ,制成 0.2 m g L一标准溶液 再用甲醇配制成 1.0 ,5.0 , 10 . , 30 . ,50 , , 10 .0 拌g kg一的混合标准溶液流动相 A :称取乙酸钱 .20 9 溶于约 240 m L已过 .45 拼m 滤膜的超纯水中 , 用 乙酸调节溶液pH 为 4. 0 , 定容至 250 m L , 乙酸按溶液浓度为10 m m ol IJ一流动相 B :移取甲酸 .50 m L 于 50 m L 甲醇-乙睛(l + 1) 溶液中,搅拌均匀氨化甲醇溶液:移取 10 .0 m L 氨水于 250 m L容量瓶中 ,用甲醇定容 ,混合均匀甲醇 乙睛为色谱纯 , 其余试剂为分析纯 ,水为超纯水(18.2 M n cm )1.2 仪器工作条件液相色谱条件:玩te rs il O D S SP C I 型色谱柱(4.6 m m X 150 m m , 5 拜m ) , 流量 为 0. 80 m l才m in 一 ,进样量为 20 拜L ,柱温为 40 梯度洗脱程序 :o 一 Z m in , 流动相 A 由 90% 降至 70% ;2一6 m in , 流动相 A 由 70% 降至 55% ,保持 2.0 m in;8一g m in 时 , 流动相 A 由 55% 升至 90 % , 保持1. 5 m in质谱条件:电喷雾电离源电压为 1.5 kv , 射频电压为 15o V ,直流电压为 5.o V ,传输管道温度为250 , 加热 板 温度 为 20 C , 雾 化气 流 量 为8 5 9陈海玲等:高效液相色谱一质谱法同时测定猪尿中克伦特罗和莱克多巴胺补牛一\1.S L m in 一 , 克伦特罗和莱克多巴胺的定性离子分别为m /z 27 7 及 3021.3 试验方法移取尿液 10 .0 m L 于50 m L 带螺盖的离心管中,加人等体积 pH 5.2 的2 m ol L一乙酸按溶液,充分振摇混匀 将混合溶液全部转移到连接于固相萃取装置上的 M C X 固相萃取柱上 ,流速控制在每秒 1 滴 然后依次用水 5 m L 和甲醇一水(1 + 1) 溶液5 m L 淋洗柱子 淋洗液完全通过小柱后 , 抽真空3 m in 以 10 m L 氨化 甲醇溶液洗脱 , 洗脱 液用50 m L K D 瓶收集 将洗脱液在 40 C 水浴中旋转蒸干 ,残渣用甲醇定容至 1 m L ,用 0.22 拜m 滤膜过滤,在仪器工作条件下测定2 结果与讨论2.1 色谱图和质谱图在仪器工作条件下 ,分别取 5.0 拜g kg一克伦特罗和莱克多巴胺混合标准溶液 空白猪尿样品及添加 50 . 拼g kg一1克伦特罗和莱克多巴胺的空白猪尿样品进行分析 ,3 者的总离子流色谱图见图 1由图 1 可知:莱克多巴胺的保留时间为6.80 m in ,克伦特罗的保留时间为 8.10 m in5. 拜g kg一克伦特罗和莱克多巴胺标准溶液的质谱图见图 2一图 3州甲~ ~ J ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 曰 ~ ~0 2 4 6 8 飞0 12t/ m 一n(C) 空白猪尿加标克伦特罗和莱克多巴胺图 1 混合标准溶液(a) 空白猪尿(b) 和空白猪尿加人标准克伦特罗和莱克多巴胺(c)的总离子流色谱图F lg. 1 T IC ehrom atograrn s of m ixed standard solution (a).blank urln e sarn ple (b ) and u rlne sam ple added w ithstan dards of elenb uterol and raetopam ine (e),{;8226 川 298 3{l ,:: l}345,介9目日l武{一 {8图2 5.0 拜g3 00 3 50111 / zkg一克伦特罗标准溶液质谱图F ig. 2 M ass speetrurn of 5.0 拜g kg 一1 elen buterolsta n d ard so lu tio n38e3由际日汗比,?.6肠,卜l2611|川Ul54声一 ~ ~ ~ J ~ - ~ ~ ~ 占~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 占~ ~ ~ - ~ ~ ~ 占~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 曰 一0 2 4 6 8 10 12(a ) 混合标准溶液25 0 30 0 35 0m / z图 3 5. 拼g kg一莱克多巴胺标准溶液质谱图F zg . 3 M a ss sp e etru m o f 5 . 0 拜g k g l r ae ro p a m ln estan d a rd so lu tio n~ ~~ ~ ~~ ~~ ~ - ~ ~ ~ J ~0 2 4 6 8 10 12(b) 空白猪尿样品2.2 标准曲线和检出限按试验方法对克伦特罗和莱克多巴胺标准溶液系列进行测定 ,克伦特罗和莱克多巴胺质量浓度分别在 5. 一30.0 拌g kg一和 5. 一50. 拌g kg一范围内与其响应信号呈线性关系 , 线性回归方程分别为 夕~ 30 440. O3 x 一 84 222. 43 和 少=25 974.23 x + 101 690.9 , 相关系数分别为0.992 1和 0.9 9 3 以 3 倍信噪比计算方法的检出限 ,计算得到猪尿中克伦特罗和莱克多巴胺的检出限均为1.0 样g kg一1 (下转第 862 页)8 60样品表 l 精密度和回收率试验结果(n= 6)Ta b . 1 R esu lts o f tes ts fo r P溉 isio n an d rec o very测定值 RSD 加标量 测定总量 回收率二,八m g kg 一l) 厂% 二,,/( nlg kg一l) 了%,.日八土八, .匕户Jjn内h卜曰n乃六日n万八卜.日门曰率和雾化气压力的增大而降低 RF 功率过低 ,样品无法等离子化 , R F 功率过高 , 发射强度不稳定;雾化气压力的变化对测量精密度有影响 ,过低的压力将使雾化器雾化稳定性降低 试验选择 R F 功率2.2 kw ,等离子气流量 15.o L m in一, 泵速 ZO rm in一,雾化气压力200 kPa2.4 工作曲线和检出限按试验方法对砷标准溶液系列进行测定 ,砷发射强度与其质量浓度在 20 胖g L一范围内呈线性关系 ,线性回归方程为 y一2 054 . 尸+ 6.6 , 相关系数 0.999 2对 n 份硝酸(2 + 98) 空白溶液进行测定 , 以3倍标准偏差计算方法检出限为0.01 m g kg一2.5 样品分析选取果汁饮料 黄豆酱 月饼 3 种食品样品 ,按试验方法各平行处理 6份进行测定 ,计算相对标准偏差 ,结果见表 1取黄豆酱样品用氢化物发生一原子荧光光谱法进行测定 ,结果为 0.172 m g kg一 , 与本法测得结果 比较 接近 称 取果 汁饮料 黄 豆酱 月 饼各0.30 0 0 9 ,分别添加 2 个浓度水平砷标准溶液 , 每个水平平行测定 3 次 ,回收率结果见表 1果汁饮料黄豆酱0 . 0 2 20. 185(). ()8 ()0 . 3 5 20.5150.8249 99 6月饼 l ()() 3 . (). 3 3 3 (). 4 2 9(). 6 6 6 0 . 7 1 () 9 3. 0本工作采用微波消解法处理样品 , 用 IC P一A E S检测食品中总砷含量 ,线性范围宽 准确度高 灵敏度好 方法准确可行 ,并且可以多元素同时测定 ,缩短测定周期 ,提高工作效率参考文献:张晓丽, 王彬 , 李宏.原子荧光光谱法同时测定食品中砷和汞巨J口.世界元素医学 , 2006 , 13(4):4()一41.鲍华.氢化物原子荧光光度法同时测定食品中砷和汞[J .河南预防医学杂志 , 2008 , 19(1):22一23.王丽荣.低温消解一氢化物原子荧光法测定食品中的汞J .中国卫生检验杂志 , 2()06, 16(6 ):752一753.刁|f l1曰,.土Q乙jn厂.厅|匕幸加. 李 尝一: ,一杏 幸一亏) .一: 一4 夺 今 今 4 一 考一 卜 李一今 咭) 卜; 一:一 : 4 ~ 今 夸 ,.4宝二 : : 卜 牛一二一 :, : 一:, 今 一今一: 一 : 尝一 令 考 弓二 : 一 尝一卜 4 一卜(上接第860 页)2.3 方法的回收率及精密度在空 白猪 尿样 品 中分 别 添加 5. , 10 . 0 ,50 拼g kg一的克伦特罗和莱克多巴胺混合标准溶液 1.0 m L ,按试验方法进行处理 ,做加标回收试验 ,所得相对标准偏差(n 一6) 和回收率结果见表 1表 1 回收率及精密度试验结果(n = 6)Ia b . 1 R es u lts o f tes ts fo r re co ve ry and P rec isio n的快速 有效监测参考文献:巨1巨2样品标准加人量)n/ng回收量z)z/ n g平均回收率/ %R S I)/%巨3口克伦特罗 5.0 3.46 69.2 8.210 . 0 7 . 2 4 72 . 4 5 . 65 0 . ) 3 8 . 1 76 . 2 4 . 8莱克多巴胺 5.0 3.69 73 .8 7. 61 0 . 0 7 . 6 2 7 6 . 2 6 . 25 0 . 0 3 8 . 7 77 . 4 1. 2[4|刁n日气卜./广1厂JLes本工作提出了液相色谱一质谱法同时测定猪尿液中克伦特罗和莱克多巴胺残留量 ,被测样品中各组分得到较好的分离 ,线性范围广 ,重现性好 适用于动物尿液中克伦特罗和莱克多巴胺的同时测定试验的提取方法简单 ,分析速度快 ,适合生猪宰杀前8 62朱坚 , 李波 , 方晓明.气相色谱一质谱法测定肝 肾和肉中 n 种日:一受体激动剂残留量tJ .质谱学报 2005, 26(3 ) :129一13 7.应永飞, 皮雄娥.吴平谷 , 等.气相色谱一质谱法同时测定动物尿样中莱克多巴胺和克伦特罗 J .质谱学报 ,2 00 6 .27 (2 ) :7 牛一7 8.朱馨乐 ,刘琪 ,孙雷 ,等.气相色谱一质谱法测定猪尿中莱克多巴胺的研究巨J三.中国兽药杂志 , 2() 08 , 42 (6) :3 6一3 9.苏文周 , 蔡玉枝 , 罗晓燕.高效液相色谱法测定猪尿中盐酸克伦特罗 J .中国卫生检验杂志 , 2 ()l .11(4) :4 36一43 7.何佳璐.高效液相色谱法测定猪肉中的盐酸克伦特罗J .海峡预防医学杂志 , 2006 12(2):47一48.吴任许 ,钟敏菱.利用猪尿液进行盐酸克伦特罗的检测巨J .畜禽业. 2004 ,3:52一53.聂建荣.洪振涛 , 连模 , 等.H PI C一M S/ M S 快速检测动物尿液中莱克多巴胺和克伦特罗巨J .中国兽药杂志 ,200 8 , 42 (8 ) :17一2 0.

高效液相色谱-质谱法同时测定猪尿中克伦特罗和莱克多巴胺

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/106490/%e9%ab%98%e6%95%88%e6%b6%b2%e7%9b%b8%e8%89%b2%e8%b0%b1-%e8%b4%a8%e8%b0%b1%e6%b3%95%e5%90%8c%e6%97%b6%e6%b5%8b%e5%ae%9a%e7%8c%aa%e5%b0%bf%e4%b8%ad%e5%85%8b%e4%bc%a6%e7%89%b9%e7%bd%97%e5%92%8c%e8%8e%b1%e5%85%8b%e5%a4%9a%e5%b7%b4....pdf?sequence=1&isAllowed=y

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