一些学者已证明,脊索动物头索类文昌鱼的神经系统和哈氏窝存在两种类似脊椎动物生殖激素,即促性腺激素释放素(gnrH)和促性腺激素(gTH).这类激素参与调控文昌鱼性腺发育及其生殖活动.然而,更原始的尾索类海鞘神经复合体(脑神经节和神经腺)是否也存在这两种生殖激素及其与性腺发育的关系,迄今仍未见报道.本文用免疫细胞化学方法首次发现了皱瘤海鞘神经复合体和性腺存在上述两种激素,并与它们的性腺发育相关

方永强

林加涵

黄威权

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第4 2卷 第 6期科 学 通 报h C i ns e eS e ie ne e B ul l e ti n 19 9 7年 3月【研究简报】皱瘤海鞘神经复合体与性腺发育相关性研究方永强 ① 林加涵 ② 黄威权③(①国家海洋 局第三海洋研究 所.厦门 3 610 05 ;②厦门大学生物学系,厦门 3 6 10 05 ; ③第四军 医大学,西安 71 0 0 3 2)关键词 皱瘤海鞘 神经复合体 生殖激素一些学者 〔’ 一 3〕己证 明,脊索动物头索类文昌鱼的神经系统和哈氏窝存在两种类似脊椎动物生殖激素,即促性腺激素释放素 ( Gn R H )和促性腺激素 ( G T H ).这类激素参与调控文 昌鱼性腺发育及其生殖活动.然而,更原始的尾索类海鞘神经复 合体 (脑神经节和神经腺 )是 否也存在这两种生殖激素及其与性腺发育的关系,迄今仍未见报道.本文用免疫细胞化学方法首次发现了皱瘤海鞘神经复合体和性腺存在上述两种激素,并与它们的性腺发育相关.1 材料与方法1.1 材料皱瘤海鞘 ( st 岁 al Pl ci at。 , L es ue 盯 )取 自厦门东屿海区,在不同季节共采集动物 96 只,体长 2.0 一 7·0 c nr·1 2 方法( )l 在解剖显微镜下,分离每个动物神经复合体,并摘除两侧性腺,然后分别不同处理:1)将神经复合体和一侧性腺放入新配制的不含醋酸 Bo uin液中固定 8 一 12 h,系列酒精 脱水,用合成树脂石蜡包埋剂 (Pa ar p asl )t 包埋.神经复合体连续纵切,性腺连续横切,厚 6 拌m,用于免疫细胞化学反应.2) 另侧性腺在 Bo uin 一 H ol nae 液中固定,脱水和包埋后,连续横切,厚 6 拌m,H.E.染色,用于确定皱瘤海鞘性腺发育的时期.( 2) 皱瘤海鞘为雌、雄同体.文中所采 用性腺发育时期都是 以卵巢发育时期 为依据.根据皱瘤海鞘生殖周期的分期标准,挑选卵巢发育不同时期的神经复合体和性腺进行免疫细胞化学定位.( 3) 免疫细胞化学反应程序:海鞘神经复合体和性腺的切片脱蜡水化后,入含 0.3 % H Z O Z2 高振强,高志萍,张晓彬.逆转病毒介导的 G S T一二 反义 R N A 对人肺癌耐药性 的抑 制作用.中 国慢性病预 防与控制,19 9 6,3:10 6一 11 03 高振强.高志萍.少、肺癌分子生物学研究进展.国外 医学呼 吸分册.19 9 6,2:37 一 414 高振强,高志萍.肺癌细胞中 M 【〕R I 基 因的 P C R 定量分析.见:葛林 浩主编.基础医 学研究.北京:中国 少、 事出版社,19 9 5.58 1一 58 35 高振强,高志萍,张晓彬.野 生型 p 53 基 因对人肺癌的生长抑制作作.中国慢性病预防与控制,19 95,2:63 一 676 高振强,王凤荣,张振东.用 F C M 分析 胃癌高发 区饮水 对培养 人胚胃粘 膜的 作用.中国环境科学,1 991 ; 5:3 71 一 3 737 高振强,高志萍.多向耐药 基因 M D R I 研究进 展.中华病理学 杂志,19 96,3:190 一 19 38 Zam anG J R,F le n s M J.M R P一s a p la sm a m e m b anre d r u g一e f fl u x p u m p.P r oc Na t l A e a d 灰 i U S A,1 99 4,9 1:8 8 2 2一 8 8 2 69 N ot e r K,W e s remra n A M.E x pr e s io n o f t h e M R P g e n e i n h u m an eane e r s.C l1 n Ca n e e r R e s,19 9 5,l: 1 30 1一 1 3 0 7( 1 9 96一0 4 0 4 收稿,19 9 6一0 6一2 0 收修改稿 )科 学 通 报 第 2 4卷的甲醇 2 0 min,除去内源性过氧化物酶,然 后分别按免疫细 胞化学 PA P 法、A I3C 法进 行免疫细胞化学 反应.第一抗体分别为兔抗哺乳动物 Gn R H 抗体 ( 中国科学院动物研究所张崇理 教授惠赠,1 : 75 稀释 ),免抗蛙鱼 G T H 抗体 (东京大学 K.Ai d a 教授惠赠,1 : 2 0 稀释 ),均 在 4℃孵育 2 4 h.第二抗体分别为羊抗兔抗体 (丹麦 D ka。 公司产品,1 : 10 稀释 ),生物素标记羊抗兔抗体 (武汉博士德公司产品,l : 10 稀释 ),在室温下分别孵育 30 m ni 和 1 h.第三抗体分别为PA P 复合物 ( D ka o 公司产品,1 : 30 稀释 )、A B C 复 合物 (博士 德公司产品,1 : 10 稀释 ),在室 温下,分别孵育 l h 和 3 0 m in.另一部分海鞘性 腺切片脱蜡水化后,按免疫金银法进行免疫细胞 化学反应,第一抗体为兔抗 Gn R H 抗体 ( 1:10 0 稀释 ),在 4℃ 孵育 24 h.第二抗体为胶体金标记羊抗兔抗体 (博士德公司产品,1 : 1 0 稀释 ),在室温下孵育 2 h.对照 片特异性检查,分别用正常羊血清代替第一抗体,各组均为阴性 反应.Pz、 P 法和 A B C 法显示的特异性免疫反应阳性细胞为深棕色,背景为淡黄色.免疫金银法显示的特异性免疫反应阳性细胞为黑色,背景不着色.这 3 种方法显示的阳性细胞很易识别.2 结果2.1 神经复合体皱瘤海鞘神经复合体由脑神经节和神经腺所组成 (图 1 (a ) ),位于入水管和出水管之间的套膜壁 (Ma n t le w a l l )中.脑神经节 由大小和形状不 同的神经细胞胞体组成,在脑神经节 周边 呈多层排列,称皮质部.这些细胞轴突走向脑神经节中央,形成髓质部,主要为致密成束的神经纤维及一些小的神经细胞胞体组成.神经腺紧靠脑神经节,位于它的腹侧面,由许多腺小叶所组成.每个小叶都由卵圆形或不规则形上皮细胞组成.随性腺发育不同时期,这种细胞由胞质致密状变为空泡状,又恢复为致密状,呈现周期性变化.这种变化可视为神经腺上皮细胞与性腺发育相关的一种标志.( 1) 脑神经节 P A p 和 川3C 法均显示,海鞘的脑神经节分布有 Gn R H 免疫反应阳性神经细胞,而且在性腺发育的不同时期,神经节中 G n RH 阳性神经细胞的多 少也有别.在卵黄生成前期,脑神经节背侧部外层可见到小和 中等大 小的 Gn RH 免疫反应神经 细胞,反应物分布在椭圆形胞体及短的突起内 (图 1 ( b ) ).在卵黄生成期,脑神经节则找 不到 G n RH 阳性 神经细胞.在卵黄生成后期和成熟期,脑神经节背侧 部,左侧和右侧部 又可见较 多的 G Rn H 阳性细胞 (图 1 ( C ) ).另外,脑 神经节同样分布有小和 中等大小 G T H 免疫反应强神经细胞,阳性反应物分布在胞质内,胞核为阴性 反应 (图 1 ( d ) ).在皱瘤海鞘性腺发育 的不同时期,脑神经节中均可见到 G T H 阳性细胞,但数量没有明显的变化.( 2) 神经腺:在卵黄生成前期,神经腺的背 侧部和腹侧部均可见到 G T H 免疫反应阳性细胞.这些细胞多数为卵圆形,少数 为梭形,阳性物质分布在胞质内.随性腺成熟,G T H 阳性细胞逐渐增加.在卵黄生成后期和成熟期,神经腺中 G T H 免疫反应阳性细胞明显增多,分布也较广泛,在背侧部、腹侧部、左侧和右侧部均可 见 (图 1 (e ) ).在卵巢发育的各个时期,神经腺均未发现 G n R H 免疫反应阳性细胞.2.2 性腺免疫金银法显示,皱瘤海鞘精巢中精原细 咆和初级精母细胞呈 Gn R H 强免疫阳性 反应,第 42 卷 第 6期科 学h C i nes e Se i通 报e ne e B ul l e ti n1 97 9年 3 月【研究简报】马铃薯块茎 H CN 的释放与 CA S活性变化文江祁① 黄 芳① 梁厚果②·(①兰州大学植物生理研究室,兰州 73 0 00伍 ②四川大学 生物 系,成都 6 10 0 64.*联系少、)关键词 马铃薯块茎 H c N 卜氛丙氮酸合成酶破除休眠的马铃薯块茎在适宜温度下即可发芽.食用发芽的马铃薯块茎可发生食物 中毒现象,这 已是众人皆知的常识.已知在马铃薯块茎转绿部位含有较多的剧毒有机物 (龙葵素 )3 讨论关于海鞘神经复合体免疫细胞化学研究,迄今唯有 G eo gre S 和 Du bo si[4 ]报道了玻璃海鞘脑神经节存在 Gn R H 免疫活性细胞,但 他们并未指 出 Gn R H 与性腺发育之 间的关系.因此,本研究结果首次发现了皱瘤海鞘神经复合体存在鱼类 G T H 样和哺乳类 Gn R H 样免疫阳性细胞.随皱瘤海鞘性腺发育和成熟,这两种阳性细胞的数量和免疫反应强度增加,揭示神经复合体和性腺发育之间可能的相互关系.可 以认为,皱瘤海鞘神经复合体可能具有文昌鱼 脑泡和哈氏窝相类似功能,并为文献〔5〕提 出海鞘神经复合体与脊椎动物脑垂体同源的推测提供新的证据.其次,文献「6」曾报道在文昌鱼性腺尚未 发育时,给予 合成促性腺激素释放 素类似物【G n R H一A ]可启动文昌鱼性腺提早发育.类似情况 见于在皱瘤海鞘卵黄 生成前期,脑神经节中神经细胞对 Gn RH 抗体呈强免疫反应,精巢中早期生精细胞,卵巢 中卵原细胞和初级卵母细胞胞质均可见 Gn R H 免疫反应物,提示 Gn R H 可能参与启动皱瘤海鞘性腺发育.综上所述,这些结果揭示了神经复合体在皱瘤海鞘性腺发育中可能的生理作月.至于神经复合体如何调控皱瘤海鞘性腺发育,有待进一步研究.致谢 冯涛 同志参加本 项 买验研 究,在此表示谢意.本工 作 为国 家 目然科学基金 (批准号:3 9 3 7 0 10 0 )资助项 目.参 考 文 献张致一,朱益陶,陈大元.促黄体素 ( LH )在文昌鱼哈氏窝中免疫细胞化学定位.科学通报,19 8 2.27 (巧 ):9 46 一 9 47方永强.鱼类促性腺激素在文昌鱼哈氏窝免疫细胞 化学定位.科学通报,19 93,3 8( 9 ):8 40 一 8 42方永强,王 红,张崇理.文昌鱼促黄体素释放素 ( LH- R H ) 的周年变化及其 与性腺发育的相互 关系.中国科学,B 辑,19 9 0,( 5 ):50 3一 50 9G eo 电e s D,D u 阮15 M P.M ies e n ev 一d e n e e p a r les t代 h n iq u es d`im xn u n o 月u or e cs e n e e d u n a n t ig e n e d e t y p e L H一R H d a n s l e 呢s r e m n e vr e u x d e e lo n a i n t es t i n a l is ( T“ n i c i e r a 亥: d心佗 ).C R Ae a d Sc i P a ri s,Se rieD,19 8 0,2 9 0:29 一 3 1G) 记1, ) 」y 1.T h e p h y s一o lo g y o f a cstd inas.A d v Ma r B ol l,19 7 4,12: l 一 14 0F a n g Y o n g一q i a n g,Q i X ian g,L 、a飞 Pi n g,e t a l.P r e lim i n a r y s t u d y o f g o n a do t用 P i n er l e as 泛n g a n a lo gu e( G n R H一A ) in 一t i a t od 9 0n a d a l dev e lo p m e n t o f a m p h io x u s.A e t a OCe a n o lo g ie a S in ie a.19 9 0,9:5 7 9 一 5 8 5( 19 9 6一0 5一2 5 收稿,2 9 96一0 7一1 8 收修改稿 )

皱瘤海鞘神经复合体与性腺发育相关性研究

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/119424/%e7%9a%b1%e7%98%a4%e6%b5%b7%e9%9e%98%e7%a5%9e%e7%bb%8f%e5%a4%8d%e5%90%88%e4%bd%93%e4%b8%8e%e6%80%a7%e8%85%ba%e5%8f%91%e8%82%b2%e7%9b%b8%e5%85%b3%e6%80%a7%e7%a0%94%e7%a9%b6.pdf?sequence=1&isAllowed=y

皱瘤海鞘神经复合体与性腺发育相关性研究

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