联系人: 龙敏南, 男, 1965 年1 月生, 博士, 副教授
T el : 0592-2186392
E-mail : longmn@ jin gxian. xmu. edu. cn光合细菌 Chromatium vinosum可溶性氢酶经 4次柱层析 (Whatman DE- 52 ,TSK- DEAE,Ultragel Ac A- 44 ,Mono Q)分离提纯后被纯化 630倍 ,得率为 33.5% .可溶性氢酶催化放氢比活性为 7.5μmol· min-1· mg-1.SDS- PAGE结果显示 ,可溶性氢酶由 52 k D和 2 1 .5k D两个亚基组成 .大亚基 N端氨基酸序列为 :SRTITIEPVTRXEGHAR;小亚基 N端氨基酸序列为 :STQPKIT-VATXLDG.氧化态可溶性氢酶在 54K时产生了典型的 Ni( )电子顺磁共振 (EPR)信号 (gxyz=2 .37、2 .1 6、2 .0 1 6和 gxyz=2 .30、2 .2 3、2 .0 1 6) .研究结果表明 ,C.vinosum可溶性氢酶是一种新的催化放氢的 Ni Fe-氢酶 .教育部重点科技项目!资助 (No.990 70 

S.P.J.ALBRACHT( E C Slater Institute, University of Amsterdam,1018TV,Amsterdam,the Netherlands)

张凤章

苏文金

许良树

龙敏南

Xiamen University Institutional Repository

ISSN　1007-7626CN　11-3870/ Q中国生物化学与分子生物学报Chin. J. Bio chem. Mo l. Biol. 2000, V ol. 16, No. 6, 710～715第 16 卷第 6 期2000年　12月　* 　教育部重点科技项目资助( No. 99070)　　　联系人:龙敏南,男, 1965年 1月生,博士,副教授T el : 0592-2186392E-m ail : longmn@ jin gxian. xmu. edu. cn收稿日期: 2000-06-15,修回日期: 2000-08-30·研究快报·光合细菌 Chromatium vinosum可溶性氢酶的分离提纯及特性*龙敏南　苏文金　S. P. J. ALBRACHT* *　张凤章　许良树(厦门大学生命科学学院,细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,厦门 361005;* * E C S later Inst itute, U nivers ity of Am sterdam, 1018T V, Amsterdam , th e Netherlands )摘要　光合细菌 Chromat ium vinosum 可溶性氢酶经 4次柱层析( Whatman DE-52, T SK-DEAE,Ult rag el AcA-44, Mono Q)分离提纯后被纯化 630倍,得率为 33. 5%. 可溶性氢酶催化放氢比活性为 7. 5 Lmo l·min- 1·mg - 1. SDS-PAGE结果显示,可溶性氢酶由 52 kD和 21. 5 kD两个亚基组成. 大亚基 N 端氨基酸序列为: SRTIT IEPVTRXEGHAR;小亚基 N 端氨基酸序列为: STQPKIT-VATXLDG. 氧化态可溶性氢酶在 54K 时产生了典型的 Ni(Ⅲ)电子顺磁共振( EPR)信号( g xyz=2. 37、2. 16、2. 016和 gxyz= 2. 30、2. 23、2. 016) . 研究结果表明, C. vinosum 可溶性氢酶是一种新的催化放氢的 NiFe-氢酶.关键词　Chromatium vinosum,可溶性氢酶,纯化及特性中图分类号　Q55, Q71Purification and Properties of Soluble Hydrogenase fromPhotosynthetic Bacterium Chromatium vinosum*LONG M in-nan, SU Wen-jin, S. P. J. ALBRACHT* * , ZHANG Feng-Zhang, XU Liang-shu(S chool of L if e S ci ences, X iamen Univ ersity , X iamen 361005, China;* * E C S later I nst itute, Univ er si ty of A msterd am, 1018TV , A msterd am, the N ether land s)Abstract　The soluble hydrogenase( SH ) fr om Chromatium vinosum was purified 630 folds w ith ayield of 33. 5% and a specif ic act ivity of 7. 5 Lmo l·min- 1·mg - 1 by 4 steps of column chromato g-raphy ( Whatman DE-52, T SK-DEAE, U lt ragel AcA -44 and Mono Q) . T he enzyme consists o f tw oalien subunits( 52 kD, 21. 5 kD) . T he N-term inal sequence of the larg e subunit and small subunitw er e SRT IT IEPVT RXEGHAR and STQPKIT VAT XLDG respectively . T he oxidized soluble hy-drogenase exhibited a typical Ni(Ⅲ) EPR( elect ron paramagnet ic r esonance) signals( g x, y, z= 2. 37,2. 16, 2. 016 and gx, y, z= 2. 30, 2. 23, 2. 016) . T he results show ed that the SH from C. vinosum was anew NiFe-hydrogenase which catalyze H 2-pr oduct ion.Key words　Chromatium vinosum, Soluble hydr ogenase, Purificat ion and pr opert ies　　氢酶是一类催化放氢与吸氢的酶. 它广泛存在于光合细菌、固氮菌及蓝细菌等微生物中. 由于人类面临环境污染、能源短缺等一系列世界性难题, 氢被看作是一种无污染、可再生的理想能源,因而氢酶及其产氢的研究受到了全世界的普遍重视[ 1]. 光合细菌的培养条件简单, 催化放氢的速率及能量的转化效率高[ 2] ,具有很好的研究价值和应用前景. 光合细菌 Chromatium v inosum 含有一种可溶性氢酶( SH)和一种膜结合态氢酶( M BH)[ 3]. 其膜结合态氢酶是一种催化吸氢的氢酶,而可溶性氢酶则由于其在细胞中的含量特别低, 并且其特性不同于其它氢酶, 因而一直未得到有效纯化. 本研究报道了光合细菌C.v inosum 可溶性氢酶的分离提纯及某些理化特性.1　材料与方法1. 1　菌体培养光合细菌 C. vinosum DSM 185菌株(由荷兰阿姆斯特丹大学 E. C. Slater 研究所提供)培养在一700 L 的密闭容器中, 其培养基及培养条件如文献[ 3]所述. 以 Sharples M p4连续离心机离心收集菌体细胞,经快速冷冻后贮存于- 20℃备用.1. 2　可溶性氢酶的分离提纯取 50 g 菌体悬浮于 200 ml 冰冷 50 mmol / LTr is-HCl缓冲液( pH8. 0)中. 菌悬液在冰水浴中超声破碎处理( W-380, U niv ersity of Virg inia) 15 min后, 离心( 20 000×g , 30 m in)除去细胞壁和未破碎的细胞. 上清液经超速离心( 200 000×g, 90 min)除去细胞膜碎片等高分子复合物. 将离心所得的上清液直接上 DEAE-纤维素柱( Whatman DE-52) ,以 2倍体积的起始洗脱缓冲液将未与柱物质结合的蛋白质洗脱下来,然后进行连续梯度洗脱( 0～0. 4 mol/L NaCl) . 收集含可溶性氢酶的洗脱液,经透析后装入 TSK-DEA E 650( M ) ( M erck)柱,分别以含 0. 1mol / L , 0. 13 mol / L 和 0. 15 mo l/ L NaCl 的缓冲液( 10 mmol / L Tris-HC1, pH8. 0)洗脱.收集含可溶性氢酶活性的洗脱液, 经超滤浓缩至 0. 5 ml ,加入到Ultrag el AcA -44( LKB-IBF)柱进行洗脱(流速为 45ml/ h) . 收集含可溶性氢酶活性的洗脱液, 经透析后过快速蛋白液相色谱 Mono Q( Pharmacia)柱进行连续梯度( 0～0. 3 mo l/ L NaCl)洗脱.1. 3　氢酶活性的测定氢酶活性的测定在一 2 ml 厌氧池内进行, 以50 mmo l/ L 磷酸缓冲液( pH 6. 0)作反应缓冲液. 测定放氢活性时以被连二亚硫酸钠( Na2S2O 4 )还原的甲基紫精( M ethyl violo gen, 简称 MV)作电子供体,反应系统包括终浓度为 1. 5 mmo l/ L 的 MV 和 50mmol/ L 的连二亚硫酸钠及适量的酶样品;测定吸氢活性时,反应系统包括终浓度为 40 mmol/ L H2,2. 0 mmol/ L 苄基紫精( Benzyl violo gen,简称 BV) ,适量的酶和 50 Lmol/ L 连二亚硫酸钠.1. 4　蛋白质含量的测定取 50 Ll酶样品和2. 5 ml显色液(配制: 85%磷酸 100 ml, 100 mg 考马斯亮蓝 G-250,无水乙醇 50ml ,加水至 200 m l)加入到一次性比色杯中. 于室温下反应 5 min后,测定在 595 nm 处的吸收值. 以只加显色液的处理作为空白对照. 以牛血清白蛋白为标准蛋白.1. 5　聚丙烯酰胺凝胶电泳( PAGE)及染色聚丙烯酰胺凝胶电泳在一垂直装置中进行, 丙烯酰胺的浓度为 7. 5% . 对于 SDS-PAGE, 其 SDS的浓度为 0. 5%, 电泳的电流为 30 mA.考马斯亮蓝染色:电泳后,将凝胶块置于染色液( 0. 25%考马斯亮蓝 R-250, 10%乙酸, 40%甲醇)中染色 30 min, 然后在洗脱液( 10%乙酸, 40%甲醇)洗脱 1～2 h.氢酶活性染色: 电泳后, 将凝胶块置于反应液( 50 mmo l/ L 磷酸缓冲液, pH6. 0, 50 mmol/ L B-巯基乙醇和 1 mmol / L MV)中 30 m in, 然后将凝胶块转移到真空器中,反复抽充以除去残留的氧, 再充以100% H2, 在室温保持30～60 min,待甲基紫精被氢还原,蛋白带呈现蓝色后,在 Ar 气氛下加入 2. 5%的三苯基四氮唑盐酸盐,于室温保持约 20 min, 至蛋白带由蓝色变为稳定的红色.1. 6　可溶性氢酶电子顺磁共振( EPR)谱的测定取 5U 纯化的氧化态可溶性氢酶( 7. 5 U / mg )稀释至 250 Ll,注入到 EPR管, 然后将 EPR 管短暂离心( 100×g) ,使管壁的酶液落到管的底部,再套上带侧孔的橡皮管, 在橡皮管的另一端连接有机玻璃棒, 将 EPR 管缓慢放入液氮中冷冻. EPR 谱在Braker ECS106 EPR 波谱仪上测定. 分别在 45K 和10K 下记录酶的 EPR 谱. 测定条件: 9 248 MHz, 20dB.2　结　　果2. 1　可溶性氢酶的纯化菌体细胞经超声破碎后, 可溶性氢酶和部分膜结合态氢酶都能从细胞中释放出来.经超速离心后,大部分膜结合态氢酶存在于沉淀中, 而上清液中含可溶性氢酶和部分游离的膜结合态氢酶. 由于可溶性氢酶在细胞中的含量特别低,所以,尽管只有小部分膜结合态氢酶溶于可溶部分,其量仍然比可溶性氢酶大得多. 经 DE-52柱洗脱后, 出现两个氢酶活性峰( Fig . 1 B) . 电泳后活性染色的结果显示,第一个活性峰氢酶的电泳特征与纯化的膜结合态氢酶明显不同, 而第二个活性峰氢酶则与纯化的膜结合态氢酶表现出相同的迁移特征( F ig. 2) . 两个活性峰的氢酶催化放氢与吸氢的特性存在明显差异,第一个活性峰的氢酶主要表现为催化放氢, 而第二个活性峰的氢酶则主要表现催化吸氢.对比研究表明,第一个活性峰的氢酶属于可溶性氢酶.含可溶性氢酶的洗脱液依次经 T SK-DEAE 纤711第 6 期 龙敏南等: 光合细菌 Chromatium vinosum 可溶性氢酶的分离提纯及特性 　Fig. 1　T he elu tion profi le of h ydrogenases from DE-52 col-umnA: Protein absorban ce at 280 nm ; B: hydrogen product ionact ivity; C: NaC l gradientFig. 2　Nat ive-PAGE analysis of hydrogen as e act ivity peaksfr om DE-52 columnA, F: purif ied C. v inosum MBH. B, D: f irst act ivity peak . C,E: s econd act ivity peak. A, B, C: staining w ith Coomas siebrill iant blu e R-250. D, E ,F: act ivity s tainin g　　Table 1　Purification o f soluble hydro genase fr om Chromatium v inosumStepsT otal protein/m gT otal act ivity/ U *Specif ic act ivit ies/ U·mg- 1Purif icat ion( folds )Yield( % )Cru de en zyme 2070 24. 8 0. 012 1. 0 100DE-52 column 230 22. 0 0. 096 8. 0 88. 7T SK-DEAE colum n 20. 8 14. 8 0. 71 59. 2 59. 7AcA-44 column 4. 2 11. 4 2. 71 226. 5 46. 0FPLC Mono Q 1. 1 8. 3 7. 55 629. 8 33. 5* U= Lm ol H2 produ ced per m inute维素柱, Ult ragel AcA-44柱和Mono Q 柱层析纯化后, 可溶性氢酶被纯化 630 倍, 得率为 33. 5%( T able 1) . 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示, 经 4步柱的纯化后所获得的氢酶具有较高的纯度( Fig . 3) .2. 2　可溶性氢酶亚基组成及分子量测定纯化的可溶性氢酶经 SDS -PAGE 和考马斯亮蓝染色后,显示两条带,表明该酶含有两种亚基. 根据标准蛋白分子量的 R f 值计算出可溶性氢酶两个亚基的分子量分别为 52 kD和 21. 5 kD( Fig. 4) .2. 3　可溶性氢酶对热的稳定性将可溶性氢酶在不同的温度下 ( 0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)温育 1 h, 然后测定氢酶催化放氢的活性. 结果表明,可溶性氢酶在40℃以下比较稳定, 但当温度高于 40℃时, 氢酶容易失活. 酶在 50℃条件下保温 1 h,失去 30%的活性; 60℃保温 1 h,失去 70%的活性; 70℃下保温 1h,则酶全部失活( Fig . 5) .Fig. 3　Nat ive-PAGE analysis of hydrogen as e act ivity peakfr om FPLC-Mon o Q colum nA and D: C. v inosum M BH. B and C: sample of activity peak .A and B: stain ing w ith C oom as sie-brilli ant blue. C and D:activity staining712 中国生物化学与分子生物学报 16 卷Fig. 4　SDS-PAGE analys is of SH from C . vinosumA; protein marker; B: C . v inosum SH ( 52 kD, 21. 5 kD) ; C:C. v inosum M BH ( 62 kD, 32 kD)Fig. 5　Detection of temperature stabilit y of C. v inosum sol-uble hydrogenas eA: H2-product ion act ivity. B: H2-uptak e activity2. 4　pH对可溶性氢酶催化活性的影响pH 对可溶性氢酶催化放氢活性的影响如图( Fig. 6)所示, 在磷酸缓冲液( pH4～8)中,可溶性氢酶催化的最适 pH 为 6. 0. 当 pH小于 6. 0时, 酶活缓慢下降; 当 pH 大于 6. 0时, 酶活性则迅速下降.此外, 不同的缓冲液系统会影响可溶性氢酶的催化活性,可溶性氢酶在 T ris-HC1 缓冲液中的催化活性比在磷酸缓冲液中低得多.2. 5　可溶性氢酶大、小亚基 N 端序列的测定SDS-PAGE 后, 将可溶性氢酶的两个亚基转移( Semi-dry t ransfer, Bio-Rad)到硝酸纤维素膜上,经考马斯亮蓝染色,切下可溶性氢酶两个亚基的蛋白Fig. 6　Ef fect of pH on th e H2-production act ivity of C. v i-nosum SHA: in 50 mmol/ L p hosphate b uffer ( pH 4 - 8 ) ; B: in 50mmol/ L T ris-HCl b uffer( pH 7- 9)带,在蛋白质自动测序仪( 494 Pro tein Sequencer,Applied Biosy stem)上测序. 氢酶大亚基 N 端氨基酸序列为: SRT ITIEPVT RXEGHAR( X 为不确定氨基酸,下同) ,与其它 NiFe-氢酶大亚基的 N 端氨基酸序列比较, 发现它们具有较高的同源性 ( Fig .7) , 且都含有相同的保守序列 PVT RIEGH .可溶性氢酶小亚基 N 端氨基酸序列 为: STQPKIT-VAT XLDGXV.一般来说, NiFe-氢酶小亚基氨基酸的同源性都较低.Fig. 7　C om pari son of similarit y of N-terminal sequences ofhydrogenas es* C. v: Chromatium v inosum; A . e: A lcal ig enes eut rop hus;T. r: T hiocap sa roseop er si cina; M . t : Meth anobact erium ther -m oautotr op hicum; SH: soluble h yd rogenase; MBH: mem -b ran e-bound hydr og enase2. 6　可溶性氢酶的 EPR 谱大多数在有氧条件下纯化的 NiFe-氢酶存在活化态和非活化态两种形式[ 8] ,因而产生两组 Ni(Ⅲ)713第 6 期 龙敏南等: 光合细菌 Chromatium vinosum 可溶性氢酶的分离提纯及特性 　EPR 谱[ 9, 10] . 这两组EPR谱的主要差别在于 gy 值.活化态氢酶 Ni(Ⅲ) EPR 谱的 gy= 2. 16,而非活化态氢酶的 gy 值为 2. 24. 纯化的氧化态可溶性氢酶在 45 K 下也产生了两组 EPR 信号( gxyz= 2. 37、2. 16、2. 016 和 gxyz= 2. 30、2. 23、2. 016) ( F ig . 8A) .这两组 EPR信号类似于其它 N iFe-氢酶的 EPR信号,表明可溶性氢酶也属于 NiFe-氢酶. 大多数NiFe-氢酶在较低的温度( < 18 K)下,在 g = 2. 0处产生一个明显的[ 3Fe-4S]簇的 EPR信号, 但氧化态可溶性氢酶在 10 K 下的 EPR 信号与 45 K 下的EPR 信号基本上没有变化,没有出现[ 3Fe-4S]簇的特征EPR信号( F ig . 8B) ,表明可溶性氢酶中不存在[ 3Fe-4S]簇.Fig. 8　EPR spectr a of ox idized C . v inosum SH ob tained at45 K( A) and at 10 K( B)Microw ave f requ ency: 9248 MHz ; 20 dB3　讨　　论本研究首次分离提纯了 C. vinosum 可溶性氢酶. 建立一种新的酶活检测方法是分离提纯成功的关键之一.可溶性氢酶是一种催化放氢的氢酶, 在最适条件下, 其催化放 H2的速率约为催化吸 H2 速率的 10倍;而膜结合态氢酶则主要表现为催化吸 H2,其催化吸 H 2的速率约为催化放 H2 速率的 10倍(数据未列出) .在以往氢酶的分离提纯中, 只检测氢酶的吸氢活性,活性的测定在 T ris-HC1( 50 mmol/L , pH8. 0)缓冲液中进行. 而在此条件下,可溶性氢酶的吸氢和放氢活性都很低. 加上两个氢酶洗脱峰靠近, 因而无法将可溶性氢酶与膜结合态氢酶区分开来.为此,我们建立了以磷酸缓冲液为反应缓冲液的检测系统, 并且测定洗脱组分的放氢活性,这就大大地提高了检测的灵敏度, 使得原本不能分开的两种氢酶轻易地区分开来. 其次,通过优化纯化各步骤的条件, 如增加破碎菌体的量,在 T SK-DEAE 柱洗脱时改用非连续梯度洗脱等, 来提高分离效果和得率.C. vinosum 可溶性氢酶的 EPR 谱及大亚基 N-末端氨基酸序列分析结果表明, 该酶是一种 NiFe-氢酶.可溶性氢酶的分子组成及理化特性都不同于膜结合态氢酶: 可溶性氢酶由 52 kD 和 21. 5 kD 两个亚基组成,而膜结合态氢酶由 62 kD和 32 kD 两个亚基组成. NiFe-氢酶是一类铁硫蛋白, 大多数NiFe-氢酶的小亚基包含两个[ 4Fe-4S ]簇和一个[ 3Fe-4S]簇. 因此,多数氧化态 NiFe-氢酶如 C. vi-nosum 膜结合态氢酶在较低温度( < 18 K)下, 都能产生一个强的[ 3Fe-4S]簇 EPR信号( g= 2. 0)[ 8]; 但可溶性氢酶在 10 K 时没有出现该 EPR信号, 表明该酶是一种新的 NiFe-氢酶,它不含[ 3Fe-4S]簇, 可能只含有[ 4Fe-4S]簇;该结果与我们对可溶性氢酶小亚基基因克隆的结果是一致的. 小亚基的氨基酸序列分析表明, 小亚基含有 5个 Cys,其中 4个 Cys位于 NiFe-氢 酶保 守的序 列框 ( CxxC. . . Gx-CxxxG. . . GCPP)中[ 11], 而该保守序列框中的 4 个Cys 是形成[ 4Fe-4S]簇的结构基础,说明可溶性氢酶的小亚基只含有一个[ 4Fe-4S]簇.由于可溶性氢酶具有较高的催化放氢的活性,并且该酶对氧和较低温度表现了较好的稳定性, 因此, 该酶在氢酶催化放氢机理的研究和氢能源的开发利用中有较好的前景.参考文献(References )1　Adams M W W, St iefel E I. Biological hydrogen product ion. S ci-ence , 1998, 282: 1842～18432 　T sygankov A A, Laurin avich ene T V, Bukat in V E , Gogotov IN, Hal l D O. Biomass product ion by cont inuous cultures ofR hod obacter capsul taus grown in var ious bioreactors . Ap plB iochem Microbiol, 1997, 33: 485～4903　Coremans J M C C , van der Zw aan J W , Albracht S P J . Dis t inctredox beh aviour of pros thet ic grou ps on ready and un ready hy-drogenas e f rom Chromat ium v inosum. B iochim B iop hy s Ac ta,1992, 1119: 157～1684 　Andrea T B, War necke U, Chris tian B, Chr ist ian e Z, Fr iedrichB. Clonin g an d nucleot ide sequen ces of the genes for the sub-un its of NAD-reducing h ydrogenase of A lcal ig enes eutrop husH 16. J Bacterial , 1990, 172( 2) : 2920～29295　Rakhely G, Colbeau A, Garin J, Vign ais P M, Kovacs K L. U n-usual organizat ion of the genes coding for Hyd SL, the s table714 中国生物化学与分子生物学报 16 卷NiFe-h ydrogenase in the ph otosyn th et ic bacterium T hiocap saroseop er si cina. J B acter iol , 1998, 180: 1460～14656 　Ch rist iane K, Karin H, Schw et t E, M anf red R, Ralf B, Barb elFriedrich . A gene com plex coding for the membrand-bound hy-drogenas e of A lcalig enes eut rop hus H 16. J B acter iol , 1992,174: 6277～62897　Reeve J N, Beck ler G S , Gram D S , Hamilton P T , Brow J W ,Krz ycki J A, Kolodziej A F, Alex L, Orme-Johomson W H ,Walsh C T . A h ydrogenase link ed gene in Methanobact eriumthermoautrop hicum s tr ain del ta H encodes a polyfer redoxin .P roc N at l A cad S ci USA , 1989, 86( 9) : 3031～30358 　Albracht S P J. Nickel h ydrogenase: in search of the act ivitys ite. B iochim Biop hys A cta, 1994, 1188: 167～2049　Happe R P, W inf ried R, Albracht S P J. Pre-s teady-state kinet-ics of the react ions of NiFe-hydrogenase fr om Chromatium v i-nosum w ith H2 and CO. Eur J Biochem, 1999, 259: 602～60810　Trofan chuk O, S tein M , Gessner C, Lendzian F, Higuchi Y, Lu-b itz W . Single cr ys tal EPR studies of the oxidi zed act ive site ofNiFe-hydrogenase from Desu lf ov ibrio vulgari s Miyazak i F. JBiol I norg C hem, 2000, 5: 36～4411　龙敏南,苏文金, A lbracht S P J, 吴健民,张凤章,许良树.光合细菌 Chromat ium v inosum 可溶性氢酶小亚基基因的克隆.厦门大学学报( Long M in-nan, Su Wen-jin , Albracht S P J , Wu Jian-min, Zh ang Feng-zhan g, Xu Liang-sh u. Gene clonin g of smal lsubu nit of s oluble hydr og enase fr om Chromatium v inosum. JX iamen Univ ) , 2000, 39: 247～252715第 6 期 龙敏南等: 光合细菌 Chromatium vinosum 可溶性氢酶的分离提纯及特性 　

Purification and Properties of Soluble Hydrogenase from Photosynthetic Bacterium Chromatium vinosum

http://dspace.xmu.edu.cn/bitstream/handle/2288/14153/%e5%85%89%e5%90%88%e7%bb%86%e8%8f%8cChromatiumvinosum%e5%8f%af%e6%ba%b6%e6%80%a7%e6%b0%a2%e9%85%b6%e7%9a%84%e5%88%86%e7%a6%bb%e6%8f%90%e7%ba%af%e5%8f%8a%e7%89%b9%e6%80%a7.pdf?sequence=1&isAllowed=y

Purification and Properties of Soluble Hydrogenase from Photosynthetic Bacterium Chromatium vinosum

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Xiamen University Institutional Repository