A. Villar del Fresno

E. Muñoz

J. Cabo

Ars Pharmaceutica (Internet)

Spanish

La cromatografía en capa fina  uni- y bimensional nos ha per­mitido detectar claramente la presencia de  siete manchas al­caloídicas. - Por comparación de estas manchas con patrón de aconitina em­pleando  diferentes fases móviles y distintos reveladores, se  de­muestra la no existencia de dicho alcaloide en el  Aconitum Ly­coctonum de Sierra Nevada. - Se  ha  logrado aislar mediante técnica cromatográfica en  capa gruesa y  oportunas eluciones, cuatro de los alcaloides del  com­plejo alcaloídico. - De dichos cuatro alcaloides se han determinado los correspon­dientes valores de  Rf en las fases móviles usuales en este tra­bajo

Muñoz, E.

Villar del Fresno, A.

Cabo, J.

Repositorio Institucional Universidad de Granada

DEPARTAMENTO DE FARMACOGNOSIA y FARMkCODINAMIA Prof. J. CABO TORRES ESTUDIO FITOQUIMICO DEL ACONITUM LYCOCTONUM DE SIERRA NEVADA.-Nota 11: EXTRACCION, ESTUDIO CROMATOGRAFICO DEL EXTRACTO, AISLAMIENTO Y SEPARACION DE LOS ALCALOIDES (*) por E. MuÑoz, A. VILLAR DEL FRESNO Y J. CABO TORRES Ars Pharm. XII, 71 (1971). En una comunicación preliminar, presentada al IX Congreso In­ternacional de la Sociedad Farmacéutica del Mediterráneo Latino (1), resumíamos la labor realizada, referente al estudio cuantitativo de su contenido alcalaídico. Como consecuencia de los resultados obtenidos, llegábamoS' entonces a las siguientes conclusiones: El contenido alcaloídico total del Aconitum Lycoctonum de Sierra Nevada (expresado en aconitina), sería: Técnica de Ph. Helv. V ed. modificada . . .  2.47% Técnica de Hernauer-Flück (modificada para el acónito oficinal). 0,98% El estudio cromatográfico de los extractos finales obtenidos en las técnicas respectivas y la determinación de la alcalinidad arrastrada por destilación, sin que en el destilado se detecten alcaloides, hada pensar que, durante el calentamiento realizado en la técnica de Hegnauer y Flück, parte de los alcaloid€s han sido destruídos hasta aminas sen­cillas o sales de amonio. Tal hipótesis vino avalada por el hecho de que dicha alcalinidad vo­látil (expresada como aconitina 1,84%) se acerca a la diferencia obtenida entre las dos técnicas antes citadas. * * * En la presente comunicación se trata del estudio de la extracción de los alcaloides, comportamiento cromatográfico del extracto bruto ob­tenido, aislamiento de dichos alcaloides y estudio cromatográfico de los mismos por separado. Antes de exponer nuestros resultados experimentales, pasemos una breve ojeada actual a la química de la fracción alcaloídica del Aconitum Lycoctonum de otras procedencias geográficas. Hasta fecha relativamente reciente -1959- no se ha podido dar Con seguridad la estructura de un alcaloide como la aconitina, conocido, aislado y -cristalizado ya en el pasado siglo. Dicho honor le cupo al equi­Po de trabajo constituído entre otros por los profesores WISNER y Bü­CHI (2). ("') Resumen presentado al Primer Simposium de Farmacobotánica. Alicante. 23/25 abril 1970. 72 E. MUÑOZ, A. VILLAR DEL FRESNO Y J. CABO TORRES La complejidad de los alcaloides-esteres, de los géneros Aconitum, Deyphinium y Garrya ha conducido a un verdadero confusionismo bi­bliográf}.co, de tal forma que no es infrecuente que un mismo alcaloide haya recibido nombres diferentes y, por otra parte, otros, considerados alcaloides originales de las plantas, no son sino productos secundarios como consecuencia de procesos hidrolíticos, bien durante la desecación del material a estudiar o durante los subsiguientes procesos extractivos. Por otra parte, al ser estudiadas plantas procedentes de lugares diferentes, con dudosa dasificación e identificación botánica, ha hecho asimismo que este co.nfusionismo sea aún más profundo. De nuestra revisión biblio.gráfica, hemos podido sacar la conclusión de que el único alcaloide aislado con seguridad es el denominado lica­conitina, base constituída por la alcamina licoctonina, y cuya estructura se encuentra hoy perfectamente esclarecida (3), pues si bien es verdad que han sido. descritos otros alcaloides, como la mioctonina (4), se nos presenta dudo�a su real existencia como entidad química pura. por su elevado P.M. (1.325,50) (5) y el no haberse conseguido cristalizarla y por supuesto tampoco su fórmula estructural. MARCHADIER, OREKHOV, entre otros, opinan que la planta objeto de nuestro estudio posee aconitina, aunque en cantidades minoritarias, idea en contraposición con lo reseñado en sus obras por YOUNGKEN (6) y PA­RIS (7) entre otros. Por todo lo. expuesto, basados en la bibliografía consultada, única­mente se puede dar como seguro en la especie A. Lycoctonum, el alca­loide licoctonina, perteneciente, junto con los restantes de otras especies de Aconitum, así como los de los antes citados géneros Delphinium y Garrya, al grupa d.e los alcaloides diterpénicos . . � - -f OC.H; 'GLn; r I ()f4 OH RO OC"3 R�H -R -L i Co c. '101--1/ IV /? -... � . .,) L; C/9 e OHI ¡/¡'-IO ARS PHARMACEUTICA 73 EXPERIMENTAL A) EXTRACCION Después de diversas pruebas en pequeñas cantidades de droga, para observar qué técnica de extracción era la más idónea sin que se al't(­rasen los alcaloides (habíamos visto eran bastante lábiles) y para que el extracto bruto fuera lo más puro posible, nos decidimos a extraer en las siguientes condiciones: Partimos de 200 gramos de droga, percolando (previa maceración durante 24 horas) con una solución 0,5 normal de ácido tartárico en alcohol de 96° hasta total agotamiento. Al percolado se le añadió su volumen en agua y se eliminaron ceras, grasas y otras �mpurezas mediante repetidos lavados con éter sulfúrico, comprobándose que el étGr de lavado no llevaba alcaloides El percolado así lavado con éter en medio ácido, se alcalinizó con COsHNa y se extrajo tres veces con éter sulfúrico. Posteriormente se extrajo con cloroformo hasta agotamiento (la emulsión formada se rom­pió mediante centrifugación). Los líquidos ·eteréo-clorofórmicos reunidos se evaporaron a vaCÍo y temperatura no superior a 45° (en "Rotavapor") ESTUDIO CROMATOGRAFICO DEL EXTRACTO BRUTO OBTENIDO Se realizó del extracto bruto por técnica uni- y bidimensional según STAHL (8), en las siguientes condiciones generales: A dlsor bentes: - Silicagel G Merck. - Silicagel G Merck con fiuoresceina. Fases móv'iles: I. Ciclohexano-cloroformo-dietilamina: (5/4/1). II. Benceno-acetato de etilo-dietilamina: (7/2/1). III Cloroformo-metanol: (96/4). IV. Cloroformo-acetato de etilo-agua: (11,5/75/16,5). (se decanta la parte superior) Reveladores: - Dragendorff modificado por MUNIER y MACHEBOEUF. - Observación a la luz ultravioleta. - Acido fosfórico. De este estudio previo, se dedujo que el número de manchas alca­obtenidas del extracto de la raíz de Aconitum Lycoctonum por . unidimensional eran cinco, y por bidimensional siete (esquemas y 2 respectivamente). 74 E. MUÑOZ, A. VILLAR DEL FRESNO Y J. CABO TORRES o O A Adsorbente: Silicagel G Merck " ESQUEMA N.o 1 o O o o . L o o . A Fase móvil: II (Benceno-acetato de etilo-diatilamina (7/2/1) Productos cromatografiados: A. Aconitina. L. Extracto del A. Lycoctonum. Revelador: Drangendorff. o o O O O ARS PHARMACEUTICA ESQUEMA N.o 2 QOCO O (JO ,-,} ' , O O O . O B O 06 Adsorbente: Silicagel G Merck Fa ' . {IV (Piridina-acetato de etilo-agua 11,5/75/16,5) ses movlles I (Ciclohe�ano-cloroformo-dietalamina 5/4/1) Productos cromatografiados: Extracto del A. Lycoctonum Revelador: Drangendorff. 75 76 E. MUÑOZ, A. VILLAR DEL FRESNO Y J. CABO TORRES C) AISLAMIENTO y SEPARACION DE ALCALOIDES DEL EXTRACTO BRUTO El estudio que previamente hemos realizado del complejo alcaloÍ­dico en capa fina, nos ha dado la pauta a seguir. Nos han parecido como idóneas las fases: 1. Ciclohexano-cloroformo-dietilamina: (5/4/1). IV. Piridina-acetato de etilo-agua: (11,5/75/16,5). Como adsorbente hemos empleado silicagel G Merck (grosor de la capa un milímetro), con fluoresceina en la fase I y sin ella en la IV (en esta fase la fluoresceina es arrastrada al frente del cromatograma). Para localizar el lugar de las bandas de los alcaloides en el primer caso se hizo directamente a la luz ultravioleta, y en el segundo Se reveló con Dragendorff modificado por MUNIER y MACHEBOEUF, una estrecha franja del cromatograma a ambos lados del mismo. El extracto problema (en solución ·etéreo-clorofórmica) se colocó a lo largo de la placa cromatográfica mediante sistema de goteo de forma que los puntos contactaran unos con otros y formasen una línea con­tinua. Una vez desarrollada la cromatoplaca y visualizada la localización de las bandas alcaloídicas se recogió cada banda del gel de sílice im­pregnado del alcaloide respectivo, por la técnica usual mediante raspado de la zona con espátula. El polvo se eluyó en cada caso (previa alcalinización con amoníaco) con una mezcla éter-cloroformo (1/1), filtrándose a continuación; los distintos eluatos filtrados (solución etéreo-clorofórmica del alcaloide), se concentraron a vaCÍo a sequedad, obteniéndose sendos residuos de alca­loides. Las zonas recogid'ás y el nombre dado a cada fracción se puede observar en el esquema á·djunto (número 3). Las fraccioneS' A y D, cro­matográficamente han resultado puras. El resto (fracción intermedia del anterior cromatograma) recogido y eluido como anteriormente se ha descrito, se ·cromatografió de nuevo preparativamente, utilizando como fase móvil Piridina-acetato de etilc­agua (11,5/75/16,5). De esta manera se lograron aislar dos alcaloides más que denominamos convencionalmente B y C. (Esquema n.O 4). Se han aislado pues, de la forma anteriormente descrita, cuatro al­caloides, cuyo, comportamiento cromatográfico en las fases móviles s;s­temáticamente empleadas en este trabajo es el que s� describe en la siguiente tabla -Rf X 100 Alcaloides I II A 52 56 B 39 49 C 33 49 D 33 34 III IV 31 62 42 67 32 49 40 48 ARS PHARMACEUTICA 77 ESQUEMA N.o 3 -----A.l. 78 E. MUÑOZ, A. VILLAR DEL FRESNO Y J. CABO TORRES ESQUEMA N.o 4 R Fases móviles: I. Ciclohexano-cloroformo-dietilamina: (5/4/1). II. Benceno-acetato de etilo-dietilamina: (7/2/1). III. Cloroformo-metanol: (96/4) IV. Piridina-acetato de etilo-agua: (11,5/75/16,5). (se decanta la parte superior) B Se ha observado que de las cinco manchas alcaloídicas, detectadas en la técnica monodimensional, una de ellas tiene un Rf semejante al de la aconitina-patrón en todas las fases móviles utilizadas. Sin em­bargo, al revelar con ácido fosfórico dicha mancha adquiere una intensa fluorescencia y no así el patrón de aconitina, lo cual nos hace concluir que en el Aconitum Lycoctonum estudiado no se encuentra dicho al·· caloide. . ARS PHARMACEUTICA 79 RESUMEN - CONCLUSIONES - La cromatografía en capa fina uni- y bi�imensional nos ha per­mitido detectar claramente la presencia de siete manchas al­caloídicas. - Por comparación de estas manchas con patrón de aconitina em­pleando diferentes fases móviles y distintos reveladores, se de­muestra la no existencia de dicho alcaloide en el Aconitum Ly­coctonum de Sierra Nevada. - Se ha logrado aislar mediante técnica cromatográfica en capa gruesa y oportunas eluciones, cuatro de los alcaloides del com­plejo alcaloídico. - De dichos cuatro alcaloides se han determinado los correspon­dientes valores de Rf en las fases móviles usuales en este tra­bajo. BIBLIOGRAFIA l.-A. VILLAR DEL FRESNO y J. CABO TORRES: Ars Pharm .. XI, 551 (1970). 2.-K. WISNER, M. GOTZ, D. C. SIMONE, L. R. FOWLER, F. W. BACHELER, R. F. C. BROW and G. BÜCHI: Tetraedron Letter, 2, 15 (19' 59). 3.-R. H. F. MANSKE and H. L. HOLMES: "The Alkaloids, Chemistry and Physio­logy", Akademic Press, New York (1970), vol. XII. pág .. 18. 4.-G. H. BOIT: "Ergebnisse der Alkaloid Chemie bis 1960", Akademie Verlag, Berlín (1961). 5.-R. F. RAFFAUF: "A Handbook oi Alkaloids and Alkaloid-containing Plants", Wiley-Interscience, New York (1970). S.-H. W. YOUGKEN: "Tratado de Farmacognosia" (Traducción de la sexta ed. inglesa), Editorial Atlante, S. A., México, D. F. (1951), pág. 418. 7.-R. R. PARIS et H. MOYSE: "Matiere Médicale", Masson, París (1965), vol. n, pág. 144, B.-E. STAHL: Thin-Layer Chromatography a Laboratory Handbook", Springer: Velrag, Heidelberg:New York (1967). 

Estudio fitoquímico del aconitum Lycoctonum de Sierra Nevada. – Nota II: Extracción, estudio cromatográfico del extracto, aislamiento y separación de los alcaloides

Portal de revistas de la Universidad de Granada

https://digibug.ugr.es/bitstream/10481/81651/1/Ars%20Pharm.%201971%3b12%281-2%29_71-79.pdf

Estudio fitoquímico del aconitum Lycoctonum de Sierra Nevada. – Nota II: Extracción, estudio cromatográfico del extracto, aislamiento y separación de los alcaloides

Abstract

Similar works

Full text

Available Versions

Repositorio Institucional Universidad de Granada

Portal de revistas de la Universidad de Granada