Coutinho, Luciano

Kelson, Rodrigo

Oliveira, Lenaldo Muniz

Paiva, Renato

Pedrosa, Diogo

Stein, Vanessa Cristina

Portuguese

Archives of the Faculty of Veterinary Medicine UFRGS

NOTA CIENTÍFICA Revista Brasileira de Biociências, Porto Alegre, v. 5, supl. 2, p. 303-305, jul. 2007   Introdução    O cerrado é um dos biomas brasileiros mais seriamente degradados, e a escolha de espécies nativas regionais para o reflorestamento destas áreas é importante, pois essas espécies já estão adaptadas às condições ecológicas locais. Além disso, no planejamento do reflorestamento deve-se considerar a relação da vegetação com a fauna, que atuará como dispersora de sementes, contribuindo com a própria regeneração natural, pois as espécies regionais, com frutos comestíveis, ajudarão a recuperar as funções ecológicas da floresta.    O Inga vera Willd., pertencente à família Fabaceae, é uma espécie frutífera e medicinal nativa do cerrado. Seus frutos apresentam polpa branca, levemente fibrosa e rica em sais minerais [1]. No entanto, alguns autores afirmam que a viabilidade das suas sementes é extremamente curta, não ultrapassando 15 dias, em condições naturais [2] e deste modo a sua propagação via sementes é inviável para a obtenção de mudas destinadas à implantação de pomares comerciais e reflorestamento de áreas degradadas.    Assim, a cultura de ovários é uma técnica realizada com êxito em muitas espécies para a obtenção de embriões somáticos a partir do cultivo de óvulos [3,4].    A embriogênese somática pode fornecer grandes quantidades de plântulas para plantios, tanto na área florestal quanto na agronômica, sendo, portanto indicada para espécies que produzem poucas sementes ou com curta viabilidade.     Entretanto, a origem dos óvulos, o estado fisiológico desses e as condições em que eles são expostos são responsáveis por diferenças na resposta embriogênica. Além disso, o alongamento in vitro dos embriões e a subseqüente aclimatização são processos longos e difíceis [5], existindo, ainda, expressão de características de juvenilidade nas plantas originadas in vitro [6].  O objetivo deste trabalho foi determinar um protocolo de calogênese em ovários de Inga vera Will subsp Affinis (DC). T.D. Penn.  Material e métodos  Material vegetal Botões florais de ingazeiro foram coletados de populações naturais, localizadas na Universidade Federal de Lavras, no período de agosto a novembro de 2005 e armazenados à temperatura de 10°C por dois dias.   Desinfestação do material vegetal  Os botões florais foram lavados em água corrente por 20 minutos e, em câmara de fluxo laminar, foram imersos em álcool 70%, por 60 segundos e hipoclorito de sódio a 2,5% de cloro ativo, por 15 minutos. Posteriormente, foi realizada a tríplice lavagem em água destilada e autoclavada e os botões foram abertos para o isolamento dos ovários.  Meios de cultura e inoculação    Após a desinfestação, os ovários provenientes de botões florais com 1,0-2,0 cm foram inoculados em tubos de ensaio contendo meio MS ou WPM, com 3% de sacarose, 0,9mM de PVP e 0,25% de carvão ativado e suplementado com 0; 4,5; 9; 22 e 44µM  de 2,4-D.       Os meios de cultura utilizados foram solidificados com ágar 0,7% e o pH ajustado para 5,8 antes da autoclavagem a 120°C por 20 minutos.     As culturas foram mantidas ao escuro à temperatura de 27 ± 2°C. A avaliação foi realizada em intervalos de 10 dias até os 45 dias, sendo observado a presença e de calos, utilizando microscópio estereoscópio com aumento de 20X.   Análise estatística    Para análise estatística, os calos foram classificados nas seguintes categorias: 0 = ausência de calos, 1 = explantes intumescido, 2 = início da calogênese, 3 = 50% do explante coberto por calos e 4 = explante totalmente coberto por calo.   O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, constituído de 10 repetições por tratamento. Todos os resultados foram analisados no programa estatístico SAS®, pela correlação de Spearman, utilizando-se o teste de Kruskall-Wallis e obtendo-se o escore médio de formação de calos, ou seja, tratamentos com maiores escores apresentaram maior formação de calos.  Resultados e discussão     Para a calogênese de ovários de ingazeiro o teste de Kruskall-Wallis foi significativo para as variáveis analisadas. A concentração de 4,5 µM de 2,4-D no meio Calogênese em Ovários de Inga vera Willd. subsp. affinis (DC.) T.D. Penn.  Vanessa Cristina Stein1, Renato Paiva2, Luciano Coutinho Silva3, Diogo Pedrosa Corrêa da Silva4, Rodrigo Kelson Silva Rezende1 e Lenaldo Muniz de Oliveira1 ________________________ 1.Doutoranda em Agronomia/Fisiologia Vegetal, Setor de Fisiologia Vegetal, Departamento de Biologia, Universidade de Lavras. Campus Universitário, cx 3037. E-mail: vanessastein@ibest.com.br 2. Professor Adjunto do Departamento de Biologia, Setor de Fisiologia Vegetal, Departamento de Biologia, Universidade Federal de Lavras. Campus Universitário, cx 3037 3. Graduando em Ciências Biológicas, Departamento de Biologia, Universidade Federal de Lavras. Campus Universitário, cx 3037 4. Mestrado em Agronomia/Fisiologia Vegetal, Setor de Fisiologia Vegetal, Departamento de Biologia, Universidade de Lavras. Campus Universitário, cx 3037.  Revista Brasileira de Biociências, Porto Alegre, v. 5, supl. 2, p. 303-305, jul. 2007  304de cultivo MS foi a mais eficiente (escore de 72), sendo bem superior ao controle (escore 42). A calogênese foi, inicialmente, observada na região basal e, posteriormente, estendeu-se para toda a região do explante com aspecto amarelo.    Quanto ao meio MS, foi observado que, com o aumento da concentração de 2,4-D para 9µM, ocorreu uma diminuição na calogênese (escore 53). No entanto, as concentrações superiores de 2,4-D proporcionaram uma pequena tendência a aumento na formação de calos (Fig.1).     Por outro lado, para o meio de cultura WPM foi verificado um acréscimo na calogênese à medida que se aumentou a concentração de 2,4-D até 9µM.    Pétalas, ovários e estames cultivados de Feijoa sellowiana Berg. em meio basal suplementado com diferentes reguladores de crescimento, dentre eles 2,4-D, mostraram uma intensa indução de calos na região basal do explante, aspecto compacto e coloração amarela translúcida [7].    Para Lilium híbrido, a combinação de 0,005μM de ácido α-naftaleno acético (ANA) e 5μM 6-benziulaminopurina (BAP) induziram a máxima formação de calos em ovários [8]. Para algumas variedades de citrus, em geral, a indução de calos ocorre entre a sexta e oitava semanas de cultivo em meio MT [6,9,10].     Para a calogênese de ovários, o meio mais indicado é o MS complementado com 4,5μM de 2,4-D.   Referências [1] LOPE, K. P.; BRUNO, R. DE L. A.; BRUNO, G. B. E MOURA, M. F.  Comportamento de Sementes de Inga sp. Durante o Armazenamento. Disponível em: http://www.ufpel.tche.br/sbfruti/anais_xvii_cbf/fitotecnia/355.htm Acesso em 05 de fevereiro de 2006. [2] BARBEDO, C.J.; CICERO, S. M. 1998. Utilização do teste de condutividade elétrica para previsão do potencial germinativo de sementes de ingá. Scientia Agrícola, Piracicaba, 55: 249-259,  [3] MOORE, G.A. Factors affecting in vitro embryogenesis from undeveloped ovules of mature Citrus fruit. 1985. Journal of the American Society for Horticultural Science, Alexandria, 110: 66-70.  [4] BUTTON, J.; KOCHBA, J. Tissue culture in the Citrus industry. 1977. In: REINERT, J.; BAJAJ, Y.P.S. (Eds.). Applied and fundamental aspects of plant cell, tissue and organ culture. Berlin: Springer-Verlag. 70-92.  [5] GMITTER JUNIOR, F.G.; MOORE, G.A. 1986. Plant regeneration from undeveloped ovules and embryogenic calli of Citrus: embryo production, germination, and plant survival. 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Revista Brasileira de Biociências, Porto Alegre, v. 5, supl. 2, p. 303-305, jul. 2007  305  010203040506070Escore médio0 4,5 9 22 442,4D µMMSWPM Figura 1 Efeito do meio de cultura e das concentrações de 2,4-D na indução de calos em ovários de ingazeiro (Inga vera Willd.), segundo o teste de Kruskall-Wallis.  

Calogênese em Ovários de Inga vera Willd. subsp. affinis (DC.) T.D. Penn

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