شناسایی اسپورهای پنی باسیلوس لاروا لاروا در نمونه های عسل و لاروهای بیمار به روش کشت و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز

Abstract

بیماری لوک آمریکایی یکی از جدی ترین بیماریهای نوزادان زنبور عسل است. روش سنتی تشخیص آزمایشگاهی بیماری بر اساس کشت و شناسایی آن بر پایه آزمایش های بیوشیمیایی، مورفولوژیکی و فیزیولوژیکی است که این روش همچنان قابل اطمینان بوده ولی بسیار زمانبر می باشد.هدف این مطالعه شناسایی اسپور های پنی باسیلوس لاروا لاروا از کلنی های زنبورعسل با روش واکنش زنجیره ای پلیمراز بود. این روش بسیار قابل اطمینان و سریع بوده و بیماری را می توان در مراحل اولیه و قبل از بروز علائم کلینیکال تشخیص داد. در این مطالعه54 نمونه از لاروهای مشکوک به بیماری و 36 نمونه عسل که به بخش زنبور عسل، کرم ابریشم و حیات وحش موسسه رازی ارسال شده بود مورد بررسی قرار گرفت. نمونه های عسل با حجم مساوی از آب مقطر رقیق شده و سانتریفوژ گردیدند و سپس رسوب برای کشت و جداسازی DNA و واکنش زنجیره ای پلیمراز استفاده شد. نمونه های لارو در آب مقطر به صورت سوسپانسیون در آمده و خوب هموژن گردید و پس از سانتریفوژ، رسوب برای کشت و جدا سازی DNA و واکنش زنجیره ای پلیمراز مورد استفاده قرار گرفت. فرآورده واکنش زنجیره ای پلیمراز روی ژل آگارز 8/0 درصد الکتروفورز گردید. از 54 نمونه لارو، 5 مورد (3/9 در صد) و از 36 نمونه عسل، 5 مورد (9/13 درصد) از نظر وجود اسپورهای پنی باسیلوس لاروا لاروا در کشت و واکنش زنجیره ای پلیمراز مثبت بودند. با بکار گیری روش واکنش زنجیره ای پلیمراز و با غربالگری نمونه های عسل در سطح منطقه ای و ملی، می توان عامل بیماری لوک آمریکایی را ردیابی و مونیتور نموده، و روش های کنترلی و پیشگیرانه را قبل از وقوع بیماری و ایجاد هر نوع خسارت اعمال نمود