Glicoconjugados (GIPLs e LPGs) de Leishmania braziliensis e L. infantum: Modulação do Sistema Imune Inato e variações na estrutura de carboidratos

Abstract

Submitted by Nuzia Santos ([email protected]) on 2013-06-03T12:50:25Z No. of bitstreams: 1 Tese-Rafael Assis.pdf: 16998488 bytes, checksum: 138dc6a874eb36a1c66935f3dfab1da4 (MD5)Made available in DSpace on 2013-06-03T12:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese-Rafael Assis.pdf: 16998488 bytes, checksum: 138dc6a874eb36a1c66935f3dfab1da4 (MD5) Previous issue date: 2012Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.Os glicoconjugados de Leishmaniatem sido extensivamente estudados, mas ainda pouco se sabe sobre o quanto polimorfismos intra e interespecíficos contribuem com o desenvolvimento das diferentes imunopatologias das leishmanioses. Por este motivo, duas espécies de importância epidemiológica foram examinadas, L. braziliensise L. infantum, agentes causadores das leishmanioses cutânea e visceral, respectivamente. O LPG de L. braziliensisnão possui cadeias laterais enquanto o LPG de L. infantumcarrega em sua estrutura oligômeros de até três β-glicoses como cadeias laterais. Por outro lado a estrutura dos GIPLs destas espécies era desconhecida e foi objeto de estudo deste trabalho. A análise estrutural dos GIPLs mostrou que L. infantumpossui GIPLs pequenos e ricos em manose, sugerindo predominância de GIPLs do tipoI e híbridos enquanto L. braziliensis apresenta GIPLs grandes e ricos em galactose, sugestivo do tipo II. Para analisar o papel destas moléculas na interação com o hospedeiro, macrófagosperitoneais murinos foram tratados com LPG ou GIPLs e a produção de nitrito, citocinas, bem como a ativação de MAPKs foram avaliados. De forma geral, macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, demonstraram uma produção maior de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO do que os estimulados com LPG de L. infantum, adicionalmente, células tratadas com LPG de ambas as espécies mostraram uma resposta pro inflamatória mais proeminente. Além disto, os GIPLsmostraram a capacidade de inibir a produção de IL-12 e NO em macrófagos estimulados com IFN-γe LPS. Finalmente, os glicoconjugados destas duas espécies resultaram em uma cinética diferencial na ativação de MAPKs. O LPG de L. braziliensis mostrou uma ativação transiente enquanto o de L. infantum uma ativação gradual. Os GIPLs de ambas espécies falharam em ativar MAPKsLeismania LPG has being extensively studied but little is known about in what extent interspecies variations contribute to the differentimmunopathologies of leishmaniases. Similarly, for GIPLs, a relatively neglected molecule, little is known about its polymorphisms among Leishmania species and its role during infection. To address this issue, two epidemiologically important South American species of Leishmania were examined, L. braziliensis and L. infantum, causative agents of cutaneous and visceral leishmaniasis, respectively. The LPG from these two species differ in structure, being L. braziliensis LPG devoid of side chains while L. infantum LPG carries one to three β-glucoses on its side chains. In the other hand the structure of the GIPLs from these two species is still unknown and was addressed in this present work. A structural analysis of the GIPLs showed that L. infantum has small, mannose rich GIPLs, suggestive of type I and Hybrid GIPLs while L. braziliensis has larger and galactose rich GIPLs, suggestive of Type II GIPLs. To address the role of these molecules upon macrophage invasion, mouse peritoneal macrophages were treatedwith either LPG or GIPLs and Nitrite and cytokine production, as well as MAPKs activation were evaluated. Overall, macrophages stimulated with L. braziliensis LPG, had a higher TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO production than those stimulated with that of L. infantum, also, IFN-γprimed macrophages stimulated with LPG, had a higher production of NO and TNF-αthan GIPLs stimulated cells. Additionally, GIPLs showed the capacity of inhibit IL-12 and NO production in IFN-γand LPS stimulated macrophages. Furthermore, the glycoconjugates from the two species resulted in differential kinetics of signaling via MAPK activation. L. infantum LPG exhibited a gradual activation profile, whereas L. braziliensisLPG showed a sharp but transient activation, while GIPLs failed to activate MAPK