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Previous issue date: 22Brucella ovis é a principal causa de falha reprodutiva em carneiros e é uma das poucas espécies de Brucella spp. que não é zoonótica. Os objetivos deste trabalho foram realizar análise proteômica comparativa do mutante sem um transportador ABC espécie-específico funcional (abcAB) com B. ovis selvagem (WT) e caracterizar seu tráfego intracelular, para elucidar o papel do sistema ABC na sua sobrevivência in vitro e intracelular. Na análise proteômica, foram identificados 55 spots de proteínas diferentemente expressas (p<0,05) entre WT e abcAB, sendo 22 proteínas com expressão diminuída no mutante abcAB, inclusive transportadores ABC de peptídeos e açúcares, proteínas de estresse metabólico e Omp31. Estes resultados evidenciam importantes funções do transportador ABC na patogênese e sobrevivência intracelular de B. ovis. Em células HeLa, B. ovis WT foi capaz de sobreviver e multiplicar em fase tardia de infecção, enquanto abcAB foi atenuada com 24 hpi. Na análise por confocal, a maioria de Brucella WT-mCherry escapou de compartimento LAMP-1+ (~80%) às 48 hpi, porém, quase 90% da abcAB-mCherry estava colocalizada com LAMP-1+. O abcAB apresentou fraca expressão do SST4 (VirB8 e VIRB11) em meio rico e meio ácido, quando comparado com amostra WT. Contudo, níveis de RNAm de virB1, virB8, hutC e vjbR foram similares em ambas as amostras. Estes resultados sugerem que transportador ABC é necessário para a expressão pós-transcricional do SST4 em B. ovis em fases tardias do tráfego intracelular.Brucella ovis is a major cause of reproductive failure in rams and it is one of the few Brucella species that is not zoonotic. To verify how the ABC transporter plays a role during B. ovis in vitro and intracellular survival, the aims of this study were to compare proteomic profile and characterize intracellular trafficking of a mutant lacking a species-specific ABC transporter (abcAB). Proteomic analyses identified 55 protein spots differently expressed (p<0.05) between WT and abcAB strains, whereas 22 proteins showed lower expression in abcAB strain, including aminoacid and sugar ABC transporters, metabolic stress proteins, and Omp31. These results may illustrate potential roles of ABC transporter in B. ovis pathogenesis and intracellular survival. In HeLa cells, B. ovis WT was able to survive and replicate at later time point, whereas abcAB was attenuated at 24 hpi. In confocal analyses, mCherry-WT Brucella was able to avoid the LAMP-1+ compartment (~80%) at 48 hpi. However, almost 90% of mCherry-abcAB colocalized with LAMP-1+ compartment. Interestingly, abcAB mutant showed a weak expression of T4SS proteins (VirB8 and VirB11) in both rich and acid media, when compared to WT B. ovis. However, mRNA levels of virB1, virB8, hutC, and vjbR were similar in both strains. These results support the notion that ABC transporter is necessary for the expression of T4SS during late stages of B. ovis intracellular trafficking, although the transporter plays a role at a posttranscriptional leve
