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Previous issue date: 2016-04-25Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESLaccase (EC 1.10.3.2, benzenediol: oxygen oxidoreductase) belongs to multicobre oxidases family, produced mainly by fungi. Due to its ability to catalyze oxidation of a wide variety of substrates, laccase has been used in various industrial applications such as delignification and bleaching of pulp, discoloration of dyes in textile effluents and detoxification of environmental pollutants. To meet the high demand of laccase at low cost is necessary to increase their production. One strategy is use of inducers such as metal ions and aromatic compounds. However, these compounds may have high toxicity and high cost. The use of agro-industrial and agricultural wastes containing laccase inducers is a sustainable and promising alternative strategy. The main of this study was to evaluate "in vitro" the capacity of ten agro-industrial wastes to induce the production of laccase from Pycnoporus sanguineus. We evaluated two different culture conditions (1% Malto extract and potato dextrose broth 0.5%) and the cultivation under stirring and static condition. The plant materials were added at a concentration of 1% (w / v) in 250 ml Erlenmeyer flasks containing 60 ml of culture medium. The best growing conditions have been established and the results of maximum laccase activity were with the medium CBD 0.5%, stirring 150 rpm at 28 ° C. Positive controls were performed (with induction xylidine and copper) and negative controls (no addition of inducer). All tests were performed in triplicate. The wastes that induced highest amount of enzyme were the cupuassu (1642U.mL-1) and cocoa (1589U.mL-1), guariroba´s straw (1258 U.mL-1) and açaí (886 U.mL-1), being greater than the induced positive control with 2,5-xylidine and copper (511 U.mL-1). Cupuassu and cocoa was selected for characterization. The enzymatic extract induced with cupuassu proved to be more stable at high temperatures and at different pHs, in addition to being able to oxidize different substrates. The extract was choice for the remediation of ethinylestradiol. Obtained 86% removal after 4 hours reaction and after 8 hours the concentration of hormone was below the method detection limit. Analysis of MS-ESI-TOF showed that hormone molecule was biodegraded during the enzymatic process.A enzima lacase (EC 1.10.3.2, benzenodiol: oxigênio-oxidorredutase) pertence à família das multicobre oxidases, produzida principalmente por fungos. Devido à sua habilidade de catalisar a oxidação de uma ampla variedade de substratos, a lacase tem sido utilizada em várias aplicações, dentre elas a detoxificação de poluentes ambientais. Para atender a alta demanda de lacase a baixo custo é necessário aumentar a sua produção. Para isso utilizam-se indutores, como íons metálicos e compostos aromáticos, que possuem elevada toxicidade e alto custo. A utilização de resíduos agroindustriais contendo indutores de lacase é uma estratégia alternativa sustentável e promissora. O objetivo deste trabalho foi avaliar “in vitro” a capacidade de dez resíduos agroindustriais em induzir a produção de lacase de Pycnoporus sanguineus e aplicar o extrato com melhor atividade enzimática na biorremediação do 17-α-Etinilestradiol. Os resíduos foram adicionados na concentração de 1% (p/v) em erlenmeyers de 250 mL, contendo 60 mL de meio de cultura. Foram realizados controles positivos (com indução por xilidina e cobre) e controles negativos (sem adição de indutores). Para a biorremediação, um volume referente a 200 U de atividade enzimática foi adicionado a frascos erlenmeyer de 150 mL, contendo 10 mL de tampão acetato 50 mM pH 5,0 e 10 mL de solução de Etinilestradiol 10 mg.mL-1. Os frascos foram colocados sob agitação de 150 rpm a 25ºC. A porcentagem de remoção foi avaliada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência-CLAE após 1,2,4,8,10,12 e 24 horas de reação. Dos resíduos testados, os que levaram à maior produção de lacase foram os de cupuaçu (1642 U.mL-1), cacau (1589 U.mL-1), palha de guariroba (1258 U.mL-1) e açaí (886 U.mL-1) no sexto dia de cultivo, sendo superiores ao controle positivo induzido com 2,5-xilidina e cobre (511 U.mL-1). O extrato enzimático induzido com resíduo de cupuaçu se mostrou ser estável a elevadas temperaturas, bem como a diferentes pHs, além de ter sido capaz de oxidar diferentes substratos, sendo o extrato de escolha para a remediação do 17-α-Etinilestradiol. Obteve-se 86% de remoção após 4 horas de reação e após 8 horas a concentração do hormônio foi abaixo do Limite de Detecção do método. Análises de MS-ESI-TOF mostraram que a molécula de hormônio pode ter sofrido biodegradação durante o processo de biorremediação
