Avaliação de co-infecção de Anticarsia gemmatalis MNPV e Chrysodeixis includens NPV em cultura de células de inseto.

Abstract

Os baculovírus Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) e Chrysodeixis includens nucleopolyhedrovirus (ChinNPV) que infectam duas importantes pragas da soja, Anticarsia gemmatalis e Chrysodeixis includens, respectivamente, foram testados a respeito da infectividade a diferentes linhagens celulares. As linhagens celulares, IPLBSF-21AE, Sf9 e BTI-Tn-5B1-4, foram previamente definidas como produtivas para infecção de AgMNPV. Neste trabalho a susceptibilidade destas linhagens à infecção simples por ChinNPV e infecção mista de ChinNPV e AgMNPV foram testadas. As células foram semeadas a uma densidade de 1X106 por placa de 60mm2. Os vírus foram obtidos a partir de hemolinfa de larvas infectadas, aos 4 dias pós-infecção (d.p.i.), e adsorvidos a células durante 1 hora (P0). Células infectadas foram mantidas em meio TNMFH completo a 27°C. As células foram inicialmente monitoradas por microscópio ótico durante cinco dias para realizar as análises morfológicas. Posteriormente, os sobrenadantes foram coletados para novas infecções (P1) usando o mesmo procedimento. Aos 5 d.p.i., os sobrenadantes foram coletados para a segunda passagem (P2). A ultraestrutura dos corpos de oclusão foi analisada por Microscopia Eletrônica de Transmissão para a passagem P0. A quantidade de DNA obtida dos Budded Virus (BVs) das três passagens foi monitorada por PCR em tempo real (qPCR) usando sistema Sybr green com primers desenhados para gp64 de AgMNPV e photolyase de ChinNPV. Bioensaios foram realizados com larvas de A. gemmatalis e C. includens para comprovação de co-oclusão na dose estimada de 1 poliedro/larva. Os resultados demonstraram sucesso na co-infecção nestas células, mas a quantidade de ChinNPV tende a diminuir nas passagens seriais, enquanto a quantidade de AgMNPV tende a aumentar na primeira passagem e estabilizar na segunda passagem. Os resultados de bioensaios comprovaram a presença de poliedros co-ocluidos com ambos os vírus.bitstream/item/178615/1/boletim333-anticarcia.pd