Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2019.
Abstract
O cupuaçuzeiro, Theobroma grandiflorum (Willd. ex Spreng.) Schum., é uma espécie nativa da Amazônia que produz uma das frutas mais populares da região, o cupuaçu. Sua polpa tem sabor e aroma muito apreciados, sendo utilizada na fabricação de uma grande diversidade de doces e na preparação de sucos. A partir das amêndoas é possível produzir o cupulate, produto similar ao chocolate. A cultura do cupuaçuzeiro tem relevante importância econômica para a região amazônica. Um dos entraves para esta cultura, no entanto, é a doença vassoura-de-bruxa (VB), causada pelo fungo Moniliophthora perniciosa, que compromete o desenvolvimento e a produção da planta. Este fungo acomete inicialmente as regiões meristemáticas do cupuaçuzeiro, particularmente o meristema da gema apical, causando superbrotamento, hipertrofia e hiperplasia dos tecidos, que acabam morrendo. Para maior entendimento do processo de infecção, genes relacionados à patogênese, particularmente os genes que codificam para as proteínas PR (pathogenesis-related), foram identificados em cupuaçuzeiro. Estudos de expressão temporal e espacial destes genes nos tecidos-alvo da infecção são necessários para acrescentar informações sobre a função de cada um no desenvolvimento da doença. Para tanto, torna-se necessário o estabelecimento de um método eficiente de hibridização in situ que permita identificar os locais e momentos específicos da expressão dos genes de interesse. Neste trabalho foi ajustada metodologia de hibridização in situ em gemas apicais de cupuaçuzeiros, desde a fixação e preparo do material vegetal até as condições de hibridização e pós-hibridização. Gemas apicais de galhos de cupuaçuzeiro foram coletadas e processadas para avaliação morfo-anatômica por microscopia de luz. Fragmento de cDNA de um gene de proteína do tipo PR foi clonado em pGEM®-T Easy e sondas de mRNA senso e antisenso marcadas com digoxigenina, produzidas por transcrição, foram utilizadas para a hibridização in situ em meristemas de cupuaçu. A técnica utilizada mostrou ser viável para a localização da expressão de genes neste tecido.bitstream/item/211640/1/Boletim-Cupuacu-35712.pd
