Mestrado em Biologia Molecular e CelularAs populações de anfíbios têm decaído ao longo dos últimos anos devido a
inúmeros fatores, tais comos, a perda de habitat, a contaminação/poluição e
um dos mais importantes, as doenças. Estas perdas originam também a perda
de diversidade genética das espécies, podendo comprometer a sua aptidão e
também capacidade de adaptação. Tendo em conta todos estes fatores, é
necessário proceder à preservação das populações de anfíbios,
independentemente do local em que se encontram ser contaminado, pristino,
rural ou urbano. Sabendo que os anfíbios de zonas urbanas podem ser uma
fonte importante para a diversidade genética da espécie e que estão expostos,
tal como as populações de zonas naturais, a agentes patogénicos, sendo que
normalmente são populações negligenciadas a nível de proteção, urge a
necessidade de as avaliar e proteger, nomeadamente contra agentes
patogénicos. De uma forma geral, esta proteção é conferida de uma forma
inata por estruturas ao nível da pele, que fazem parte do seu sistema
imunitário. Estas são glândulas granulares responsáveis pela produção de
compostos peptídicos capazes de inibir o crescimento de agentes patogénicos.
Em acréscimo, a microbiota existente na pele estimula e complementa a
atividade destas secreções. Com base nestes factos, este trabalho teve como
objetivos: i) avaliar de que forma fatores como as estações do ano (Primavera
e Outono) e o género, podem influenciar a microbiota cultivável da pele de
Pelophylax perezi de zonas urbanas, ii) avaliar se os isolados bacterianos da
pele apresentam atividade antimicrobiana e iii) avaliar o potencial dos isolados
bacterianos com atividade antimicrobiana enquanto possíveis agentes
probióticos, na presença de um agente patogénico. Os resultados obtidos
mostraram diferenças entre locais ao nível das espécies isoladas, sendo
poucas as espécies comuns entre locais. Além disso, foi evidenciado que num
total de 120 isolados, 19 possuíam atividade antimicrobiana face a Bacyllus
aquimaris e Aeromonas salmonicida. Também se verificaram diferenças na
atividade antimicrobiana entre estações do ano, existindo um maior número de
espécies com atividade antimicrobiana no Outono. Dos isolados com atividade
antimicrobiana, os três com maior atividade, Pseudomonas rhizosphaerae,
Pseudomonas fluorescens e Bacillus mycoides foram selecionados para a
segunda fase do trabalho, em que se avaliou o seu potencial enquanto
possíveis agentes probióticos. Após exposição, in vivo, de girinos aos
probióticos, em simultâneo com A. Salmonicida, verificou-se que estes
evitavam mortalidade dos girinos, bem como diminuíam o dano peroxidativo
quando comparados com os valores do agente patogénico. Dos três
probióticos B. mycoides mostrou ser aquele com maior capacidade de
estimular as enzimas antioxidantes, sendo o agente probiótico com os valores
mais baixos de dano peroxidativo.Amphibian populations have declined over the past few years due to numerous
factors such as habitat loss, contamination / pollution and one of the most
important, diseases. These losses also result in the loss of genetic diversity of
the species, which may compromise their fitness and ability to adapt. Taking all
these factors into account, it is necessary to preserve amphibian populations,
regardless of being found in contaminated, pristine, rural or urban sites. Given
that urban amphibian populations can be an important source for genetic
diversity of the species and that they are exposed, such as populations of
natural areas, to pathogens, there is a need for assess and protect them
against pathogenic agents. Generally, this protection is conferred in an innate
way by skin structures, which are part of your immune system. These are
granular glands responsible for the production of peptidic compounds capable
of inhibiting the growth of pathogens. In addition, the microbiota in the skin
stimulates and complements the activity of these secretions. Based on these
facts, this work had as objectives: i) to evaluate how factors such as
seasonality (spring and autumn) and gender can influence the cultivable
microbiota of Pelophylax perezi skin in urban areas; ii) assess the ability of the
bacterial skin isolates to present antimicrobial activity and iii) evaluate the
potential of bacterial isolates with antimicrobial activity as potential probiotic
agents. The obtained results showed differences between sites at the level of
the isolated species, with few common species between sites. In addition, it
was evidenced that in a total of 120 isolates, 19 had antimicrobial activity
against Bacyllus aquimaris and Aeromonas salmonicida. There were also
differences in antimicrobial activity between seasons, with a higher number of
species with antimicrobial activity in the autumn. Of the isolates with
antimicrobial activity, the three with the highest activity, Pseudomonas
rhizosphaerae, Pseudomonas fluorescens and Bacillus mycoides were
selected for the second phase of the study, in which their potential action as
probiotic agents was evaluated. After in vivo exposure of the tadpoles to the
probiotics, along with A. salmonicida, these were found to decrease the
mortality of tadpoles as well as to decrease the peroxidative damage, when
compared to the values obtained from the exposure to the pathogen. From the
three probiotics B. mycoides revealed to be the one with the greatest capacity
to stimulate the antioxidant enzymes, being the probiotic agent with the lowest
values of peroxidative damage