AUER, C. G.

SANTOS, A. F. dos

SILVA, T. W. R. da

Infoteca-e

319ISSN 1980-3982Colombo, PROutubro, 2013TécnicoComunicadoDetecção de Fusarium spp. em sementes de Pinus taedaThaisa Wendhausen Ramos da Silva1Álvaro Figueredo dos Santos2Celso Garcia Auer3A área plantada com pínus no Brasil é de 1.641.892 ha e está concentrada principalmente na região Sul do País, devido à localização dos principais centros processadores da madeira dessa espécie. A região Sul detém 83% da área de plantios florestais com pínus. O estado do Paraná lidera o ranking da área plantada, com 40,1% da área total, seguido por Santa Catarina e Rio Grande do Sul, que possuem 32,8% e 10%, respectivamente (ANUÁRIO..., 2012). O consumo de madeira em tora de pínus para uso industrial, considerando todos os segmentos, foi de 49,8 milhões de m³ no ano de 2011 (ANUÁRIO..., 2012). A indústria madeireira foi o segmento de maior consumo de madeira em tora de pínus, com 54,78%, seguida dos segmentos de celulose e papel, com 16,27%, painéis de madeira industrializada, com 15,56%, e lenha industrial, com 12,81% (ANUÁRIO..., 2012). Em decorrência da importância da produção de madeira de P. taeda para o setor florestal, a demanda por mudas vem aumentando. Com isso, os problemas fitossanitários  nos viveiros onde são produzidas as mudas têm sido ampliados. Portanto, o conhecimento fitossanitário das sementes torna-se importante para a formação de mudas de qualidade em viveiro. Estas mudas, caso não cuidadas devidamente, podem originar plântulas doentes ou disseminar microrganismos para áreas ainda não infestadas (CARNEIRO, 1986; SANTOS et al., 2011). As principais doenças que ocorrem em viveiros de pínus são o tombamento de mudas e as podridões de raízes, que podem ser causados por diversos patógenos, como Rhizoctonia sp., Fusarium spp., Cylindocladium sp., Phytophthora sp. e Pythium sp. (AUER et al., 2001). O ataque destes patógenos ocorre durante as fases de germinação das sementes e de mudas. Em trabalho realizado por Grigoletti Junior e Auer (2006), mudas de P. taeda inoculadas com Fusarium sp. apresentaram sintomas a partir dos 10 dias após a inoculação. Na parte aérea ocorreu redução do crescimento da muda e descoloração 1Engenheira-agrônoma, Mestre, tharamos@hotmail.com2Engenheiro-agrônomo, Doutor, pesquisador da Embrapa Florestas, alvaro.santos@embrapa.br3Engenheiro florestal, Doutor, pesquisador da Embrapa Florestas, celso.auer@embrapa.br2 Detecção de Fusarium spp. em sementes de Pinus taedadas acículas para um tom verde amarelado. Em seguida, a parte apical da muda começou a secar e curvar-se para baixo, provocando murcha e, consequentemente, morte. No sistema radicular, ocorreu redução no desenvolvimento e necrose das raízes atacadas, quando comparadas com raízes de plantas sadias. As fontes primárias de inóculo desses patógenos podem ser o substrato, a água de irrigação, as instalações, os materiais contaminados (estufas, tubetes) e as sementes. Algumas pesquisas com patologia de sementes já relataram a associação de Fusarium spp. a sementes de P. taeda (LASCA et al., 1971; CARNEIRO, 1986; HOMECHIN, 1986). A detecção de fungos associados às sementes pode ser feita por diferentes métodos, sendo o mais comum o método do papel filtro, mais conhecido como blotter test, do meio de cultura como ágar-ágar e batata-dextrose-ágar (BDA) e meios seletivos ou semiseletivos (NEERGAARD, 1979; SANTOS et al., 2011). Particularmente, para sementes de pínus, Anderson et al. (1984) e Anderson (1986), descrevem um protocolo de detecção para Fusarium subglutinans baseado nos métodos do papel cartão e um meio seletivo. O presente trabalho teve como objetivo comparar três métodos quanto à eficiência na detecção de Fusarium spp. de sementes de P. taeda.Os experimentos foram conduzidos nos Laboratórios de Patologia Florestal e de Sementes Florestais da Embrapa Florestas, Colombo, Paraná.As sementes utilizadas nos experimentos são provenientes de seis lotes de P. taeda, denominados lotes 1, 2, 3, 4, 5 e 11, pertencentes ao estoque do Laboratório de Sementes Florestais da Embrapa Florestas e coletados no município de Arapoti, PR.Para a detecção de Fusarium spp. nas sementes foram utilizados três diferentes métodos: blotter test (BT), papel cartão (PC) e meio seletivo (MS). O protocolo de detecção de Fusarium spp. em sementes de pínus utilizado neste experimento foi baseado em trabalhos de Anderson et al. (1984), Anderson (1986) e Santos et al. (2011), com algumas modificações. Blotter test (BT) - As sementes de P. taeda não desinfestadas foram esmagadas com auxílio de um bastão de vidro esterilizado e colocadas em caixas gerbox, previamente desinfestadas com hipoclorito de sódio a 1% e forradas com papel mata-borrão esterilizado e umedecido com água destilada esterilizada. As sementes foram incubadas a 20 ºC, sob luz fluorescente, em fotofase de 12 h, por sete dias.Papel Cartão (PC) - Foi preparado um caldo nutritivo composto de 15 g de peptona, 5 g de MgSO4 7H2O, 1 g de KH2PO4, 1 g de pentacloronitrobenzeno (PCNB) em 1000 mL de água destilada. Esse caldo foi vertido sobre uma folha de papel cartão de cor azul e esterilizado em quantidade suficiente para saturar a folha de papel (ANDERSON, 1986). O papel cartão de cor azul, umedecido com o caldo nutritivo, foi colocado em caixas gerbox, previamente desinfestadas com hipoclorito de sódio a 1%. As sementes de pínus não desinfestadas foram individualmente esmagadas sobre uma superfície de vidro esterilizado com um bastão esterilizado. Posteriormente, as sementes foram colocadas sobre o papel cartão umedecido com o caldo nutritivo. As caixas gerbox foram incubadas a 20 ºC, sob luz fluorescente, em fotofase de 12 h, por 14 dias. Meio Seletivo (MS) - Este método implica no uso de um meio seletivo para Fusarium spp., preparado com 15 g de peptona, 5 g de MgSO4 7H2O, 1 g de KH2PO4, 1 g de PCNB  e 20 g de ágar em 1000 mL de água destilada (ANDERSON, 1986). O meio foi suplementado com soluções de cloranfenicol (40 ppm) e ampicilina (40 ppm) antes de ser vertido em placas de Petri. As sementes de pínus não desinfestadas foram esmagadas com bastão esterilizado e colocadas sobre a superfície do meio seletivo. As placas de Petri foram incubadas a 20 ºC, sob luz fluorescente, em fotofase de 12 h por 14 dias.As avaliações dos três métodos foram realizadas observando-se as colônias fúngicas crescidas sobre as sementes com auxílio de microscópio estereoscópico e, quando necessário, foram preparadas lâminas para observação em microscópio óptico e identificação com auxílio da chave de Barnett e Hunter (1998).O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, sendo três tratamentos com quatro repetições cada, totalizando 100 sementes por tratamento.3Detecção de Fusarium spp. em sementes de Pinus taedaForam observadas colônias de Fusarium spp. em sementes de P. taeda a partir dos três métodos: BT, PC e MS. Os resultados da avaliação dos métodos de detecção encontram-se na Tabela 1 e Figura 1. Na maioria dos seis lotes de sementes, o método MS foi superior aos demais na detecção de Fusarium spp., exceto no lote 2, cujos métodos não diferiram entre si. No lote 5, os métodos de PC e MS não diferiram entre si, no entanto, estes dois métodos foram superiores ao BT (Tabela 1). Nos lotes 1 e 3, os métodos BT e PC não diferiram entre si na detecção Fusarium spp., sendo menos sensíveis do que o método MS. Entretanto, o mesmo não foi observado nos lotes 4 e 11, cujos três tratamentos diferiram entre si. No lote 4 foi observada a maior desigualdade entre os tratamentos, pois o método MS apresentou 94% de incidência de Fusarium spp. nas sementes, enquanto que os métodos BT e PC apresentaram incidência de 33% e 7%, respectivamente (Tabela 1).Em geral, o MS foi o método que apresentou maior sensibilidade para a detecção de Fusarium spp. em todos os lotes de sementes de Pinus taeda, quando comparado aos outros métodos testados (BT e PC). Anderson (1986) comparou os métodos PC e MS em pínus, e obteve resultados similares na detecção de Fusarium subglutinans em três lotes de sementes com diferentes incidências deste patógeno. No entanto, neste trabalho verificou-se similaridade nos resultados de MS e PC em apenas dois lotes dos oito avaliados.     Incidência média de Fusarium spp. (%)Tratamentos Lote 1 Lote 2 Lote 3 Lote 4 Lote 5 Lote 11 MédiasBlotter test  13 B b  7 A bc  4 B c  33 B a 10 B bc  5 C c 12 BPapel cartão 16 B bc 12 A cd 11 B cd 7 C d 30 A a 26 B a 17 BMeio seletivo 67 A b   16 A e 34 A d 94 A  a 39 A cd 48 A c  50 ATabela 1. Incidência média (%) de Fusarium spp. em sementes de seis lotes de Pinus taeda detectados pelos métodos de blotter test, papel cartão e meio seletivo. Médias seguidas pela mesma letra maiúscula na coluna e minúscula na linha não diferem entre si pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade.Figura 1. Métodos de detecção de Fusarium spp. em sementes de Pinus taeda. Fase de instalação: A) Blotter test; B) Papel cartão; C) Meio seletivo. Fase de avaliação: D) Blotter test (7 dias); E) Papel cartão (14 dias); F) Meio seletivo (14 dias). Fotos: Thaisa W. R. Silva  B  A  C  D  E  F 4 Detecção de Fusarium spp. em sementes de Pinus taedaEmbrapa FlorestasEndereço: Estrada da Ribeira Km 111, CP 319Colombo, PR, CEP 83411-000Fone / Fax: (0**) 41 3675-5600  E-mail: cnpf.sac@embrapa.br1a ediçãoVersão eletrônica (2013)Presidente: Patrícia Póvoa de Mattos Secretária-Executiva: Elisabete Marques Oaida Membros: Alvaro Figueredo dos Santos, Claudia Maria Branco de Freitas Maia, Elenice Fritsons, Guilherme Schnell e Schuhli, Jorge Ribaski, Luis Claudio Maranhão Froufe, Maria Izabel Radomski, Susete do Rocio Chiarello PenteadoSupervisão editorial: Patrícia Póvoa de Mattos  Revisão de texto: Patrícia Póvoa de Mattos   Normalização bibliográfica: Francisca RascheEditoração eletrônica: Rafaele Crisostomo Pereira Comitê de PublicaçõesExpedienteComunicado Técnico, 319CGPE 10696  ReferênciasANUÁRIO Estatístico da ABRAF 2012: ano base 2011. Brasília, DF: ABRAF, 2012.ANDERSON, R. L. A new method for assessing contamination of slash and loblolly pine seeds by Fusarium moniliforme var. subglutinans. Plant Disease, Saint Paul, v. 70, n. 5, p. 452-453, 1986.ANDERSON, R. L.; BELCHER, E.; MILLER, T. Occurrence of seed fungi inside slash pine seeds produced in seed orchards in the United States. Seed Science and Technology, Zurich, n. 12, p. 795-799, 1984.AUER, C. G.; GRIGOLETTI JUNIOR, A.; SANTOS, A. F. dos. Doenças em Pinus: identificação e controle. Colombo: Embrapa Florestas, 2001. (Embrapa Florestas. Circular técnica, 48).BARNETT, H. L.; HUNTER, B. B. Illustrated genera of imperfect fungi. 4th ed. Saint Paul: APS Press, 1998.CARNEIRO, J. S. Microflora associada a sementes de essências florestais. Fitopatologia Brasileira, Brasília, DF, v. 11, p. 557-566, 1986.GRIGOLETTI JUNIOR, A.; AUER, C. G. Fusariose em mudas de Pinus taeda. Colombo: Embrapa Florestas, 2006. (Embrapa Florestas. Comunicado técnico, 166).HOMECHIN, M.; PIZZINATTO, M. A.; MENTEN, J. O. M. Sanidade de sementes de Pinus elliottiivar. elliottii e Pinus taeda e patogenicidade de Fusarium oxysporum em plântulas de Pinus elliottiivar. elliottii. Summa Phytopathologica, Piracicaba, v. 12, p. 102-112, 1986.LASCA, C. C.; SAMPAIO, A. S.; CINTRA, A. F. Condições fitossanitárias de sementes importadas de Pinusspp. O Biologico, São Paulo, v. 37, n. 11, p. 287-292, 1971.NEEGAARD, P. Seed pathology. London: Mac Millan Press, 1979. 829 p. v. 1.SANTOS, A. F. dos; PARISI, J. J. D.; MENTEN, J. O. M. (Ed). Patologia de sementes florestais. Colombo: Embrapa Florestas, 2011. 236 p. 

Detecção de Fusarium spp. em sementes de Pinus taeda.

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Detecção de Fusarium spp. em sementes de Pinus taeda.

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