Визначення валідаційних характеристик уф-спектрофотометричної методики кількісного визначення доксиламіну в крові у варіанті методу стандарту

Abstract

With the purpose of improvement of carrying out the quantitative determinations in forensic and toxicological analysis the possibility of application of the method of standard for UV-spectrophotometric determination of analytes in biological fluids has been studied. The procedure for determination and acceptability estimation of linearity, accuracy and precision for validation of such methods in the variant of the method of standard tested by the example of UV-spectrophotometric method of doxylamine quantitative determination in blood has been offered. The given procedure provides application of the normalized coordinates. For normalization of the experimental data obtained two approaches have been used: 1) Approach 1: the use of the reference solution with the concentration of the analyte corresponding to its concentration in the final spectrophotometric solution measured under the condition of zero losses for the point of 100% in the normalized coordinates. 2) Approach 2: the use of the reference sample with the concentration of doxylamine corresponding to its concentration for the point of 100% in the normalized coordinates. Estimation of linearity, accuracy and repeatability of the method at the first stage has been performed using the model solutions within the approach based on assumption of insignificance of the uncertainty of the analyte quantitative determination in model solutions in comparison with the complete uncertainty of the analysis results ΔAs. At the second stage determination of linearity, accuracy, repeatability and intermediate precision of the method has been carried out on the model samples prepared using the matrix for three parallel runs. It has been shown that the method of standard can be applied for UV-spectrophotometric determination of doxylamine in blood – Approach 1 is more acceptable.С целью рационализации проведения количественных определений в судебно-токсикологическом анализе изучена возможность использования метода стандарта при проведении УФ-спектрофотометрического определения аналитов в биологических жидкостях. Предложенапроцедура определения и оценки приемлемости линейности, правильности и прецизионности для валидации таких методик в варианте метода стандарта, которая апробирована на примере УФ-спектрофотометрической методики количественного определения доксиламина в крови. Предложенная процедура предполагает использование нормализованныхкоординат – для нормализации полученных экспериментальных данных использованы два подхода. 1) Подход 1: использование раствора сравнения с концентрацией аналита, соответствующей его концентрации в конечном спектрофотометрируемом растворе при условии нулевых потерь для точки 100% в нормализованных координатах. 2) Подход 2: использование образца сравнения с концентрацией аналита, соответствующей его концентрации для точки 100% в нормализованных координатах. Оценку линейности, правильности и сходимости методики на первом этапе выполняли с использованием модельных растворов в рамках подхода, основанного на предположении незначимости неопределенности количественного определения аналита в модельных растворах по сравнению с полной неопределенностью результатов анализа ΔAs. На втором этапе проводили определение линейности, правильности, сходимости и внутрилабораторной прецизионности методики на модельных образцах, приготовленных с использованием матрицы, для трех параллельных последовательностей. Показано, что для УФ-спектрофотометрического определения доксиламина в крови можно применять метод стандарта – при этом более приемлемым является Подход 1.З метою раціоналізації проведення кількісних визначень в судово-токсикологічному аналізі вивчена можливість використання методу стандарту при проведенні УФ-спектрофотометричного визначення аналітів у біологічних рідинах. Запропоновано процедуру визначення та оцінки прийнятності лінійності, правильності та прецизійності для валідації таких методик у варіанті методу стандарту, що апробовано на прикладі УФ-спектрофотометричної методики кількісного визначення доксиламіну в крові. Запропонована процедура передбачає використання нормалізованих координат – для нормалізації отриманих експериментальних даних використано два підходи. 1) Підхід 1: використання розчину порівняння з концентрацією аналіту, що відповідає його концентрації в кінцевому спектрофотометрованому розчині за умови нульових втрат для точки 100% в нормалізованих координатах. 2) Підхід 2: використання зразка порівняння з концентрацією аналіту, що відповідає його концентрації для точки 100% в нормалізованих координатах. Оцінку лінійності, правильності і збіжності методики на першому етапі виконували з використанням модельних розчинів у рамках підходу, що ґрунтується на припущенні незначущості невизначеності кількісного визначення аналіту в модельних розчинах у порівнянні з повною невизначеністю результатів аналізу ΔAs. На другому етапі проводили визначення лінійності, правильності, збіжності і внутрішньолабораторної прецизійності методики на модельних зразках, приготованих з використанням матриці, для трьох паралельних послідовностей. Показано, що для УФ-спектрофотометричного визначення доксиламіну в крові можна застосовувати метод стандарту – при цьому більш прийнятним є Підхід 1