Maciel, Michele de Souza

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Repositório do INPA

XV Jornada de Iniciação Científica do PIBIC/CNPq/FAPEAM/INPA Manaus-AMSAU-22ESTUDO DA INFECTIVIDADE DE CEPAS DE LEISHMANIA SPP.UTILIZANDO ANIMAIS DE LABORATÓRIOMichele de Souza Maciel I), Maricleide de Farias Naif 2), Liliane Coelho R. Nery", Luandade Paula Figueira (3),Francimeire G. Pinheiro (3) ,Antonia M R Franco & Flávia R. A.C.N.Moreira 3(I)Bolsista PIBI CIF APEAM. (2)Orientador CPCS/lNP A. (3)Co-Orientadores CPCS/lNP AOs protozoários do gênero Leishmania são os agentes causadores de um amplo espectro de doençasabrangendo desde lesões de pele que podem se curar espontaneamente até infecções viscerais letaisquando não tratadas (WHO, 2004). As Leishmania ocorrem em duas formas principais distintas:promastigotas, encontradas no trato digestivo do inseto vetor (fêmeas de flebotomineos) e asamastigotas encontradas em células do sistema mononuclear fagocítico do hospedeiro vertebrado.Durante sua migração pelo trato digestivo do inseto vetor, as promastigotas passam por uma sériede transformações morfológicas e moleculares que culminam em sua transformação da formaprocíclica (não-infectiva) na forma metacíclica, infectiva para o hospedeiro vertebrado. Observou-se que durante o cultivo in vitro, as promastigotas em fase estacionária apresentam-se diferenciadasem sua forma metacílica (Sacks & Perkins, 1984; Bates, 1994). Outra observação relevante é quepromastigotas mantidas in vitro por sucessivas passagens perdem a capacidade de infectar ohospedeiro vertebrado. Esta perda de infectividade está associada a alteração da expressão de umasérie de proteínas e carboidratos de superfície (De T & Roy, 1999; Beetham et al., 2003). Para arealização de estudos torna-se necessária a obtenção de amostras infectivas e não infectivas. Assim,a proposta do presente trabalho é avaliar a perda de infectividade de amostras de Leishmaniaamazonensis (IFLA/BR/67IPH8) por sucessivas passagens in vitro. Para isto, promastigotas de L.amaronensis foram semeadas em meio RPMI com 10 % de soro fetal bovino e mantidas porsucessivas passagens in vitro. A cada cinco passagens, 106 parasitas eram coletados do meio RPMIe inoculados na pata esquerda traseira de hamsters. A infectividade das amostras foi acompanhadasemanalmente por medição das patas utilizando-se paquímetro. Observou-se que a amostra L.amazonensis infectiva (obtida da cultura duas passagens após o isolamento) causou lesão duassemanas após a infecção. Com as amostras mantidas em cultivo por dez passagens não foiobservada lesão até 32 semanas após a infecção. Esses resultados indicam que a manutenção dosparasitas em cultivo in vitro por 10 passagens já é suficiente para que ocorra a perda deinfectividade em L. amazonensis. Foram também coletadas amostras de parasitas infectivos e não____________________________________________________________ 189XV Jornada de Iniciação Científica do PIBICICNPqlFAPEAM/INPA Manaus-AMinfectivos para avaliação do perfil eletroforético em SDS-PAGE. Para isso, 2 X 109 parasitas foramressuspendidos em 1 mL de PBS com 0,4% de CHAPS na presença de inibidores de proteases e aamostra incubada por 1h no gelo, sendo em seguida, centrifugada a 14000 rpm por 1h. O extratoobtido foi aplicado em eletroforese desnaturante em géis de poliacrilamida 10%. Observou-se queos perfis protéicos de promastigotas infectivas e não infectivas são bastante diferentes, comaumento e diminuição na expressão de várias proteínas, conforme observado na figura abaixo. Épossível que muitas dessas proteínas estejam envolvidas com a infectividade dos parasitas.~160 -120 -100 -90-80-706020NIReferências bibliográficas:Desenho 1: Perfil eletroforético de extratos de promastigotas deL. amazonensis infectivas (1) e não-infectivas (NI).proteínas cuja expressão aumentou nas amostras não-infectivas..- proteínas cuja expressão diminuiu nas amostras não-infectivas. KDa= padrão de peso molecular.Bates, P.A. 1994. The developmental biology of Leishmania promastigotes. Experimental Parasitology, 79(2): 215-&.Beetham, l.K.; Donelson, l.E.; Dahlin, R.R. 2003. Surface glycoprotein PSA (GP46) expression during short - and long-terrn cultureof Leishmania chagasi. Molecular and Biochemical Parasitology. 131(2): 109-17.Sacks, Perkins. 1984. Identification of an infective stage of Leishmania promastigotes. Science, 30; 223 (4643): 1417-9.WHO, 2004. Página da Organização Mundial de Saúde http://www.who.intlen/190 _

Estudo da Infectividade de Cepas de Leishmania Spp.Utilizando Animais de Laboratório

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