Lutzomyia umbratilis Ward & Fraiha (Diptera: Psychodidae) is the main phlebotomine sand fly vector of cutaneous leishmaniasis due to Leishmania guyanensis Floch (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) in northern South America. Populations of L. umbratilis naturally infected by Leishmania guyanensis can be found east of the Rio Negro and north of the Rio Amazonas. South of the Amazon river system, only natural infections by trypanosomatids other than Leishmania have been reported in L. umbratilis. With the aim of detecting possible geographical variations in natural populations of L. umbratilis separated by the Negro-Amazonas system, the present work integrated morphologic and molecular studies. Sand fly catches were done in the state of Amazonas: Manaus, Pitinga, Manacapuru and Novo Airão. A total of 46 morphologic characters of 40 fourth instar larvae of each population were measured, and the data were analyzed by univariate and multivariate analyses. The results showed highly significant differences among the populations. The chaetotaxy and description of the pupa of L. umbratilis was accomplished. Characters of the armature of the genital atrium of adults from Manacapuru and Manaus were compared, showing slight qualitative differences, and significant differences in relation to the size of the spines. Through conventional coloration the polytene chromosome was observed, but the bands could not be analyzed, and the kariotype was shown to be 2n=6. A total of 300 specimens of each population were used for the isoenzyme analyses, and 12 enzymatic systems were tested in starch gel and starch-agarose with specific buffers and staining. The analysis of 10 enzymatic loci showed that the allelic frequencies did not demonstrate significant differences, and the proportion of polymorphic loci were the same among the populations. The results of the coefficient F of Wright showed that all the loci presented low genic structuring. The genetic distance was very close among the populations, suggesting that they are homogeneous. Additional studies using other genetic markers and morphometric characters should be considered in the future in order to confirm the existence of geographical variations among these populations.Lutzomyia umbratilis ) Ward & Fraiha (Diptera: Psychodidae é o principal flebotomíneo vetor de leishmaniose tegumentar devido a Leishmania guyanensis Floch (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) ao norte da América do Sul. Populações de L. umbratilis infectadas naturalmente por Leishmania guyanensis podem ser encontradas ao leste do Rio Negro e ao norte do Rio Amazonas. Ao sul do sistema fluvial do Rio Amazonas, somente infecções naturais por tripanosomatídeos não-leishmanióticos têm sido registradas. Visando detectar possíveis variações geográficas em populações naturais de L. umbratilis separadas pelo sistema fluvial Negro-Amazonas, o presente trabalho teve como objetivo principal integrar estudos de taxonomia morfológica e molecular. As coletas foram realizadas no estado do Amazonas: Manaus, Pitinga, Manacapuru e Novo Airão. Foram medidos 46 caracteres morfológicos de 40 larvas de quarto estádio de cada população, e os dados analisados através de análise univariada e multivariada. Os resultados mostraram diferenças altamente significantes entre as populações. Foi realizado a quetotaxia e a descrição da pupa de L. umbratilis. Caracteres da armadura do átrio genital de adultos de Manacapuru e Manaus foram comparados, mostrando ligeiras diferenças qualitativas, e diferenças significantes em relação ao tamanho dos espinhos. Mediante coloração convencional o cromossomo politênico foi evidenciado, mas sem condições de análise das bandas, e o cariótipo com 2n=6 foi observado. Nas análises de isoenzimas foram utilizados 300 espécimes de cada população. Foram testados 12 sistemas enzimáticos em gel de amido e amido-agarose com tampões e coloração específica. A análise de 10 locos enzimáticos mostrou que as freqüências alélicas não demonstraram diferenças significativas, a proporção de locos polimórficos foi igual nas populações. Os resultados do coeficiente F de Wright mostraram que todos os locos apresentaram baixa estruturação gênica. A distância genética foi muito próxima entre as populações, sugerindo que sejam homogêneas. Estudos utilizando outros marcadores genéticos e caracteres morfométricos devem ser realizados a fim de discriminar em mais detalhes as variações geográficas entre essas e outras populações de L. umbratilis